微生物的保藏技術(shù)(已改無(wú)錯(cuò)字)
2023-01-20 04:39:13 本頁(yè)面
【正文】 b、熔封安瓶管：若直接貯存于氣相液氮中（－ 150℃ ～－170℃ ）時(shí)，則不需熔封。 c、檢查安瓶管是否熔封良好：即在 4℃ 下，將熔封安瓶管在適當(dāng)?shù)纳厝芤褐薪?2～ 30分鐘后，觀察有無(wú)色素進(jìn)入安瓶。 d、緩慢冷卻：將熔封安瓶管置于小罐中，然后用液氮?dú)庖约s 1℃/min 的速度冷卻至－ 25℃ 左右，也可在－20℃ ～－ 25℃ 的冰箱內(nèi)緩慢冷卻 30～ 60min。 e、速冷：最后浸入液氮中快速冷卻至－ 196℃ 。 這種方法適用范圍廣，而且是目前常用的較理想的，繁而高效。保藏期 2~3年，甚至長(zhǎng)達(dá) 9年。 低溫冰箱保存法 ? 一、適用范圍 － 20℃ 、－ 50℃ 或－ 85℃ ? 二、保藏方法 低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過(guò)多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用 φ5mm的玻璃珠來(lái)吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。 干冰保存法 ? 一、適用范圍 － 70℃ 左右 二、保藏方法 將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。 菌種保藏的共同注意點(diǎn)： ? 嚴(yán)格的無(wú)菌操作； ? 用于保存的微生物在生長(zhǎng)前必須處于它生長(zhǎng)良好的狀態(tài)； ? 保藏過(guò)程中要防止退化的發(fā)生（不同的保藏方法，分別有不同的保存時(shí)間。） 注意事項(xiàng) ? ①要選擇適于冷凍干燥的菌齡細(xì)胞； ? ②要選擇適宜的培養(yǎng)基，因?yàn)槟承┪⑸飳?duì)冷凍的抵抗力，常隨培養(yǎng)基成分的變化而顯示出巨大差異； ? ③要選擇合適的菌液濃度，通常菌液濃度越高，生存率越高，保存期也越長(zhǎng)； ? ④最好在菌液內(nèi)不添加電解質(zhì)（如食鹽等）； ? ⑤可在菌液內(nèi)添加甘油（甘油管冷凍保藏法）等保護(hù)劑，以防止在冷凍過(guò)程中出現(xiàn)菌體大量死亡的現(xiàn)象。同樣，也可添加各種糖類(lèi)、去纖維血液和脫脂牛乳等具有良好保護(hù)效果的溶劑，但對(duì)有些微生物而言，不加保護(hù)劑時(shí)更有效。 ? ⑥原則上應(yīng)盡快進(jìn)行冷凍處理，但當(dāng)加入保護(hù)劑時(shí)，可靜置一段時(shí)間后再進(jìn)行處理。 ? ⑦就動(dòng)物細(xì)胞而言，應(yīng)在－ 20℃ 范圍內(nèi)以 1℃/min 左右的速度緩慢降溫，此后必須盡快降到貯藏溫度；而對(duì)絕大多 數(shù)微生物而言，則不必如此，如結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜的原蟲(chóng)則可在－ 35℃ 范圍內(nèi)進(jìn)行緩慢降溫，而噬菌體則必需采用上述的二階段法進(jìn)行冷凍 ； ? ⑧若進(jìn)行長(zhǎng)期保存，則貯藏溫度越低越好； ? ⑨取用冷凍保存的菌種時(shí)，應(yīng)采取速融措施，即在 35～ 40℃ 溫水中輕輕振蕩使之迅速融解。而就厭氧菌來(lái)說(shuō)，則應(yīng)選擇靜置融化的措施。當(dāng)冷凍菌融化后，應(yīng)盡量避免再次冷凍，否則菌體的存活率將顯著下降。 ? 總之，首先保持原菌優(yōu)良性狀長(zhǎng)期穩(wěn)定，同時(shí)考慮方法的通用性、操作的簡(jiǎn)便性和設(shè)備的普及性。 三、干燥保藏法 沙土管保存 冷凍真空保藏 沙土管保存 主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌種的保藏，如：芽孢
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