【正文】 ? 過(guò)程： EFTuGTP + 氨基酰 tRNA 三元復(fù)合物 EFTu + GTP A位 EFTs EFTuEFTs GTP 取代 (恢復(fù)活性，結(jié)合下一個(gè)氨基酰 —tRNA） EFTuGDP EFTuGTP （ 2）轉(zhuǎn)肽 a 肽酰轉(zhuǎn)移酶 （ peptidyl transferase ） 位于核糖體大亞基，催化肽鍵生成； b 過(guò)程： ? 肽基轉(zhuǎn)移酶催化， P位 tRNA的甲酰甲硫氨基或肽基轉(zhuǎn)移給A位上進(jìn)入的氨基酰 tRNA，形成肽鍵連接， ? 生成的二肽酰 tRNA占據(jù) A位， ? P位的空載 tRNA，將迅速?gòu)暮颂求w脫落。 （ 3）移位 ?肽鍵生成后，核糖體沿 mRNA 向前移動(dòng)一個(gè)密碼子的距離。 a EFG有移位酶活性 ，催化 A位二肽酰 tRNA進(jìn)入 P位，同時(shí)核糖體沿 mRNA移動(dòng)一個(gè)密碼子， A位再次空缺，等待第 3個(gè)氨基酰 tRNA進(jìn)位。 b 伴隨 GTP水解， EFG釋放，等待下一個(gè)三元復(fù)合物進(jìn)入。 c 重復(fù)上述循環(huán)，肽鏈在 N端加入一個(gè)氨基酸，使 P位依次出現(xiàn) 3肽、 4肽等。 ? 每次循環(huán)需要三個(gè)延伸因子： EFTu、 Ts、 EFG和 2分子的 GTP，在 mRNA密碼子指導(dǎo)下，肽鏈延伸一個(gè)氨基酸。 3 終止 ? 肽鏈合成的終止包括：肽鏈釋放， tRNA逐出，核糖體與 mRNA解聚。 終止密碼 UAA,UGA,UAG； 釋放因子 (releasing factor,RF) 釋放因子 MW GTP結(jié)合能力 生物學(xué)活性 RF1 36000 識(shí)別 UAA和 UAG RF2 38000 識(shí)別 UAA和 UGA RF3 46000 + 刺激 RF1， RF2的活性 , 與 GTP結(jié)合，使轉(zhuǎn)肽酶構(gòu)象改變，發(fā)揮酯酶活性，水解多肽、脫離 tRNA 終止過(guò)程 a. RF 作用于 A 位點(diǎn)（ P 位被肽酰 tRNA 所占據(jù)）， 識(shí)別終止密碼子 ； b. RF 作用改變 肽基轉(zhuǎn)移酶 構(gòu)象，從而改變肽基轉(zhuǎn)移特性，發(fā)揮水解酶作用， 將肽鏈從結(jié)合在核糖體上的 tRNA的CCA末端上水解下來(lái)， mRNA與核糖體分離， tRNA脫落 。 c. RF3 與 GTP 結(jié)合為肽基轉(zhuǎn)移及隨后的 核糖體釋放 提供能量。 d. 同時(shí)核糖體在 IF3作用下，解離出大、小亞基。 ? 同時(shí)核糖體在 IF3作用下，解離出大、小亞基。 ? 解離后的大小亞基又重新參加新肽鏈合成，循環(huán)往復(fù)，所以多肽鏈在核糖體上的合成過(guò)程又稱(chēng) 核糖體循環(huán) 。 ? mRNA翻譯的多肽鏈沒(méi)有功能，稱(chēng)為 新生蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)前體 ，需要經(jīng)過(guò) 加工改造 才能成為有功能的蛋白質(zhì)。 ? mRNA的信息閱讀： 5’端向 3’端， ? 肽鏈延伸：從 N端到 C端。 第六節(jié) 真核生物的蛋白質(zhì)生物合成過(guò)程 1 合成起始 Euk機(jī)制與 ， a. 核糖體較大， 80S（ 60S + 40S） ； b. mRNA 是單順?lè)醋樱? c. mRNA 有 5’帽子結(jié)構(gòu)，起始識(shí)別需要起始因子 eIF eIF4E的幫助； d. MettRNAMet不甲?；? e. 有較多的起始因子。 f. 形成小亞基復(fù)合物的順序不同于原核的：先形成 40S. ，然后再加入 mRNA。 