【正文】 組設(shè)置 3 個(gè)重復(fù)，取平均值，獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線。 圖 2：測定硒的標(biāo)準(zhǔn)曲線 :Determination of selenium standard curve 金針菇在液體富硒培養(yǎng)基中的生長特性 表 3 白色金針菇 及其誘變菌株 在液體富硒培養(yǎng)基中的生長特性 Table growth characteristics of the white Flammnlina velutipes and its mutant y = + R 2 = 0 0 5 10 15 20 25 30 35 硒含量 (μ g) 吸收 值 富硒金針菇菌株的選育畢業(yè)論文 12 strains in Se accumulating liquid training medium 菌種 培養(yǎng)液 滅菌 發(fā)酵 出瓶 菌絲球 過濾后 生物量 類型 硒濃度 前 終點(diǎn) 總體積 直徑 余液 干重 (μg/L) pH 值 pH 值 (mL) (mm) (mL) (g/100mL) 白色金針菇原種 CK 93 ～ 88 5 89 ～ 80 10 88 ～ 84 15 89 ～ 81 20 92 ～ 81 25 93 ～ 84 30 92 ～ 82 40 92 ～ 85 白色金針菇誘變5min CK 93 ～ 83 5 90 ～ 71 10 91 ～ 85 15 — — — — — 20 92 ～ 87 25 92 ～ 78 30 90 ～ 80 40 87 ～ 71 白色金針菇誘變10min CK 93 ～ 85 5 88 ～ 83 10 92 ～ 86 15 89 ～ 68 20 90 ～ 85 25 90 ～ 80 30 92 ～ 84 40 91 ～ 81 注 :1)搖瓶體積 250mL,裝液量為 100mL。在測定發(fā)酵終點(diǎn) pH 值時(shí)，緩沖液的實(shí)時(shí)溫度是 24℃，緩沖液的 pH 值按照 25℃的標(biāo)準(zhǔn)來校正 pH計(jì)。菌絲球基本呈現(xiàn)球狀，例如星球狀、微球狀、橢球狀、圓柱狀等。發(fā)酵終點(diǎn) pH 與菌絲體干重有著較為明顯的相關(guān)性。 表 4 金針菇 201 原種及其誘變菌株在液體富硒培養(yǎng)基中的生長特性 富硒金針菇菌株的選育畢業(yè)論文 13 Table 3. The growth characteristics of the Flammnlina velutipes 201 and its mutant strains in Se accumulating liquid training medium 菌種 培養(yǎng)液 滅菌 發(fā) 酵 出瓶 菌絲球 過濾后 生物量 類型 硒濃度 (μg/L) 前 pH 值 終點(diǎn) pH 值 總體積 (mL) 直徑 (mm) 余液 (mL) 干重 (g/100mL) 金針菇201原種 CK 87 ～ 73 5 88 ～ 75 10 88 ～ 81 15 91 ～ 83 20 88 ～ 83 25 90 ～ 79 30 90 ～ 80 40 92 ～ 87 金針菇201誘變5min CK 89 ～ 81 5 88 ～ 80 10 89 ～ 82 15 — — — — — 20 91 ～ 82 25 88 ～ 79 30 89 ～ 79 40 88 ～ 80 金針菇201誘變10min CK 92 ～ 87 5 89 ～ 83 10 87 ～ 79 15 92 ～ 85 20 — — — — — 25 87 ～ 80 30 89 ～ 81 40 88 ～ 84 注 :1)搖瓶體積 250mL,裝液量為 100mL。在測定 發(fā)酵終點(diǎn) pH值時(shí)，緩沖液的實(shí)時(shí)溫度是 ℃，緩沖液的 pH值按照 20℃的標(biāo)準(zhǔn)來校正 pH計(jì)。在一定硒濃度范圍內(nèi)，菌絲體的富硒能力隨著硒濃度的增加而增強(qiáng)，在培養(yǎng)基硒含量為 20μg/L 時(shí)富硒能力最強(qiáng)。針對菌絲球干重，它也是在一定的硒濃度范圍內(nèi)，隨著 硒濃度的提高而增大，在 15~20μg/L 之間達(dá)到了頂峰?？梢姷蜐舛鹊陌l(fā)酵液硒含量有助于 白色金針菇原種 的生長及其富硒能力的提高。 