【正文】 : 100 %INH: 100 %傳統(tǒng) 的 藥 敏 試驗 (DST)GenoType174。 Mycobacteria Direct結(jié) 核分支桿菌復(fù)合群 鳥分支桿菌 M. avium、胞內(nèi)分支桿菌 M. intracellulare、堪 薩 斯分支桿菌 M. kansasii、瑪 爾 摩分支桿菌M. malmoense的 鑒 定經(jīng)純 化后的直接采集的標 本RNA涂片陽性 樣 本97,5% 涂片陰性 樣 本83,3 %涂片陽性 樣 本99 % 培養(yǎng)第四十九 頁 ，共七十四 頁 。l249。DNAStrip技術(shù) 系列涵蓋了分枝桿菌菌種鑒定、 TB復(fù)合群的區(qū)分和藥敏試驗。所有檢測 (jiǎn c232。167。167。第五十 頁 ，共七十四 頁 。yīnpi224。nxī)的解析? 鑒于基因芯片的多種用途和其遠大的發(fā)展前景，不少生命科學研究機構(gòu)和生物技術(shù)公司都先后參與了這項技術(shù)的研究。它已象半導體技術(shù)一樣成為一個重要的產(chǎn)業(yè)方向。 第五十一 頁 ，共七十四 頁 。n? 該技術(shù)系指將大量探針 (t224。n zhēn)分子的雜交信號強度進而獲取樣品分子的數(shù)量和序列信息?；蛐酒?(jīxīnn)技術(shù)的主要特點? 技術(shù)操作簡單 ? 自動化程高? li232。檢測效率高? 成本相對低第五十三 頁 ，共七十四 頁 。分枝桿菌菌種鑒定 (ji224。ng)試劑盒 (DNA微陣列芯片法 )主要分為樣品制備、芯片反應(yīng)和結(jié)果判讀三部分。首先，將檢測菌的 DNA從培養(yǎng) (p233。然后，對樣品中的靶基因進行擴增和熒光標記；? 最后芯片掃描成像，用配套軟件進行判讀。芯片掃描 (sǎomi225。1第五十五 頁 ，共七十四 頁 。臨床 (l237。chu225。（ ） GeneXpert MTB/RIF快速 (ku224。)診斷技術(shù)? Cepheid174。? GeneXpert檢測平臺采用實時熒光定量 PCR檢測原理。第五十七 頁 ，共七十四 頁 。最大程度 (ch233。)簡化 TB檢測?。?！? 將痰液加入處理瓶，放置 15分鐘；? 將處理后的樣品加入樣品反應(yīng)盒；? 將該盒子放置在GeneXpert中，輕松按下“開始 ”鍵；? 得到結(jié)果（ 2小時）：檢測是否含有結(jié)核分支桿菌的同時，可對利福平耐藥性進行 (j236。ng)判讀。Xpert MTB/RIF檢測 (jiǎn c232。取處理后的痰液 2mL加入 Xpert反應(yīng) 試劑盒將反應(yīng)試劑盒放入 GeneXpert儀器， 點擊 “ 開始 (kāishǐ)”（ 手工操作至此結(jié)束！ ）自動過濾洗滌樣品自動超聲破碎，純化 樣品熒光定量 PCR擴增巢氏 PCR擴增自動結(jié)果判讀 （ MTB/RIF）第五十九 頁 ，共七十四 頁 。全自動操作?污染可能性小?nw233。結(jié)果精確度高?xū)專業(yè)技術(shù)人員和特殊實驗室第六十 頁 ，共七十四 頁 。 lǔ)、南非、阿塞拜疆、印度?ngpǐn)：?涂片陰性 , 培養(yǎng)陽性樣品：?對利福平耐藥性檢測：?結(jié)論 (ji233。n)? GeneXpert檢測 Mtb簡單、易于操作，對操作者技術(shù)要求不高：只需要把痰液、反應(yīng)液加入儀器即可得出診斷報告；? GeneXpert檢測 Mtb快速：整個過程大約 2小時。n ch233。? 高靈敏性： BCG—176 cfu/ml ； H57Rv—112 cfu/ml? 耐藥性診斷：可對利福平耐藥性進行檢測第六十二 頁 ，共七十四 頁 。nd224。目前，通過檢測抗結(jié)核桿菌的抗體(IgG)診斷結(jié)核病的商品化試劑盒已較多。ng)的方法包括：酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA)和免疫金標記技術(shù)的免疫層析法和膠體金標記的滲濾法等，采用 (cǎiy242。