【正文】 M13噬菌體的特點(diǎn)*含有基因間隔區(qū) (ISInter具有轉(zhuǎn)染作用 ()M13M13噬菌體吸附在大腸桿菌表面 F性纖毛上 ,M13在宿主細(xì)胞內(nèi)以 +鏈為模板合成大量的 DNA主細(xì)胞內(nèi)合成大量的 特異性蛋白與 +鏈 DNA結(jié)合 。c)以 DNA為模板不斷合成 +鏈 DNA,釋放到細(xì)胞外，而不破壞宿主細(xì)胞。DNA一對(duì) M13克隆載體 M13mp18和 M13mp19的結(jié)構(gòu)圖M13克隆載體分子結(jié)構(gòu)圖 外源 DNA片段在上的定向克隆M13噬菌體克隆載體的優(yōu)點(diǎn)n M13的感染與釋放不會(huì)殺死宿主菌，僅導(dǎo)致宿主菌生長緩慢。n M13的包裝不受 DNA大小的限制，其噬菌體顆粒的大小可隨 DNA的大小而改變，即使 DNA的大小比本身 DNA的大小超出 6倍，仍能進(jìn)行包裝。因此，只有在這一段中可插入外源DNA而不致影響噬菌體的活性。一般說， 插入 300~400bp時(shí)相當(dāng)穩(wěn)定的 。大分子 DNA克隆載體細(xì)菌人工染色體載體酵母人工染色體載體F質(zhì)粒的特點(diǎn)：n 單拷貝復(fù)制n 克隆容量可達(dá) 300kbn 比較穩(wěn)定每細(xì)胞只有一個(gè)拷貝，不會(huì)重組。細(xì)菌人工染色體載體(bacterialchromosome,1983 年形成基礎(chǔ)理論 1987年變成現(xiàn)實(shí)。只能在酵母細(xì)胞中擴(kuò)增克隆容量大，為 230kb1700kb構(gòu)建原理，按染色體結(jié)構(gòu)構(gòu)建artificialYAC) 真核生物染色體的幾個(gè)最為重要的部位：① 端粒重復(fù)序列 （ telomeric ③ 自主復(fù)制序列 （ autonomouslysequences， ARS）YACtrp YAC本身可小至 8kb以上。n YAC轉(zhuǎn)化過程只有同時(shí)得到 YAC的兩個(gè)臂，才能在基本培養(yǎng)基（不加 TRP和 URA）上生長。四膜蟲端粒（ tel)*酵母著絲點(diǎn) 酵母的選擇標(biāo)記 (?1）， +鏈 上有兩個(gè)缺口（ ?2， DNA分子上有八個(gè)開放閱讀框（ ORF)和三個(gè)間隔區(qū)．ORFII：表達(dá)產(chǎn)物與蚜蟲口針或前腸的特殊位點(diǎn) 相結(jié)合，參與蚜蟲的感染．ORFIV：編碼反轉(zhuǎn)錄酶．① CaMV1：位于 ORFVII之間， bp，含有啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄 35SIRVII和 ORFIRV和 ORF含有啟動(dòng) 19SCaMVDNA限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)在 CaMVDNA的非必需區(qū)（ II區(qū)和 VII區(qū)）含有限制酶識(shí)別位點(diǎn)（如 BstEI），這些單酶切位點(diǎn)可用于插入外源 DNA片段 ．CaMV（ Cabb+輔助 CaMVDNA分子 (攜帶缺陷型感染所需的基因)進(jìn)入植物細(xì)胞并表達(dá)缺點(diǎn) :通過根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞中 .*避免了 CaMV突變體之間的基因重組（ TMV)克隆載體 煙草花葉病毒為短桿狀，基因組為單鏈＋ RNA，長為 6395個(gè)堿基，包括四個(gè)閱讀框．1：編碼 126kD蛋白質(zhì)，參與病毒復(fù)制．2：編碼 183kD蛋白質(zhì)，參與病毒復(fù)制．