【正文】 .................................. 18 沈陽藥科大學(xué)本科畢業(yè)論文 中文摘要 1 中文摘要 本文確立了南蛇藤中雷公藤紅素的薄層定性分析方法。層析條件為：硅膠GF254，氯仿 甲醇 (7︰ 1)為展開劑。展 槽中上行展開 后 在紫外檢測器 365nm和 254nm下觀測。 采用 高效液相色譜進(jìn)行定量分析。色譜柱 為 Kromasil C18柱（ 200mm . ，5μm ），流動相為 甲醇 ∶1 ％ 醋酸 （ 87∶1 3， v/v）， 等度洗脫，檢測波長為 425nm，流速 ，柱溫 25℃ ， r=， 在 1～ 50μg/mL 范圍內(nèi)線性良好 ，方法學(xué)檢測符合要求。 探索了南蛇藤藥材中雷公藤紅素的硅膠吸附柱層析工藝條件。 對比甲醇 氯仿系統(tǒng)和石油醚 乙酸乙酯系統(tǒng)的洗脫結(jié)果，確定了以石油醚 乙酸乙酯為洗脫系統(tǒng)，洗脫順序為 1︰ 0(2V0)， 5︰ 1(2V0)， 1︰ 1(10 V0)。 用薄層層析條件進(jìn)行檢測，判定含有雷公藤紅素的流分。高效液相檢測可以得到純度 ％的雷公藤紅素。 關(guān)鍵詞： 南 蛇藤； 雷公藤紅素； 薄層層析 。高效掖相色譜；吸附柱層析沈陽藥科大學(xué)本科畢業(yè)論文 英文摘要 2 ABSTRACT Thinlayer chromatography (TLC) of tripterine was studied. TLC condition was: silica gel GF254 as adsorbent, chloroform︰ methanol (7︰ 1) as developer. Tripterine was developed upwards in the separation chamber and detected under 365nm and 254nm. The quantitative analysis of tripterine by HPLC was studied. An external standard method by HPLC with Zorbax C18 column as fixed phase and methano l1% HAc (87∶ 13) as mobile phase was adopted. The detecion wavelength was 425 nm and the flow rate was mL /min. The establishment of concentration and the peak area of the standard equation and samples of the formula, were the methods’ to establish Celastrus in tripterine. Silica gel adsorption chromatography of tripterine was of silica gel adsorption column was petroleum etherethyl acetate. Elution gradient was 1︰ 0(2V0), 5︰ 1(2V0)， 1︰ 1(10 V0). The purity of tripterine obtained was %. Keywords: Celastrus。 tripterine。 Thin Layer Chromatography。 High Performance Liquid Chromatography 。 adsorption column chromatography 沈陽藥科大學(xué)本科畢業(yè)論文 第一章 緒論 3 第一章 緒論 從中藥特別是有毒中藥中尋找抗腫瘤有效成分具 有廣闊的前景。 南蛇藤系衛(wèi)矛科南蛇騰屬植物 ， 分布廣泛，藥性辛溫、 其全草均可入藥，有清熱、祛風(fēng)、除濕、活血、解毒、消腫等功效，常用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腰腿痛、筋骨痛、牙痛、閉經(jīng)、痢疾跌打損傷、腸風(fēng)痔漏、毒蛇咬傷等癥。 