【正文】 = ） ）（ ml/2T ???例 取本品 ，加無水乙醇5ml溶解后，加二苯胺試液 1滴，用硫酸鈰液（ ）滴定，消耗硫酸鈰液（ ）不得過 。 %100WTV% ???限量≤％ %%1 000 02 1 %????限量限量 （三） 藥典規(guī)定 消耗硫酸鈰液（ ） ≤ 設：應消耗硫酸鈰液 ≤ V ml ＝實際濃度 V 硫酸鈰實際濃度）（mlV??若硫酸鈰液濃度不是 ， 應重新計算硫酸鈰的消耗量 例 Ce(SO4)2 = ）（）（ ml....mlV 98001020001010???四、 含量測定 GC法 （一） GC特點 選擇性好 靈敏度高 速度快 分離效能好 揮發(fā)性低、不穩(wěn)定、極性強→衍生化易受樣品蒸氣壓限制 載氣 →N2 固定液 →硅酮（ OV17） 擔體 →硅藻土或高分子多孔小球 柱溫 →265℃ 檢測器 →氫火焰離子化檢測器 (FID) 內(nèi)標 →正三十二烷 n ≥ 500 R≥2 VitE測定的色譜條件 內(nèi)標法加校正因子 內(nèi)標法 供試液（樣品 +內(nèi)標） 內(nèi)標物 對照液（對照 +內(nèi)標） 是樣品中不存在的物質(zhì) 與被測組分峰靠近 能與各組分完全分離 與被測組分的量接近 對樣內(nèi)對內(nèi)樣樣樣內(nèi)內(nèi)對對內(nèi)內(nèi)相對WWAAAAWAWAWAWAf?????校正因子： 1KAA?內(nèi)對2KAA?內(nèi)樣%WWKK%V i t E 1 0 012 ?????稀釋度稀釋度樣對實際工作中的計算方法 例 內(nèi)標液 取正三十二烷加正己烷溶解 并稀釋成 對照液 精密稱取 VitE對照品 置棕色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi) 標液 10ml，密塞，振搖使溶解，取 1~3ul注入 GC儀，測定，計算 供試液 精密稱取供試品 色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標液 10ml，密塞，振搖使溶解，取 1~3ul 注入 GC儀，測定，計算 對照液 ? ? ? ? ? ??? ? ? ? ? ??內(nèi)對AA供試液 805741296513??內(nèi)樣AA %.%....%V i t E ????????????????????????????本品含 C31H52O3應為 ~ % BP GC 內(nèi)標 正三十二烷 R≥ USP GC 內(nèi)標 十六酸十六醇酯 R≥ JP HPLC 外標 dl－ α－生育酚 R≥ 利用生育酚的易氧化性 還原型 氧化型 二苯胺（亮黃 →灰紫） 生育醌—對生育酚溶解）（無水乙醇???? ?????? ?????? ??????SOCeSOHV i t E△ 原理 鈰量法 （二） 指示劑 .S1025 滴水乙醇 ?防止 Ce(SO4)2的水解 減慢生育酚被 O2氧化速度 C、 酸性條件 Ce(SO4)2易溶于水 生育酚易溶于醇 B、溶劑 分子量較大，反應慢 易被 O2氧化 A、反應速度 H2SO4 討論 %10010025W%100WFTV%??????????實際含量）（ ml/2T ???含量計算 MVitE = 472 樣品 → dl－ α－生育酚 固定相 →十八烷基硅烷鍵合硅膠 流動相 →甲醇 水（ 49 ： 1） 檢測波長 →292nm R＞ RSD≤% 對樣對生育酚 HHWW ??JP RP HPLC法（外標法） （三） 測定對象 →血清中 VitA和 VitE 固定相 →十八烷基硅烷鍵合硅膠 流動相 →甲醇 水（ 96 ： 4） 檢測波長 → 8′前 330nm 8′后 292nm 樣對對樣樣 稀釋度稀釋度???WAAWRP HPLC法（外標法） （四） 第五節(jié) 維生素 D H OHHC H2C H3HHHC H3C H3C H3C H3維生素 D2－ 骨化醇 一、結(jié)構與性質(zhì) H OHHC H2C H3HHC H3C H3C H3維生素 D3－膽骨化醇 維生素 D人每日需要量很少，如每日攝入量過多，或連續(xù)數(shù)次攝入 (口服或肌注 )大劑量，可出現(xiàn)過量甚至中毒癥狀，嚴重者可危及生命。嬰兒使用維生素 D過多，可致發(fā)育遲緩，面容變形，甚至腎衰死亡，日劑量超過 (50000國際單位 )可能使正常人或兒童發(fā)生血鈣增高癥，引起全身性血管鈣化、腎鈣質(zhì)沉淀及軟組織鈣化而致高血壓，嚴重者最終可死于腎功能衰竭 . 開環(huán)的甾體：具有甾類化合物的顯色反應，可用于鑒別。 手性碳原子 ：具有旋光性，可用于鑒別 。 多烯 ：可進行紫外檢測 。 性質(zhì)： 脂溶性 不穩(wěn)定性 旋光性 顯色反應 紫外吸收特性 二、鑒別試驗 1. 顯色反應 醋酐 硫酸反應 D2 黃 紅 紫 綠 D3 黃 紅 紫、藍綠 綠 三氯化銻反應 橙紅色漸變粉紅 三氯化鐵反應 橙黃色 二氯丙醇和乙酰氯反應 綠色 2. 比旋度鑒別 維生素 D2 維生素 D3 溶 劑 濃 度 比旋度值 無水乙醇 無水乙醇 40mg/ml 5mg/ml +176。 ～ +176。 +105176。 ～ +112176。 注意事項 ：應于容器開啟 30分鐘內(nèi)取樣， 在溶液配制后 30分鐘內(nèi)測定。 ： 以 96%乙醇為溶劑，加乙醇和 85%硫酸， D2 顯紅色，在 570nm處有最大吸收， D3顯黃色， 在 495nm處有最大吸收。 ： TLC、 HPLC、制備衍生物測熔點 三、雜質(zhì)檢查 維生素 D2中麥角甾醇的檢查 ：加洋地黃皂苷溶液 ， 混合 ， 放置 18h不得發(fā)生渾濁或沉淀 。 前維生素 D的光照產(chǎn)物 四、含量測定方法 中國藥典（ 2022年版）采用正相 高效液相色譜法(NPHPLC） 測定維生素 D的含量，定量方法為內(nèi)標法，內(nèi)標物為 鄰苯二甲酸二甲酯 。 根據(jù)樣品的具體情況按以下三個方法進行分析。 第一法 ：用于無維生素 A醇及其它雜質(zhì)干擾的情況，步驟如下： 1．系統(tǒng)適用性試驗：測定重復性和分離度。 V i t D3對 照 品前 V i t D3反 式 V i t DV i t D 3速 甾 醇 DV i t D3重 復 性前 V i t D3與 反 式 V i t D3V i t D3與 速 甾 醇 D39 0 ℃1 h2 5 4 n m3 6 5 n mH P L C冷 卻 環(huán) 己 烷R 大 于 1 . 0R S D 小 于 2 . 0 %峰 ：峰峰33固定相：硅膠 流動相：正己烷 正戊醇（ 997： 3） 2．測定校正因子： 3．含量測定： rrssmAmAf//1 ?srsrsmAArmfmAf2112)( ??ssiii AmAfAfm)( 2211 ??2,6二叔丁基對甲酚＋加熱 第二法 ：用于有雜質(zhì)的干擾的情況，步驟如下： 1．皂化處理：皂化、乙醚提取、洗滌提取液、蒸除乙 醚、制備供試液 A。 2．凈化：供試液 A經(jīng)液相色譜分離，準確收集含有維 生素 D及前維生素 D混合物的全部流出液，制 備成供試液 B。 固定相： ODS 流動相：甲醇 乙腈 水（ 50： 50： 2） 3．含量測定：取供試液 B按第一法測定。 第三法 ：用于經(jīng)第二法處理后仍有雜質(zhì)的干擾的情況。步驟如下： 1．制備供試液：取供試液 A，凈化，水浴加熱， 正已烷溶解，得供試液 C。 制備對照液：對照品儲備液（ 異辛烷 溶解）：稀釋、加熱。 2．含量測定：在第一法的色譜條件下，交替精密進樣 對照液和供試液，按外標法定量。 返 回 Discussion 采用的是正相高效液相色譜法 測定過程中應避免 VitD的氧化 皂化應劇烈振搖，水浴溫度 ≤ 40℃ ，提取溶劑大多采用己烷或戊烷以消除苯的毒性 若供試品中沒有 VitA醇及其它雜質(zhì)干擾時，可以直接進樣分析 注意色譜系統(tǒng)適用性樣品 VitD、前 VitD的制備方法 例 多種維生素片中 VitA、 VitB VitB2 、 VitB6 、煙酰胺、 VitC、 VitE的含量測定 色譜柱 ODS 流動相 A、水 甲醇（ 4 ： 1） B、甲醇