【正文】 本項目無病毒組培苗繁育技術(shù)參數(shù)為：試管莖尖增殖系數(shù)達到5—6試管莖苗生根率大于70%試管苗入土移栽成活率大于70%蘋果的病毒種類較多，依據(jù)國家技術(shù)監(jiān)督局1991年發(fā)布的《蘋果病毒母本樹和苗木檢疫規(guī)程》對蘋果脫毒苗木必須進行檢測。蘋果病毒分為潛隱性病毒和非潛隱性病毒。我國規(guī)定蘋果無毒苗必須脫去的潛隱性病毒是：“褪綠葉斑病毒”、“莖溝病毒”、“莖痘病毒”；非潛隱性病毒是“蘋果 銹果病毒”、“花葉病毒”、“綠皺病毒”。脫去病毒的檢測方法主要有：酶聯(lián)免疫檢測和指示植物檢測。蘋果病毒病脫除方法主要有熱處理法、莖尖培養(yǎng)法、熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)法、莖尖嫁接以及應(yīng)用病毒抑制劑等方法。在本項目中將采用熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)法進行蘋果苗脫毒。即將待脫毒蘋果品種盆栽苗置于37177。1℃恒溫下處理28天，—，以生產(chǎn)無病毒試管苗木。對生產(chǎn)的試管苗采用酶聯(lián)免疫吸附法（Elisa）進行病毒檢測。酶聯(lián)免疫吸附法是用兩層病毒抗體夾層吸附，從樹枝上剝下樹皮或葉，榨出汁液，提純病毒。將純化病毒注入家兔制造抗血清，制取純化的r球蛋白，吸附于塑料吸附盤中96個小穴內(nèi)(Microtiterplate)，r蛋白與抗體統(tǒng)合后，與堿性磷酸酶相結(jié)合，從吸附盤顯色中表現(xiàn)病毒的存在與否。具體方法是：，加入相當于嫩枝2倍體積的磷酸緩沖液(%牛血清蛋白和2%PVP)，研磨后低速離心，取粗提液再稀釋到10倍，每品種處理4孔。以只加磷酸緩沖液孔為對照。用DG3022型酶聯(lián)免疫檢測儀測樣。指示植物檢測利用指示植物：蘇俄蘋果、光輝、弗吉尼亞小蘋果、金冠、國光等做為指示植物。采用“二重芽接法”砧木選用傳毒的“八棱海棠”在檢測芽的上方1—2cm處搭接帶雙芽的指示植物，根據(jù)指示植物的典型病毒癥狀表現(xiàn)，判斷待檢品種的病毒種類：。（1）從國家種質(zhì)資源圃引進10個無毒蘋果品種以優(yōu)良紅富士為主栽品種，以優(yōu)良新紅星系、嘎拉系為輔，脫毒授粉樹比例為8:1。（2）在隔離條件下，將土壤消毒后盆栽脫毒苗，待新梢生長到30—50cm時，采集1—3mm莖尖做為外殖體進行接種。采用甘農(nóng)大創(chuàng)建的綜合無傷消毒法：外殖體材料→流水沖洗10分鐘→70％酒精30s→蒸餾水沖洗2遍→％升汞5—8分鐘→在超凈工作臺上用無菌水沖泡3遍→剝?nèi)∏o尖→轉(zhuǎn)接在附加一定激素的MS基本培養(yǎng)基上。（3）培養(yǎng)條件：光照3000LX、光周期16:8或全光照、相對濕度65％；（4）獲得無菌外殖體材料后，篩選、研究叢生芽繼代高效增殖的激素配組，提高繁殖系數(shù)。在獲得大量3—5cm叢生芽后，轉(zhuǎn)入1/2大量元素的MS生根培養(yǎng)基進行生根培養(yǎng)。（5）待生根試管苗長到6cm左右時，在連棟智能溫室苗床進行光培練苗，在一定時問內(nèi)光強從5000LX升高到15000LX，相對濕度從95％逐漸下降到70％；通過光培練苗后在營養(yǎng)缽中進行移栽過渡。（6）用不帶病毒的山荊子(Maius baccata )種子層積處理后點播在營養(yǎng)缽中，待無毒砧木苗生長到10cm時用脫毒試管苗的微芽嫁接。（7）嫁接苗在外界平均溫度穩(wěn)定在15℃時在隔離大田苗圃移栽。（8）將溫室中部分營養(yǎng)缽中自根試管苗，在隔離網(wǎng)室中移栽獲得建原原種母本園采穗圃的苗木。(為建無毒采穗圃提供苗木)。（1）選擇水源干凈、光照充足、土壤蔬松、周邊300m無梨樹(梨苗圃和100m內(nèi)無蘋果園(蘋果苗圃)的熟地建立原種無毒苗圃。