第二章：dna與染色體(已改無錯字)
2022-09-12 23:34:31 本頁面
【正文】 基脫氨反應(yīng) b、核苷酸脫嘌呤反應(yīng) (二 ) 堿基的切除修復(fù) （ baseexcision repair） （ a） DNA糖基化酶切除損傷的堿基產(chǎn)生無堿基酸 （ b）無堿基核酸內(nèi)切酶無堿基酸處切開產(chǎn)生切口。 （ c） DNA聚合酶 Ⅰ將無堿基酸切除并填補(bǔ)缺口。 （ d） DNA連接酶連接切口。 AP位點(diǎn) （三）核苷酸 的切除修復(fù) DNA解螺旋酶 （五）重組修復(fù) 又叫復(fù)制后修復(fù)：發(fā)生在復(fù)制之后。復(fù)制時，跳過損傷部位，新鏈產(chǎn)生缺口由母鏈彌補(bǔ)，然后用新合成的序列補(bǔ)上母鏈空缺。原損傷部位并沒有切除 ,但在后代逐漸稀釋。 （六） DNA的直接修復(fù) 形成嘧啶二聚體 光復(fù)合酶結(jié)合于 損傷部位 酶被可見光激活 修復(fù)后酶被釋放 DNA紫外線損傷的光復(fù)合酶修復(fù) （七） SOS反應(yīng)和誘導(dǎo)修復(fù)（易錯修復(fù)） ? SOS反應(yīng)： 細(xì)胞 DNA受到嚴(yán)重?fù)p傷或 DNA復(fù)制系統(tǒng)受到抑制的緊急狀態(tài)下，為求生存而出現(xiàn)的應(yīng)急反應(yīng)。 ? SOS反應(yīng)包括 : 避免差錯的修復(fù)能力增強(qiáng) 誘導(dǎo)產(chǎn)生無校正功能的 DNA聚合酶合成 抑制細(xì)胞分裂 ? SOS反應(yīng)是生物 在不利環(huán)境中求得生存 的一種基本功能。對原核生物它產(chǎn)生高變異，對高等動物則是致癌的。 五、 DNA 重組與轉(zhuǎn)座 DNA重組 概念： 是指由于不同 DNA鏈的斷裂和連接而產(chǎn)生的 DNA片段的交換和重新組合，形成新的 DNA分子的過程。 意義： 重組是遺傳學(xué)的靈魂，沒有重組就沒有生物的進(jìn)化；沒有重組也就沒有現(xiàn)代的分子克隆技術(shù)。 DNA重組的類型 同源重組 （ Homologous Rebination） 位點(diǎn)特異性重組 （ Sitespecific Rebination） 一、概述 定義：兩個 DNA分子同源序列（ 指從某一共同祖先經(jīng)過趨異進(jìn)化而形成的不同序列 。 ）之間進(jìn)行的重組 條件： （ 1）兩個 DNA分子有同源序列 （相關(guān)的酶可以用任何一對同源序列為底物） （ 2）兩個 DNA分子必須緊密接觸 發(fā)生： 真核生物 : 非姐妹染色單體交換相對應(yīng)的區(qū)域。 原核生物 : 依賴 RecA蛋白（重組蛋白類），并形成 Holliday 結(jié)構(gòu)。（見下圖） 同源重組 （ Homologous Rebination） 切口 交叉 封口 鏈位移 彎曲 兩臂旋轉(zhuǎn) 切開相反鏈 切開同一鏈 Holiday模型 （ 1964年，美國） 二、大腸桿菌同源重組的分子基礎(chǔ) （一） RecA 作用：可促進(jìn)單鏈同化或單鏈吸收 RecA具有使 DNA單鏈置換雙鏈中同源鏈的能力 單鏈同化發(fā)生的三個條件 （ 1）其中一個 DNA必須存在單鏈區(qū) （ 2）其中一個 DNA必須有一個自由 3’末端 （ 3）此單鏈區(qū)和 3’末端必須位于兩分子之間互補(bǔ)的區(qū)域內(nèi) （二） RecBCD復(fù)合體 酶的活性： （ 1）核酸酶 （ 2）解旋酶 （ 3） ATPase 作用：在 Chi位點(diǎn)（ RecBCD 的靶序列 ）處產(chǎn)生含 3ˊ游離 未端單鏈 .（見下圖） （三） Chi位點(diǎn) —— RecBCD識別的靶位點(diǎn) 539。 GCTGGTGG 339。 339。 CGACCACC 539。 是重組頻率較高的部位 5~10 kb有一個拷貝 Holliday 結(jié)構(gòu)的形成： 1. 同源序列排列在一起； 2. 酶切。通過核酸酶和 RecBCD蛋白復(fù)合體的作用在一對同源 DNA上產(chǎn)生切口； 。含有 3’端切口的 ssDNA（ single strand DNA）被 recA蛋白包裹形成 recA蛋白 ssDNA細(xì)絲； RecAssDNA 細(xì)絲尋找相對的 DNA雙螺旋上的相應(yīng)序列。 4. 游離端交叉連接，形成 Holliday 結(jié)構(gòu) DNA。 6. 空間重排。十字型兩臂旋轉(zhuǎn) 180度 7. 解離 (兩種不同方式 ) 8. 修補(bǔ)連接 基因敲除技術(shù) ( Gene knockout technology ) —— 同源重組的應(yīng)用 是 80年代后期，應(yīng)用 DNA同源重組原理發(fā)展起來的一門新技術(shù)。是指對一個結(jié)構(gòu)已知但功能未知的基因，從分子水平上設(shè)計實驗，將該基因去除，或用其它順序相近基因取代，然后從整體上觀察實驗動物，推測相應(yīng)基因的功能。 位點(diǎn)特異性重組 （ Sitespecific Rebination） 不依賴于 DNA順序的同源性，而依賴于能與某些酶相結(jié)合的特異的 DNA序列的存在。 整合的過程 （ 1）具有對特異性DNA強(qiáng)烈親和力的 Int與 attP和 attB位點(diǎn)結(jié)合。 （ 2） Int的拓?fù)洚悩?gòu)酶活性，使兩條雙鏈
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