sds聚丙烯酰胺凝膠電泳-文庫吧
2025-04-20 13:13 本頁面
【正文】 G1=－ ＋ － － ＋ ＋ － (2) ? 這里的 X1, X2, X3, X4, X5 和 X6分別代表區(qū)間 [18,123]， [31,140]， [35,150]， [90,118]，[90,151]和 [95,135]的用 RNAfold軟件計算的最低自由能（計算溫度參數(shù)設(shè)為 30℃ ）。 ? 對于每個新數(shù)據(jù)，為了預(yù)測該基因是否能在酵母中高效表達（表達水平大于 100 mg/L），可先計算這 6個區(qū)間的最低自由能，然后運算上述的 1,000個判別函數(shù)，來評估該基因高效表達的概率。如果在這 1,000次的判別分析中，有 500次或以上的 HEG1大于 LEG1，那么這個外源基因為一個表達水平大于 100 mg/L的基因，否則就是個表達水平低于 100 mg/L的基因。 外源基因在畢赤酵母表達系統(tǒng)中高效表達預(yù)測的網(wǎng)頁服務(wù)器 分析流程： 1. 在“ sequence”方框中輸入由目的基因末端 100bp及其后面的載體 100bp組成的 200bp序列片段； 2. 點擊底下的“ Evaluation”按鈕，在“ Evaluation”方框中顯示預(yù)測的結(jié)果； 3. 如果結(jié)果顯示低于 ，則可點擊“ Design”這個按鈕，則顯示根據(jù)密碼子使用改造后的序列。 用該軟件來預(yù)測 NGAL在畢赤酵母高效表達的概率 ? 截取 NGAL cDNA 3‘末端最后 100bp堿基（包括終止密碼子 TGA），與 pPIC9載體 EcoR I位點后 100bp堿基（包括 EcoR I位點）組成 200bp的序列片段， ? 用 RNAfold軟件計算 [18,123], [31,140], [35,150], [90,118], [90,151]和 [95,135] 六個區(qū)間的最低自由能（ RNAfold的溫度參數(shù)設(shè)為 30℃ ）。 ? 其數(shù)值運算于 1,000個判別函數(shù)，結(jié)果表明 NGAL在畢赤酵母中高效表達的概率為 ，雖然 ，但我們?nèi)韵胪ㄟ^表達這個基因來驗證酵母高效表達的數(shù)學模型。 ? 學習 SDSPAGE測定蛋白質(zhì)分子量的原理 ? 掌握垂直板電泳的操作方法 ? 了解蛋白印跡技術(shù)原理和方法 實驗?zāi)康? 第二部分，畢赤酵母蛋白表達產(chǎn)物的 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分離分析鑒定 ? 帶電質(zhì)點在電場中向帶有異相電荷的電極移動，這種現(xiàn)象稱為電泳 。 ? 電泳使用不同的支持介質(zhì)，早期有濾紙、玻璃珠、淀粉粒、纖維素粉、海砂、海綿、聚氯乙烯樹脂；以后有淀粉凝膠、瓊脂凝膠、醋酸纖維素膜，現(xiàn)在則多用聚丙烯酰胺（ PAGE）和瓊脂糖凝膠。 電泳的概念和分類 聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺 (acrylamide， 簡稱 Acr)和交聯(lián)劑 N,N甲叉雙丙烯酰胺(N,Nmethylenebisacylamide ， 簡稱 Bis)在加速劑 N,N,N?,N? 四甲基乙二胺 (N,N,N?,N?tetramethyl ethylenedia mine， 簡稱 TEMED)和催化劑過硫酸銨 (ammonium persulfate (NH4)2S2O8， 簡稱 AP)或核黃素 (ribofavin即 vita min B2， C17H20O6N4)的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠 ， 以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamide gel electrophoresis， 簡稱 PAGE)。 單體丙烯酰胺和 N,N甲叉雙丙烯酰胺的聚合 催化劑 Acr Bis ? 聚丙烯酰胺凝膠電泳 (聚丙烯酰胺凝膠中主要取決于三種因素：蛋白大小，形狀和電荷。 ? SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 :是在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中引進 SDS（十二烷基硫酸鈉）。 ? 1967年， Shapiro等人首先發(fā)現(xiàn)，如果在聚丙烯酰胺凝膠電泳系統(tǒng)中加入一定量的十二烷基硫酸鈉（ SDS），則蛋白質(zhì)分子的電泳遷移率主要取決于蛋白質(zhì)的分子量大小。 SDSPAGE的原理 SDS的分子式 ? SDS是一種陰離子去垢劑， SO32帶負電荷。因此蛋白質(zhì)在含有強還原劑的 SDS溶液中與 SDS分子結(jié)合時，可形成 SDS蛋白質(zhì)復(fù)合物。這種復(fù)合物由于結(jié)合大量帶負電荷的SDS，好比蛋白質(zhì)
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