人臍血干細(xì)胞移植治療實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的研究(已改無錯(cuò)字)
2023-02-15 00:47:27 本頁面
【正文】 鼠腦和脊髓組織切片中可見GFAP染色陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞、CNPase 染色陽性的少突膠質(zhì)細(xì)胞、NSE染色陽性的神經(jīng)元,均以側(cè)腦室周圍、脊髓白質(zhì)與軟脊膜靜脈交界處為多見，其中以CNPase染色陽性的少突膠質(zhì)細(xì)胞最多，其次為GFAP染色陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞，NSE染色陽性的神經(jīng)元數(shù)量最少。見圖1。對照組未見各免疫組化染色陽性細(xì)胞。表2 移植組移植后不同時(shí)間腦和脊髓中Brdu 染色注：與移植后7 d比較* P 移植組HUCBCs移植后不同時(shí)間與對照組大鼠腦和脊髓脫髓鞘病灶數(shù)比較 見表3。移植組移植后7 d腦和脊髓脫髓鞘病灶數(shù)與對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 移植后14 d、21 d和28 d腦及脊髓中脫髓鞘病灶數(shù)顯著少于對照組（均P)。見圖2。表3 兩組移植后不同時(shí)間腦和脊髓脫髓鞘病灶數(shù)比較 注：與對照組比較* P 圖1 移植組大鼠A：側(cè)腦室周圍、B：脊髓白質(zhì)有較多Brdu陽性的HUCBCs（胞核呈棕褐色）；C：側(cè)腦室周圍有nestin陽性的HUCBCs；D：CNPase陽性的少突膠質(zhì)細(xì)胞（胞漿呈棕褐色）（免疫組化染色，400） 圖2 A：對照組大鼠脊髓白質(zhì)見多處髓鞘脫失及炎性灶； B：移植組大鼠脊髓白質(zhì)髓鞘脫失明顯輕于對照組（麗春紅染色，100） 3 討 論 近年來國內(nèi)外學(xué)者對神經(jīng)系統(tǒng)疾病的細(xì)胞替代治療進(jìn)行了一系列探索，發(fā)現(xiàn)神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）、臍血干細(xì)胞為有效的細(xì)胞替代來源［46］，特別是后者具有來源豐富、取材方便、低免疫源性等優(yōu)點(diǎn)而受到青睞。既往研究［7］證明HUCBCs能夠在體內(nèi)外增殖；植入腦缺血大鼠體內(nèi)后具有NSCs的特性，在微環(huán)境信號的誘導(dǎo)下能分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞以及少突膠質(zhì)細(xì)胞；并能顯著改善模型動(dòng)物的神經(jīng)功能。 MS是以中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)脫髓鞘病變?yōu)樘攸c(diǎn)的自身免疫性疾病，經(jīng)典的EAE動(dòng)物模型被用于MS的研究。2003年P(guān)luchino 等［8］將NSCs通過尾靜脈或側(cè)腦室注射移植入EAE小鼠模型,發(fā)現(xiàn)植入的NSCs能遷徙到脫髓鞘的白質(zhì)部位并增殖分化。在損傷區(qū)啟動(dòng)髓鞘修復(fù)程序,刺激髓鞘再生,促進(jìn)神經(jīng)功能修復(fù)。HUCBCs具有與 NSCs類似的生物學(xué)特性，Dasari等［9］的研究表明，HUCBCs植入脊髓損傷大鼠模型后可分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞以及少突膠質(zhì)細(xì)胞；超微結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)損傷區(qū)域軸突的髓鞘結(jié)構(gòu)得以再生；植入后14 d大鼠神經(jīng)功能明顯改善。在分子水平證實(shí)源于HUCBCs的少突膠質(zhì)細(xì)胞在損傷區(qū)域分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子3（NT3）、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF），合成髓鞘堿性蛋白（MBP）、蛋白脂質(zhì)蛋白（PLP），從而促進(jìn)髓鞘再生。并用熒光原位雜交方法顯示NTBDNF、MBP、PLP的mRNA表達(dá)明顯提高。此研究奠定了HUCBCs移植治療EAE的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 本實(shí)驗(yàn)將HUCBCs植入免疫后14 d已發(fā)病的EAE大鼠，發(fā)現(xiàn)自植入后第21 d起移植組大鼠的神經(jīng)功能缺損評分明顯低于對照組（均P），表明HUCBCs移植可改善其神經(jīng)功能。進(jìn)一步的免疫組化檢測結(jié)果顯示自移植后7 d起，移植組大鼠的側(cè)腦室周圍以及脊髓白質(zhì)與軟脊膜靜脈交界處可見數(shù)量較多的Brdu、nestin 、GFAP、CNPase及NSE陽性細(xì)胞分布，表明植入的HUCBCs在免疫炎癥微環(huán)境信號的誘導(dǎo)下向病灶部位遷徙并增殖，并具有NSCs的特性，可分化為神經(jīng)元、星
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