核酸分析技術(shù)ok(1)-文庫吧
2025-04-22 01:01 本頁面
【正文】 95 修飾的低熔點 / 凝點瓊脂糖 25~35 63~65 35 65 超低熔點 8~15 40~45 低黏性低熔點瓊脂糖 25~30 70 38 85 30 75 不同類型瓊脂糖的性質(zhì) 電泳緩沖液 ? 常用三種緩沖液 Tris硼酸 (TBE)、 Tris乙酸 (TAE)、 Tris磷酸 (TPE) ? TBE與 TPE： 緩沖容量高， DNA分離效果好，但 TPE在DNA片段回收時含磷酸鹽濃度高，容易使 DNA沉淀 ? TAE： 緩沖容量低，但價格較便宜，因而推薦選用 TAE。緩沖液中的 EDTA 可螯合二價陽離子，從而抑制 DNA酶的活性，防止 PCR擴增產(chǎn)物降解 瓊脂糖凝膠電泳分離 DNA 加熱后 加熱前 1. 凝膠制備 瓊脂糖凝膠電泳分離 DNA 2. 上樣 三個作用： 1）增加樣品密度保證 DNA沉入加樣孔內(nèi)； 2）使樣品帶有顏色便于簡化上樣過程； 3）其中的染料在電場中以可以預(yù)測的泳動速率向陽極遷移。 核酸電泳的上樣緩沖溶液 6 凝膠載樣緩沖液 類型 6 緩沖液 貯存溫度 I %溴酚藍 4℃ %二甲苯氰 FF 40% (m/V)蔗糖水溶液 II %溴酚藍 室溫 %二甲苯氰 FF 15% Ficoll(Type400)水溶液 III %溴酚藍 4℃ %溴酚藍 %二甲苯氰 FF 30%甘油水溶液 IV 4℃ 40% (m/V)蔗糖水溶液 核酸電泳的指示劑 ? 指示劑：溴酚蘭、二甲苯青 ? 溴酚蘭 ：在堿性液體中呈紫蘭色，電泳中，溴酚蘭的遷移率與雙鏈線性 DNA片段 ? 二甲苯青： 水溶液呈蘭色，電泳時，其遷移速率與雙鏈線性 DNA大致相當(dāng) 瓊脂糖凝膠濃度 % 1% % 2% 遷移率 1Kb 瓊脂糖凝膠濃度 1% % 遷移
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