3：編碼移動(dòng)蛋白（ MP)，分子量（ 30kD）4：編碼病毒外殼蛋白（ CP,的結(jié)構(gòu)特征TMV克隆載體構(gòu)建的策略動(dòng)物病毒基因克隆載體 猿猴空泡病毒 40（ virusDNA的一般特性SV40SV40DNA單識(shí)別位點(diǎn)限制性內(nèi)切酶位點(diǎn) 限制性內(nèi)切酶 識(shí)別位點(diǎn)KpnI343HpaII832EcoR1782BamH2533BstXII52352） 感染并進(jìn)入細(xì)胞啟動(dòng)病毒 DNA復(fù)制組裝成病毒顆粒，細(xì)胞裂解3） DNA衍生的克隆載體的構(gòu)建 構(gòu)建 SV40a)b)間隔區(qū)和終止序列 .替換晚期轉(zhuǎn)錄區(qū)基因 .SVDNA晚期轉(zhuǎn)錄區(qū)取代型載體SVGT5R?GSara兩條 38SS復(fù)制的啟動(dòng)子 .c）與質(zhì)粒載體重組構(gòu)建反轉(zhuǎn)錄病毒克隆載體d）轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞 e）包裝成新的反轉(zhuǎn)錄病毒顆粒f）感染目的宿主細(xì)胞（動(dòng)物細(xì)胞），外源基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞 .受體細(xì)胞 結(jié)構(gòu) 插入片斷 舉例 10kb pBR322， pUC18/19pGEMλ噬菌體 線狀 924kb EMBL系列，Λ45kb pJB8,c2RB,pWE15/16,M13絲狀噬菌體 環(huán)狀 〈 kb M13mp系列BACArtificialkb Pel(YeastchromosomekbMACArtificial1000載體，昆蟲桿狀病毒載體載體的種類和特征n 靜夜四無鄰，荒居舊業(yè)貧。 20:43:4820:43:4820:433/11/2023 8:43:48 PMn 1以我獨(dú)沈久，愧君相見頻。 20:43:4820:43:4820:43Thursday, March 11, 2023n 1乍見翻疑夢，相悲各問年。 11 三月 20238:43:48 下午 20:43:48三月 21n 1比不了得就不比，得不到的就不要。 三月 218:43 下午 三月 2120:43March 11, 2023n 1行動(dòng)出成果，工作出財(cái)富。 8:43:48 下午 8:43 下午 20:43:48三月 21n 沒有失敗，只有暫時(shí)停止成功！。 20:43:4820:43:4820:433/11/2023 8:43:48 PMn 1成功就是日復(fù)一日那一點(diǎn)點(diǎn)小小努力的積累。 20:43:4820:43:4820:43Thursday, March 11, 2023n 1不知香積寺，數(shù)里入云峰。 11 三月 20238:43:48 下午 20:43:48三月 21n 1楚塞三湘接，荊門九派通。 三月 218:43 下午 三月 2120:43March 11, 2023n 1少年十五二十時(shí)，步行奪得胡馬騎。 8:43:48 下午 8:43 下午 20:43:48三月 21n 楊柳散和風(fēng)，青山澹吾慮。 20:43:4820:43:4820:433/11/2023 8:43:48 PMn 1越是沒有本領(lǐng)的就越加自命不凡。 20:43:4820:43:4820:43Thursday, March 11, 2023n 1知人者智，自知者明。 三月 21三月 2120:43:4820:43:48March 11, 2023n 1意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 三月 218:43 下午 三月 2120:43March 11, 2023n 1業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 8:43:48 下午 8:43 下午 20:43:48三月 21MOMODA POWERPOINTLorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit. Fusce id urna blandit, eleifend nulla ac, fringilla purus. Nulla iaculis tempor felis ut cursus. 感謝您的下載觀看專 家告