第六十三 頁 ，共七十四 頁 。)免疫學診斷技術(shù)的意義? 在國內(nèi)應(yīng)用較廣泛，是結(jié)核病的輔助診斷方法之一 ,尤其對肺外結(jié)核、菌陰肺結(jié)核的診斷具有應(yīng)用價值。? 目前國際上反對 (fǎndu236。原因主要是特異性問題。第六十四 頁 ，共七十四 頁 。bāo)免疫學診斷技術(shù)? 細胞免疫診斷技術(shù)應(yīng)用較少，過去 (gu242。)主要應(yīng)用 PPD皮試技術(shù) ， 近年來英國和澳大利亞研制了 ELISpot 、 TSpot技術(shù)和 ? 此項技術(shù)用于感染情況的檢測是一項特異性較強、靈敏度較高很有希望的新技術(shù)。? 酶聯(lián)免疫斑點 (ELISpot)技術(shù) 是檢測細胞分泌細胞因子的一種實驗 (sh237。n)方法，采用可定量的夾心 ELISA方法，利用結(jié)核分枝桿菌特異性抗原 ESAT6 CFP10刺激和激活免疫活性細胞使其產(chǎn)生 IFN?，并 檢測 IFN?的濃度變化進行診斷的方法。 ELISpot具有較高的特異性和敏感性。ELISPOT技術(shù) (j236。)原理? 細胞免疫主要由 T淋巴細胞發(fā)動， T淋巴細胞分成效應(yīng) T淋巴細胞和記憶 T淋巴細胞。當再次受到感染刺激后。所以無論是否 (sh236。 fǒu)被感染的指標。ELISPOT在結(jié)核病診斷在結(jié)核病診斷 (zhěndu224。目前診斷MTB潛伏感染仍沿用 100年來使用的 TST，但 TST不能區(qū)分MTB感染患者和接種 BCG的健康人以及感染環(huán)境 (hu225。ng)中的分枝桿菌患者。皮試結(jié)果表明 580名兒童患有潛伏性肺結(jié)核 ,需要進行藥物治療 ,以免轉(zhuǎn)化為活動性肺結(jié)核 。通過 ELISPOT檢測 ,只需要治療 380名兒童 ,而不是 580名 ,但卻能夠預(yù)防同樣數(shù)量的活動性肺結(jié)核病例發(fā)生。 第六十八 頁 ，共七十四 頁 。這項研究共納入了結(jié)核流行區(qū)有不同程度結(jié)核病接觸史的535名學生，結(jié)果顯示結(jié)核菌素皮膚試驗(TST)和 ELISpot的一致性達89%(P)。在接種過 BCG的兒童中， TST假陽性的可能性較大，而 BCG接種對 ELISpot結(jié)果沒有影響。zhě)認為 ELISpot可開始替代 TST，這將使更多的人能在感染仍處于隱匿期時就可進行預(yù)防，而不至于發(fā)展成為嚴重的結(jié)核病。ELISPOT法的優(yōu)點法的優(yōu)點 (yōudiǎn)? (1)靈敏、特異，能從 100萬個細胞中測出 1個分泌INF細胞；只有 MTB和少數(shù)非結(jié)核分枝桿菌才會出現(xiàn)陽性反應(yīng)，而 BCG及多數(shù)非結(jié)核分枝桿菌因不分泌ESAT6和 CFP10蛋白，因此本法能區(qū)別 BCG接種出現(xiàn)的陽性反應(yīng)。 (3)應(yīng)用面廣：在肺結(jié)核、肺外結(jié)核及免疫抑制的結(jié)核患者均能檢測。oxi224。oxi224。第七十 頁 ，共七十四 頁 。sh249。細胞培養(yǎng)及抗原刺激時 ,有發(fā)生細菌污染的可能 ,以致實驗失敗 。n)基礎(chǔ)并經(jīng)多次操作的培訓方能勝任 。第七十一 頁 ，共七十四 頁 。隨著科技不斷進步，今天企盼(qǐn)已經(jīng)成為可能。第七十二 頁 ，共七十四 頁 。 xie)！第七十三 頁 ，共七十四 頁 。ir243。 重復(fù) 緩 慢吸氣 動 作或平靜呼吸片刻，準 備 再次咳嗽的 動 作。以 現(xiàn)場 和非 現(xiàn)場 督 導為 主要方式。)高假陽性和高假陰性。與 Southern雜 交和 酶 促化學 發(fā) 光技 術(shù)檢測 的靈敏度相似 ,但要比 酶 促比色法提高 10倍。 謝謝第七十四 頁 ，共七十四 頁