因此， 金針菇 白 .0 菌種在培養(yǎng)基含硒量為 20μg/L 的時(shí)候，富硒能力及生長速度均達(dá)到最大，即 。 表 6 白色 金針菇菌種 在 液體富硒 培養(yǎng)基中對硒的富集 特性 Table characteristics of white Flammulina velutipes in the Seleniumenriched medium 培養(yǎng)液硒 濃度 (μg/L) 生物量 干重 (g/100mL) 菌絲體的 吸光值 菌絲體 含硒量 (μg/g) 硒含量 提高倍數(shù) 硒回收率 （％） CK 5 10 15 20 25 30 40 注：每個(gè)硒濃度梯度下，均取 干重進(jìn)行測吸收值。 圖 4 金針菇 白 .5 菌種 菌絲體含硒量和干重與硒濃度梯度的曲線圖 Curves of the selenium and dry weight of mycelium of white Flammulina velutipes ()in different selenium concentration gradient 由表 7 和圖 4 可知， 白色金針菇 誘變 5min 菌種 在富硒 CM液體培養(yǎng)基上 具有較強(qiáng)的富硒能力 。 在培養(yǎng)基含硒量為 15μg/L時(shí)，富硒能力降到最低（僅為峰值的 %）?？梢?適宜 濃度的發(fā)酵液硒含量有助于 白色金針菇 誘變5min 菌種 的生長及其富硒能力的提高。 菌絲體干重在在 5μg/L 時(shí)達(dá)到了頂峰。 表 8 白色金針菇 (白 .10)在液體富硒培養(yǎng)基中對硒的富集特性 Table 8. Seaccumulated characteristics of white Flammulina velutipes ()in the Seleniumenriched medium 培養(yǎng)液硒 濃度 (μg/L) 生物量 干重 (g/100mL) 菌絲體的 吸光值 菌絲體 含硒量 (μg/g) 硒含量 提高倍數(shù) 硒回收率 （％） CK 5 10 15 20 25 30 40 注：每個(gè)硒濃度梯度下，均取 干重進(jìn)行測吸收值。在一定硒濃度范圍內(nèi)，菌絲體的富硒能力在培養(yǎng)基硒含量為5μg/L 時(shí)富硒能力最強(qiáng)，隨著硒濃度的增加呈下降趨勢，但不明顯。菌絲體的含硒量與干重 的關(guān)系不明顯 。 隨著培養(yǎng)基硒濃度梯度 的增加，硒的回收率呈下降趨勢 且較為明顯 。 因而較好的培養(yǎng)方案為配置含硒量為 15μg/L 的培養(yǎng)基發(fā)酵 白色金針菇 誘變10min 菌種 菌絲體。 圖 6 金針菇 201 原種 菌絲體含硒量和干重與硒濃度梯度的曲線圖 Curves of the selenium and dry weight of mycelium of Flammulina velutipes 201 in different selenium concentration gradient 由表 9 和圖 6 可知， 金針菇 201 原種 在富硒 CM 液體培養(yǎng)基上 具有較強(qiáng)的富硒能力。針對菌絲球干重，它也是在所測的硒濃度范圍內(nèi)，隨著硒濃度的提高而 呈總體下降趨勢 ，在 0、 25 和 30μg/L 時(shí)出現(xiàn)峰值，但在 發(fā)酵培養(yǎng)基含硒量為 0μg/L 時(shí) ，菌絲球干重最大 。隨著培養(yǎng)基硒濃度梯度的增加，硒的回收率呈下降趨勢。 所以最佳育種方案是選擇 含硒量為 5μg/L的 培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng) 金針菇 201原種菌絲體 ，此時(shí)其生長速度和富硒能力都達(dá)到較為不錯(cuò)的水平 。 圖 7 金針菇 201 誘變 5min 菌種 菌絲體含硒量和干重與硒濃度梯度的曲線圖 Curves of the selenium and dry weight of mycelium of Flammulina velutipes 富硒金針菇菌株的選育畢業(yè)論文 19 0501001502000 5 10 15 20 25 30 40硒濃度梯度菌絲體含硒量(μg/g)00 . 0 50 . 10 . 1 50 . 20 . 