現(xiàn)代藥理證實南蛇藤具有強(qiáng)大的抗炎鎮(zhèn)痛和抗菌、抗病毒作用 [1]，更重要的是一些初步的實驗證實其中 的三萜類 成分 雷公藤紅素 具 有較強(qiáng)的抗腫瘤活性， 且抗腫瘤機(jī)理不同于現(xiàn)有抗腫瘤化療藥物，是通過抑制泛素 蛋白酶通道來 阻止腫瘤的生長，是 繼紫杉醇之后又一 高效低毒的抗腫瘤植物藥 [2]。 但在現(xiàn)階段， 獲得雷公藤紅素的主 要方法是從衛(wèi)矛屬植物藥材中提取純化。其 提取物的成分復(fù)雜，除了目標(biāo)成分外，還含有大量的其他成分。而用于藥劑研究及醫(yī)藥生產(chǎn)的原料藥需要高純度的化合物。為了獲得純度高的組分，就需要對提取物進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化 。 雷公藤紅素的理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu) 雷公藤紅素又名南蛇藤素、南蛇藤醇 (Celastrol)，屬于 三萜類化合物， 性質(zhì)穩(wěn)定， 是南蛇藤及雷公藤藥材中的主要有效成分之一。雷公藤紅素主要存在于根皮中，去皮的飲片中雷公藤紅素含量 很 低。 結(jié)構(gòu)式 如下圖 11： 沈陽藥科大學(xué)本科畢業(yè)論文 第一章 緒論 4 圖 11 雷公藤紅素結(jié)構(gòu)式 Structural formula of tripterine 其 在 甲醇 中 溶解 (室溫 )和易溶解 (加熱 )。溶解度大小順序為：甲醇 95%乙醇 無水乙醇 水 丙酮 乙酸乙酯 石油醚，石油醚：乙醚 (1:2)，氯仿 [3]。 最大吸收波長： λ max= 425nm 雷公藤紅素的藥理作用 目前雷公藤紅素的藥理研究比較多，其主要藥理作用有抗炎、抗氧化作用，抗 菌、抗病毒作用，抗生育活性，調(diào)節(jié)自身免疫及抗腫瘤活性。 張麗娟 [4]等報道了南蛇藤素對腫瘤血管抑制作用。通過建立動物腫瘤模型，對南蛇藤素予以實驗治療，結(jié)合免疫組化，檢測其抑制腫瘤率和腫瘤內(nèi)血管密度，以及瘤體 VEGF和 bFGF的表達(dá)的改變。實驗研究發(fā)現(xiàn)南蛇藤素具有明顯抑制 S180肉瘤作用，降低 VEGF、 bFGF的表達(dá)可能是其抑制腫瘤血管形成的機(jī)制之一。 中國科學(xué)院武漢植物園的袁曉副研究員與美國韋恩大學(xué)研究人員合作，利用無毛裸鼠為實驗動物，研究證實雷公藤中含量較高的一種單體成分――雷公藤紅素具有抗腫瘤作用，且抗 腫瘤機(jī)理不同于現(xiàn)有抗腫瘤化療藥物。據(jù)美國三位諾貝爾醫(yī)學(xué) / 生理學(xué)獎獲得者共同提出的新理論，泛素 蛋白酶是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)降解的重要通道，它在腫瘤生長與轉(zhuǎn)移中起著關(guān)鍵性作用。據(jù)細(xì)胞分子學(xué)理論，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、信號轉(zhuǎn)移、基因轉(zhuǎn)錄和凋亡等均由蛋白酶負(fù)責(zé)降解。故抑制泛素 蛋白酶通道即可阻止腫瘤的生長。根據(jù)上述新理論，美國一些制藥公司率先開發(fā)出“蛋白酶抑制劑”類全新抗癌藥物，而且在臨床使用后療效良好 [5,6,7]。 雷公藤紅素研究進(jìn)展 1936年趙承暇等首次發(fā)現(xiàn)雷公騰紅素， 1998年 WeiHe[8]等報道了雷公藤紅 素類似物的合成工藝，而成熟的雷公藤紅素合成工藝仍沒有報道。目前獲得雷公藤紅素的主要方法是從衛(wèi)矛屬植物藥材中提取純化。 袁曉 [9]等報道了從毛枝南蛇藤根皮中提取雷公藤紅素的工藝。將南蛇藤根皮用丙酮冷浸，回收溶劑，所得的浸膏用氯仿回流提取，將所得的氯仿提取液再進(jìn)行下一步的純化。苗抗立 [10]對雷公藤根皮中