（2）苗圃地起垅覆膜，垅寬40cm，在氣溫穩(wěn)定在15℃時，在垅上打孔。每垅栽植兩行在溫室己微芽嫁接的營養(yǎng)袋苗。株行距采用寬、窄行；株距12cm，窄行距20cm，寬行距70cm，垅中心線距90cm。每畝定植11600株。（3）苗圃地的管理：在接穗生長到30cm左右時斷垂直根；及時防治病蟲害。（4）嫁接工具、修技刀、剪的消毒：在無毒苗圃使用前用消毒液或70%的酒精進行消毒。嚴格禁止在修剪普通梨、蘋果樹后的工具，末經(jīng)消毒又修剪、嫁接脫毒苗。（5）土肥水管理：同普通育苗圃。（1）選擇水源干凈、光照充足、土壤疏松、周邊300m無梨樹和100m內(nèi)無蘋果樹、前三年內(nèi)沒有育過梨和蘋果苗的耕作地，建立原種無毒母本園。（2）母本園最好采用南北行向或依地形而定(以長邊為行向)，株行距為24m；每個脫毒品種一行，授粉樹按1:8配置；品種比例為優(yōu)質(zhì)紅富士系占70%、三紅優(yōu)系占20%、新嘎拉系占10%。（3）定植采用豐產(chǎn)溝栽法。（4）苗木定植后及時防治病蟲害，特別注意防治葉蟬類昆蟲傳毒。（5）剪取接穗時嚴格注意工具消毒，防止接觸傳毒。（6）土、肥、水管理同普通果園。 。（1）選擇水源干凈、光照充足、土壤疏松、周邊200m無梨樹和100m內(nèi)無蘋果園的地塊建立生產(chǎn)用無毒苗圃。（2）苗圃地最好采用寬、窄行起垅點播或平畦條播不帶病毒的山荊子（Maius baccata ）層積處理種子，用無毒母本采穗圃的芽進行嫁接。隨采隨用嚴防品種接穗混雜。苗圃地嫁接后及時繪制品種圖。（3）苗圃地的管理：及時防治病蟲害，每次使用前注意嫁接工具、修技刀、剪的消毒。（4）其它管理同普通育苗圃。（5）苗木出圃時嚴格注意品種純度和授粉樹搭配并將苗木分級、掛牌。第八章 土建工程及設(shè)備方案。（1）農(nóng)業(yè)部農(nóng)計函[2004]421號《關(guān)于天津等33個園藝作物良種繁育基地建設(shè)項目可行性研究報告的批復》。（2）《甘肅省莊浪縣蘋果無病毒良種苗木繁育基地建設(shè)項目可行性研究報告》。（3）甲方提供的設(shè)計要求，現(xiàn)場地形圖及工程地質(zhì)勘察報告。（4）國家、建設(shè)部頒布的有關(guān)建筑、結(jié)構(gòu)、抗震、給排水、采暖、通風、電氣工程設(shè)計規(guī)范、規(guī)程等。本項目土建及田間工程安排詳見下表：序號項目名稱單位建筑面積結(jié)構(gòu)類型一土建工程1組培車間m2296單層磚木結(jié)構(gòu)，磚條基2可控溫室m21496輕鋼骨架中空PC板，連體式拱型溫棚3網(wǎng)棚m21056砼立柱網(wǎng)棚4業(yè)務(wù)用房m2198單層磚混結(jié)構(gòu)5鍋爐房m2101單層磚混結(jié)構(gòu)6庫房（2棟）m2392單層夾芯板輕鋼結(jié)構(gòu)小計m23539二田間工程1機井眼22節(jié)水灌溉畝450苗圃800畝，采穗圃50畝3水池個104田間道路m245005供電線路m1600小計6562。林木組織培養(yǎng)，就是用無菌操作方法，培養(yǎng)林木的一個離體器官、組織和細胞，使其再生成無數(shù)根芽齊全、遺傳性狀一致的小植株，以達到快速繁殖名特優(yōu)新品種的高新技術(shù)。組培車間是完成這一工作的場所。根據(jù)林木組織培養(yǎng)的工藝要求，組培車間土建安排的使用房間為：洗滌消毒室→實驗室→天平室、藥品庫→緩沖間→接種室→培養(yǎng)室。其各功能用房土建設(shè)計要求是：（1）洗滌消毒室：洗滌玻璃儀器、培養(yǎng)瓶及用具的地方，內(nèi)設(shè)洗滌槽。并設(shè)置消毒滅菌設(shè)備，進行培養(yǎng)基、衣物、用具等的高壓滅菌工作。