2 5干重(g)菌絲體含硒量干重() in different selenium concentration gradient 由表 10 和圖 7 可知， 金針菇 201 誘變 5min 菌種 在富硒 CM 液體培養(yǎng)基上 具有較強(qiáng)的富硒能力。 在一定硒濃度范圍內(nèi)，菌絲體的富硒能力在培養(yǎng)基硒含量為 30μg/L 時(shí) 達(dá)到峰值 。 可見適宜濃度的發(fā)酵液硒含量有助于 金針菇 201 誘變 5min 菌種 的生長。 因此， 金針菇 201 誘變 5min 菌種 在培養(yǎng)基含硒量為 10μg/L 的時(shí)候，富硒能力及 硒回收率 均達(dá)到較佳值，即 。 表 11 金針菇 201 誘變 10min 菌種 ()在液體富硒培養(yǎng)基中對硒的富集特性Table 11. Seaccumulated characteristics of Flammulina velutipes () in the seleniumenriched medium 培養(yǎng)液硒 濃度 (μg/L) 生物量 干重 (g/100mL) 菌絲體的 吸光值 菌絲體 含硒量 (μg/g) 硒含量 提高倍數(shù) 硒回收率 （％） CK 5 10 15 20 25 30 40 注：每個(gè)硒濃度梯度下，均取 干重進(jìn)行測吸收值。菌絲體的富硒能力 和干重 隨著硒濃度的增加而 上下波動(dòng) 。針對菌絲球干重， 它也是在 所測的硒濃度范圍內(nèi)，隨著硒濃度的提高而 出現(xiàn)兩個(gè)峰值 ，在10 和 30μg/L 時(shí)出現(xiàn)峰值， 兩峰值大致相等 。隨著培養(yǎng)基硒濃度梯度的增加，硒的回收率呈 典型 下降趨勢。 較好的 育種方案是選擇 含硒量為 5μg/L 的 培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng) 金針菇 201 誘變10min 菌種 菌絲體 ，此時(shí)其生長速度、 富硒能力 和硒回收率 都達(dá)到較為不錯(cuò)的水平 。 硒含量的測定，我使用 玻璃比色皿制作的 標(biāo)準(zhǔn)曲線， 標(biāo)準(zhǔn)曲線的 數(shù)據(jù)表格及曲線圖見表 1 和圖 1， 通過吸收值計(jì)算 含硒量 ，進(jìn)而得到 計(jì)算硒提高倍數(shù) 。本次實(shí)驗(yàn)為了探討金針菇各個(gè)菌種對硒的耐受能力，進(jìn)行了不同含硒量的平板上的培養(yǎng)，考察其相關(guān)生物學(xué)特性。在 平板 富硒培養(yǎng)中， 我測定了 金針菇菌絲體各個(gè)菌株 各個(gè)硒濃度梯度的參數(shù) 。利用紫外分光光度法測定了金針菇各個(gè)菌種各個(gè)硒濃度梯度下的富硒能力。 實(shí)驗(yàn)中的結(jié)果分別在下列的表格和數(shù)據(jù)圖形中一一列出。 將菌絲體使用乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液進(jìn)行染色。將每組所測的 3 個(gè)數(shù)據(jù)，換算成菌絲直徑范圍。 金針菇在液體富硒培養(yǎng)基中的生長特性 本實(shí) 驗(yàn) 觀察了白色金針菇、金針菇 201 及其誘變菌株在液體富硒培養(yǎng)液中的生長特性 ， 菌落形態(tài)十分明顯 ， 輪廓鮮明， 沒有雜菌菌落， 透出淡淡的香味，表明培養(yǎng)基未被污染。當(dāng)平板富硒濃度達(dá)到30μg/L的時(shí)候，菌絲的生長受到了明顯的抑制，如菌落直徑只有 %，菌絲外觀也顯得瘦弱。 白色金針菇誘變 5min 菌種，相比較其原種而言，它在耐硒能力上有了 較為顯著的提高，菌落的直徑都比較大，并且有機(jī)物消耗量也較大，菌絲外觀都相對比較粗壯。 菌絲直徑?jīng)]有明顯的變化。在 30μg/L 的硒濃度時(shí)，菌絲生長出現(xiàn)另外一個(gè)峰值，然后隨著硒濃度的提高，又呈減弱趨勢。 高濃度的硒阻礙了菌絲體的生長。當(dāng)平板富硒濃度達(dá)到以及超過 30μg/L 的時(shí)候，菌絲的生長受到了明顯的抑制，菌絲外觀也顯得瘦弱。 金針菇 201 誘變 5min 菌種，相比較其原種而言，它在耐硒能力上敏感性降低了，硒濃度的增加對菌落的直徑、菌絲外觀的影響不明顯。其中在 5μg/L的硒濃度時(shí)，該菌種生長