小鼠肝臟rna的抽提純化與鑒定【精品-文庫吧
2024-12-20 09:58 本頁面
【正文】 顯子 實驗原理 ?抽提 RNA的關(guān)鍵在于去除 DNA與蛋白質(zhì) ,常用酸性酚法 。 在酸性條件下苯酚可溶解 DNA而不溶解 RNA,同時酚又是蛋白變性劑 。 利用酸性酚試劑加氯仿共抽提 ,可一步完成細胞的裂解以及蛋白質(zhì)與 RNA的分離 。 最后利用異丙醇沉淀 ,即可獲得純化的總 RNA。 RNA產(chǎn)物的鑒定 ?RNA的純度與含量用紫外分光光度法檢驗 。 ?高純度 RNA的 A260/A280應(yīng)處于 , ?A260與 RNA濃度呈正比 ,1 OD = 40μ g/ml RNA。 ?RNA的完整性可通過電泳檢測 ?RNA為單鏈分子 ,二級結(jié)構(gòu)復雜 ,需先經(jīng)甲酰胺變性 ,再進行甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳 。 ?細胞總 RNA以 rRNA含量最高 ,電泳時可觀察到 18S與 28S rRNA兩條清晰條帶 ,且亮度之比接近 1:2,表明 RNA沒有發(fā)生降解 。 泳道前緣還可觀察到一條較
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