（2）實驗室：配制及分裝培養(yǎng)基的地方，內(nèi)設(shè)洗滌盆、電冰箱、培養(yǎng)基煮鍋、大型白磁磚工作桌、存放配置好母液及玻璃儀器的櫥柜、離子交換純水器及蒸鍋水器、培養(yǎng)瓶等。（3）天平室：設(shè)置水平的瓷磚面工作臺，放置天平。（4）藥品庫：存放配制培養(yǎng)基及清潔消毒用藥的庫房。（5）接種間：也稱無菌操作間，內(nèi)設(shè)超靜工作臺及相應(yīng)設(shè)備。要求干爽安靜、清潔明亮，設(shè)置紫外滅菌燈，使室內(nèi)保持良好的無菌狀態(tài)。（6）培養(yǎng)室：是儲存瓶子苗的地方，組培苗在培養(yǎng)室中生長、分化根直到移至苗圃。內(nèi)設(shè)培養(yǎng)架及各種儀器設(shè)備。組培車間工程為單層磚木結(jié)構(gòu)，建筑面積296m2，外設(shè)全封閉玻璃緩沖走廊，地面采用水磨石地面，內(nèi)設(shè)白瓷磚貼面洗滌盆及工作臺面，房內(nèi)作硬塑料板吊頂。采用木門及鋁合金密閉窗。基礎(chǔ)采用磚條形基礎(chǔ)。林木工廠化育苗的基本物質(zhì)技術(shù)條件之一，是生產(chǎn)環(huán)節(jié)中必須具備日光溫室，它能夠充分利用自然光熱資源，打破自然季節(jié)與氣候條件的約束，消除外界環(huán)境影響而進行高度集約化生產(chǎn)，是林木育苗工程的主體結(jié)構(gòu)。（1）育苗日光溫棚平面設(shè)計。為了充分滿足苗木的集約化生產(chǎn)和便于在棚內(nèi)設(shè)置遮蔭、保溫、噴灌等設(shè)備，以及便于人工管理和機械運輸作業(yè)，溫棚應(yīng)有充分的空間與面積，根據(jù)工藝要求，本項目采用連跨式拱型PC板溫棚，共5跨，，，，建筑面積1496m2。（2）大棚覆蓋材料的選擇。本項目大棚外覆材料采用8mm厚中空PC板，具有強度高、透光率、彈性、自重輕、透明、溫度適應(yīng)范圍寬等特點，其可見光透光率可達89%，是國內(nèi)大棚普通采用的一種新型材料，其使用年限可達15年以上（3）鋼結(jié)構(gòu)選型。本工程立柱采用90502矩形管，桁架上下弦采用50302矩形，主拱桿采用50502矩形鋼管，副拱桿采用303015方鋼管，所有金屬材料均采用熱鍍鋅防腐措施，天溝采用厚度為2mm熱鍍鋅板折壓成形，鋁合金屋脊。（4）溫室基礎(chǔ)：溫室四周為磚條形基礎(chǔ)，大棚鋼柱基礎(chǔ)采用C20砼獨立基礎(chǔ)，基礎(chǔ)底板尺寸800800mm，埋深1000mm，基礎(chǔ)短柱250250 mm，高出地面150 mm，為保證大棚的整體性，在室外地坪下設(shè)一道240400mmC20砼拉梁，與小短柱澆注成整體。（5）主體結(jié)構(gòu)設(shè)計參數(shù)：棚寬B：8m5（跨）=。棚長L：4m9（間）=。肩高h：。頂高h：?？癸L荷載W0：?？寡┖奢dS0：。安裝檢修荷載：（取1人作用在柃條跨中）。（6）大棚遮陰降溫及配套裝置：為了滿足生產(chǎn)苗木避免強光、高溫及低溫危害，獲得適宜的光照和溫度環(huán)境，本項目擬采用幕簾式雙層覆蓋遮陰降溫及保溫裝置。并在溫室內(nèi)配有自然通風裝置，室內(nèi)配有移動苗床、采暖加熱系統(tǒng)、灌溉系統(tǒng)及電氣控制系統(tǒng)等。網(wǎng)棚主要用于育苗圃地，網(wǎng)棚要求棚內(nèi)空間大，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，棚中間有通道貫通，要求小型農(nóng)機具能在棚內(nèi)作業(yè)。本網(wǎng)棚規(guī)劃面積1056m2，東西寬32m2，分4跨，每跨8m，南北長33m，每1開間3m，共11間。立柱采用鋼筋砼預制件，規(guī)格為10cm10cm270cm，埋深50cm，立柱底部用30cm30cm素砼做墊層。立柱頂端埋入焊有四根鋼腳的5mm厚的鋼墊板，以連接橫拉筋及拱桿。拱桿為φ40的鍍鋅鋼管，焊接在立柱頂端的鋼墊板上，每開間立柱用φ28的鋼筋連接，鋼筋與立柱上的鋼墊板及鋼管相焊接。網(wǎng)棚骨架焊接好后，用8鉛絲作橫拉絲，每跨7道，等距離固定于拱架上。絲網(wǎng)鋪于網(wǎng)室骨架上，用18鉛絲在拱架與橫拉絲及橫筋交叉處固定。網(wǎng)室前部根據(jù)需要設(shè)立簡易門一座，其余網(wǎng)絲四周埋入地下。網(wǎng)棚要求防蟲效果好，網(wǎng)室頂蓋的黑網(wǎng)以透光40—50%為宜，選用4060目的優(yōu)質(zhì)防蟲網(wǎng)，要求縫扎牢靠，無裂口、破洞，進出口設(shè)雙層防蟲網(wǎng)。無病毒采穗圃的建立，是蘋果無病毒苗木大量快繁的前提。采穗圃內(nèi)的無病毒苗木應(yīng)進行隔離保護，最好使用300目的網(wǎng)紗為好，—，可防止蚜蟲進入。栽培床的土壤應(yīng)進行消毒，周圍環(huán)境也要整潔，并及時打藥。要保證材料在與病毒嚴密隔離的條件下栽培。無病毒苗在生產(chǎn)中應(yīng)用，重要的是要防止病毒的再感染，生產(chǎn)場所應(yīng)根據(jù)病毒侵染途徑做好土壤消毒或防蚜等工作。同時，采穩(wěn)圃要遠離蘋果樹50米，梨樹100米以上，苗圃100米以內(nèi)不得栽植梨樹。工具要專管專用。本項目輔助用房指業(yè)務(wù)用房、鍋爐房、庫房等，均采用磚混結(jié)構(gòu)，耐火等級二級，按七度地震烈度設(shè)防，采用木門及鋁合金窗，水泥地面，內(nèi)墻面混合砂漿粉刷，磚條形基礎(chǔ)，詳見初設(shè)圖紙。根據(jù)項目工藝流程，本著“先進實用、生產(chǎn)和科研相結(jié)合”的原則，確定種苗生產(chǎn)設(shè)備儀器選型及農(nóng)機具。主要儀器設(shè)備及農(nóng)機具數(shù)量見下表。序號設(shè)備名稱型 號數(shù) 量產(chǎn) 地備注1天平1/萬 1/1003臺上海2普通冰箱2臺3人工氣候箱PQX300B2臺4酸度計PHS3C1臺上海5吸水器1臺6恒溫水浴數(shù)顯2臺上海7搖床、轉(zhuǎn)床各1臺8凈化工作臺SWCJIB3臺蘇州雙人1臺單人1臺9實體顯微鏡XTBI1臺10雙目生物顯微鏡XSZ300F1臺11顯微攝影XSPLACZ1臺12離子交換器LJC70型2臺13電熱蒸餾器20A/H2臺自控斷電保護14手提式高壓蒸氣滅菌器YXQ SCAI2臺上海18L15立式高壓蒸汽滅菌器YXQ LS30SⅡ2臺福州16玻璃器皿洗刷機LD51臺17離心機1臺18濕溫度自動記錄監(jiān)測儀10臺19濕溫度表JWSD120支20多用電泳儀DYYIII8B1臺21鍋爐2T/H1臺22水泵及加壓罐等1套23變壓器及配電柜等1套24拖拉機配套農(nóng)具6套25玻璃器皿類：三角瓶150ml1萬其它本項目主要儀器設(shè)備及農(nóng)機具的采購擬按上表設(shè)備名稱、型號及數(shù)量采用國內(nèi)詢價方式采購，設(shè)備采購文件要符合標準格式。第九章 公用設(shè)施工程。本工程灌溉設(shè)計控制面積為450畝，需規(guī)劃2眼機井，并布置10個水池，具體位置詳見總平面圖。根據(jù)水源井的位置、流量、實際地形、面積等具體情況，在保證作物各生育階段用水和冬灌用水的前提下，本著實用、節(jié)約、一次性投資與運行成本等綜合考慮技術(shù)、經(jīng)濟因素，規(guī)劃灌溉分為兩個區(qū)、1區(qū)、1號井，控制面積200畝；2區(qū)、2號井，控制面積250畝。根據(jù)蓄水池的位置、溫室及田間工程配套等因素，確定采用樹狀管網(wǎng)。管道級數(shù)采用一級固定管道，支管走向根據(jù)實際情況確定，管道材料采用塑料管。支管、干管、管徑應(yīng)經(jīng)過水力計算確定。各灌溉小區(qū)所需灌溉水的單位流量均等于灌溉機井的單位流量，采用輪灌工作制度，其工作制度