【正文】 Note:NoStrongWeakVaried 1: ITS rDNA區(qū) PCR擴增結果 。1: ITS rDNA PCR amplification result 。以 18S和 ITS1區(qū)之間的 TTACCG序列中的第一個 “C”為 1位點 .Note:firstinborder(TTACCG)18SITS1hereas1.四、微生物鑒定 鑒定實例 2醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 n ITS rDNA區(qū)序列 分析以 18S和 ITS1區(qū)之間的TTACCG序列中的第一個“C” 為 1位點 。圖中發(fā)育樹節(jié)點只顯示 Bootstrap值大于 50%數(shù)值 ,NumbersbranchesbootstrapOnlyaboveareBar,distance.CMCC(F)98003與與 A. niger ATCC序列相似性達 100%序列同源性均在 %?100%之間 。圖中發(fā)育樹節(jié)點只顯示 Bootstrap圖例為遺傳距離 .Note:abovearevalues.values50%indicated.geicCMCC(F)98003與黑色組的其他種序列同源性均在 %以下 。四、微生物鑒定 鑒定實例 2醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 五、微生物保藏醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 n 菌種 是進行微生物學研究和應用的基本材料，是發(fā)展生物工程的重要基礎條件之一，是國家的重要生物資源。并對其所負責保藏的菌種均應采取妥善、可靠的 方法保藏 ， 避免 菌種的 污染或死亡 ?！?中國微生物菌種保藏管理條例 》五、微生物保藏醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 n 制訂專門菌種保藏管理制度；n 同一株菌種采用兩種以上保藏方法保存；n 對只能采用一種保藏方法的菌株備份存放于兩個以上的保藏設備中； n 對菌種的入庫和出庫記錄入檔，實行雙人負責制管理； n 設專人負責管理菌種保藏設施正常運行，定期檢修維護。基本原理 是在挑選優(yōu)良純培養(yǎng)物并使其處于休眠狀態(tài)基礎上，人為地創(chuàng)造一個有利于休眠的環(huán)境，使其長期保存后仍能保持菌種原有的優(yōu)良特性 。基本措施 是低溫、真空、干燥 。n 操作步驟： 斜面制備 接種 培養(yǎng) 保藏醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 v 斜面制備培養(yǎng)基配制分 裝滅 菌擺放斜面醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 v 接 種醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 n 培養(yǎng)168。 酵母 28~30℃ ， 2~3d168。4~6℃168。醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 液體石蠟法n 指將菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上，最適條件下培養(yǎng)好后注入滅菌的液體石蠟，使其覆蓋整個斜面，再直立放置于低溫（ 4～ 6℃ ）干燥處進行保存的一種菌種保藏方法。優(yōu)質(zhì)化學純液體石蠟216。冷卻至室溫。液面高出斜面頂部 1cm216。直立放置；216。醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 液體石蠟法n 操作簡單，使用比較方便；n 對設備要求不高，對人員操作水平有一定要求； 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 真空冷凍干燥法n 指將保藏的菌種細胞或孢子懸浮于保護劑中，經(jīng)預凍后在真空條件下使水分升華，再經(jīng)真空封存后保存的一種長期菌種保存方法。l 棉塞l 打棉塞， 160℃ 定型 2h；l 標簽l 激光打印標簽，標明菌株編號和保藏日期，大小約 1020mm。l 滅菌 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 n 凍干樣品制備n 制備斜面培養(yǎng)物；n 將保護劑用無菌吸管注入到斜面培養(yǎng)物上，用吸管刮取斜面上的菌體，使菌體均勻地懸浮在保護劑內(nèi)。醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 真空干燥 l 在開動真空泵后應使真空度在 15min內(nèi)達到 ，隨后逐漸達到 ～ ，在此條件下，樣品將保持凍結狀態(tài)，其中水分則不斷升華，干燥才能順利地進行。醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 熔封 n 將安瓿管的中上部用火焰燒軟，拉成細頸；n 將安瓿管裝到多歧管上，用火焰在細頸處熔封；n 拉管時注意火焰不要離菌體太近。 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 保藏 4～ 6℃ 下避光保藏，一般可保藏 8～ 10年。醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 真空冷凍干燥法v 保藏、運輸方便；v 保藏時間長 (5 ～ 10年 )；v 對設備要求高 (真空冷凍干燥機、多歧管 )，對人員操作水平要求高；v 冷凍干燥過程對菌體有損傷，需恢復培養(yǎng)。準備冷凍管準備保護劑 （ 10%15%甘油）準備菌懸液（細胞、孢子或芽孢懸液）制備冷凍管（取菌懸液和保護劑至冷凍管）保藏（ 80℃ ， 2～ 5年）醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 Microbank醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 80℃℃ 冰箱凍結法冰箱凍結法v 使用方便；v 保藏時間較長；v 對設備要求高 (80℃ 冰箱 )；v 運輸不方便。醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 操作步驟n 冷凍管準備n 保護劑制備n 保藏培養(yǎng)物準備n 預凍 — 將程序降溫系統(tǒng)預冷到 4℃ ，將制備好的冷凍管放入其中，以 1℃ /min降溫速率降至 35℃ ； — 使用程序降溫盒。同 “－ 80℃ 冰箱凍結法 ” 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 液氮超低溫凍結法v 保藏時間長；v 保藏效果好，菌種不易退化；v 對設備要求高 (程控降溫儀、液氮罐 )，對人員操作水平要求高；v 保藏成本高。藥品微生物檢驗用的試驗菌應來自認可的 國內(nèi)或國外菌種收藏機構 的標準菌株，或使用與標準菌株所有相關特性等效的 商業(yè)派生菌株 。 普通微生物菌種保藏管理中心（ CCGMC） , 農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心（ ACCC） ,中國農(nóng)科院區(qū)劃所168。 醫(yī)學微生物菌種保藏管理中心（ CMCC），中國藥品生物制品鑒定所168。 獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心（ CVCC），農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)藥品監(jiān)察所168。醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 國認外可的菌種收藏機構n 世界菌種保藏聯(lián)合會 WFCC (World Federation Of Culture Collection)全球注冊的菌種保藏機構 583家168。 NRRL168。 NCTC168。 CBS168。 JCM醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 菌株代數(shù)菌株代數(shù) 美國藥典（ USP）中規(guī)定： “將微生物接種至一新鮮培養(yǎng)基上 /內(nèi)，每萌發(fā)一次即稱為一代， ”并規(guī)定 “菌種的傳代次數(shù)（自原始菌種凍干粉起）不得超過 5代 ”。 China39。(G1)Separation of singleolony(G2)Working(W3)Working(W4)Working strain (W5)醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 標準菌株提供形式標準菌株提供形式AccuracyEasy of Use(preparation)HighLowComplicatedEasyQuanti Cult (REMEL)Standard Strains (ATCC/NBRC etc.)EZCFU one step (MicroBioLogics)KWIKSTIK (MicroBioLogics)Culti Loops (REMEL)BioBall (BTF/bioMerieux)醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 n 質(zhì)控菌株 質(zhì)控菌株的使用質(zhì)控菌株醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2023 謝謝觀看 /歡迎下載BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAITH