sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳page及(已改無錯字)
2023-06-23 23:29:39 本頁面
【正文】 （ 5） ：稱取，加 入 50ml水，用 1mol/L鹽酸調(diào) ，最后用蒸餾水定容至 100ml （ 7） 10%過硫酸銨 (AP) （ 8） TEMED（四甲基乙二胺） （ 9）樣品溶解液： SDS（ 100mg） +巰基乙醇（ ） + 溴酚藍（ 2mg） +甘油（ 2g） + （ 2ml），最后定容至 10ml。 （ 10）固定液： 50%甲醇 454ml，冰乙酸 46ml混勻。 （ 11）染色液：稱取考馬斯亮藍 R250 ，加上述固定液 250ml，過濾后備用 （ 12）脫色液：冰乙酸 75ml，甲醇 50ml，加蒸餾水定容至 1000ml （ 13）電極緩沖液（內(nèi)含 %SDS， ）：稱 ，甘氨酸 ，加入 SDS1g，加蒸餾水使其溶解后定容至 1000ml 影響因素 SDS單體的濃度，當單體濃度大于 1mmol/L時大多數(shù)蛋白質(zhì)與 SDS結(jié)合的重量比為 1:，如果單休濃度降到 mmol/L以下時，兩者的結(jié)合比僅為 1: 就不能消除蛋白質(zhì)原有的電荷差別，為保證蛋白質(zhì)與SDS的充分結(jié)合，它們的重量比應(yīng)該為 1:4或 1:3 。 SDS電泳的樣品緩沖液離子強度較低，通常是 10～ 100mmol/L 轉(zhuǎn)膜 1 帶手套切 2張（ L： ， W： ）尼龍膜和 12張（ L：， W： ）的濾紙，并用去離子水浸泡（浸泡時要讓水從下往上慢慢濕透）過午。并用鉛筆在膜上做 +/標記。 2 在轉(zhuǎn)膜前 10min，把膜取出浸入轉(zhuǎn)移緩沖液中。 3 在一托盤中注入 500ml左右的轉(zhuǎn)移緩沖液，放入 4塊海綿和 12張濾紙及轉(zhuǎn)膜所用模具。 4 在模具的黑色板上先鋪一塊海綿，接著依次放 3張浸濕的濾紙，對齊后，用玻璃棒趕凈氣泡（很關(guān)鍵）。 5 在濾紙上放凝膠，放的時候可加一點緩沖液在凝膠上。 2 放好膠后，放尼龍膜。注：尼龍膜一旦放到膠上就不可再作移動，因為這時已有蛋白結(jié)合到膜上。然后，在膜上加一點緩沖液，用玻璃棒盡量使之鋪平 3 在膜上依次放好三張濾紙和海綿后 ， 即可夾好轉(zhuǎn)膜模具 。 注：每層間都要注意趕氣泡 4 黑對黑 ， 白對紅在電泳槽中放好模具 。 并加一塊冰在電泳槽中 ， 以防轉(zhuǎn)膜過程中溫度過高 ， 影響轉(zhuǎn)膜效率 。 5 在用轉(zhuǎn)移緩沖液注滿電泳槽后 。 紅對紅 ， 黑對黑接好轉(zhuǎn)膜裝置 （ 及電泳裝置 ） 。 設(shè)置電泳參數(shù)： 60v ， 麗春紅染色 1. 轉(zhuǎn)膜結(jié)束后 ， 取下轉(zhuǎn)膜裝置 ， 打開夾板 ， 小心用鑷子取出尼龍膜 ， 蛋白面朝上置于 10ml 1 的麗春紅染液中 ， 搖床上染色 10min左右 2. 蛋白面朝上 ， 用去離子水洗 34次 ， 至紅色基本褪去后 ， 拍照 。 3. 再用去離子水洗膜至紅色完全褪去 封閉
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