Euk的起始因子 起始機(jī)制 a 對(duì) AUG的識(shí)別： ? 核糖體首先 識(shí)別 5?端甲基化的帽子結(jié)構(gòu) ? 內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn) (internal ribosome entry site, IERS)，位于 5’UTR， 25bp，選擇起始點(diǎn)。 ? 核糖體結(jié)合位點(diǎn)的保守 Kozak順序： GCC(A/G) CCAUGG b Euk 蛋白質(zhì)合成起始中的重要參與者： MettRNAi 核糖體 AUG上游序列 eIf2 eIF4F 8 0 S GTP e I F 6 e I F 2 GTP 6 0 S + 4 0 S e I F 2 e I F 3 M e t tR N A eI F 2 β eI F 2 β 〔 40S eI F 3 〕 ( 天然的 4 0 S) GD P e I F 2 GTP M et tR N A 〔 40S eI F 3 eI F 2 GTP M et tR N A 〕 ( 4 0 S 前起始復(fù)合體 ) eI F 1 m R N A 4 B 4 A C B P ( 4 E + 4 F ) e I F 4 〔 40S eI F 3 4A 4B eI F 2 GTP M et tR N A 〕 ( 4 0 S 起始復(fù)合體 ) 移動(dòng)到 AUG 6 0 S eI F 6 GTP e I F 5 G D P + P i e I F 3 (eI F 2 G D P) I F 6 E I F 5 , 4 A , 4 B 8 0 S m R N A M et tR N A ( 8 0 S 起始復(fù)合體 ) 圖 15 19 真核生物蛋白質(zhì)合成中 80S 起始復(fù)合物的形 三元復(fù)合物 48S起始復(fù)合物 43S前起始復(fù)合物 80S起始復(fù)合物 2 延伸 ? 與 Prok 相似，進(jìn)位、成肽和轉(zhuǎn)位三個(gè)步驟。 ? 兩者區(qū)別在于延伸因子體系的不同。 延伸因子 亞基 GTP結(jié)合能力 生物學(xué)活性 eEF1 至少 αβγδ四個(gè)亞基 + eEF1α與 GTP結(jié)合，結(jié)合氨基酰 tRNA（延伸 tRNA）進(jìn)入核糖體A位與 mRNA結(jié)合 eEF2 + 依賴(lài)于 GTP水解的移位酶 ,使肽基 tRNA從核糖體的 A位向 P位移動(dòng) eEF3 參與維持翻譯的準(zhǔn)確性 3 終止 ? 釋放因子 eRF, ? 識(shí)別三種終止密碼子 UAA、 UAG、 UGA。 ? 終止機(jī)制與 Prok相同： ? 識(shí)別終止密碼子 ； ? 肽基轉(zhuǎn)移酶 構(gòu)象改變，發(fā)揮水解酶作用，使得 肽基 tRNA水解， ? 肽基轉(zhuǎn)移，核糖體與 mRNA解聚，肽鏈釋放， tRNA逐出。 4 準(zhǔn)確翻譯的機(jī)制 氨基酸與 tRNA間的負(fù)載專(zhuān)一性 (1) 氨酰 tRNA合成酶（ AARS）對(duì)氨基酸的特異識(shí)別與結(jié)合 (2) AARS 的介導(dǎo)下 tRNA 的副密碼子對(duì) aa 的準(zhǔn)確負(fù)載 反密碼子對(duì)密碼子的準(zhǔn)確識(shí)別 搖擺假說(shuō) 反密碼子的堿基修飾 對(duì)第一個(gè) Met （ AUG）的準(zhǔn)確起譯 (1) Prok. SD序列與 16S rRNA 3’端的準(zhǔn)確識(shí)別 (2) Euk. eIF4F 對(duì) 5’ 帽子的準(zhǔn)確識(shí)別及對(duì) GCC(A/G) CCAUGG 的掃描 (3) IF2（ eIF2）和 Tu（ EF1）酶的專(zhuān)效性 Φ Prok. IF2與 f