my動(dòng)物細(xì)胞工程ppt課件-閱讀頁
2024-09-30 18:18本頁面
【正文】 ① 從小鼠或其他動(dòng)物體中取 B淋巴細(xì)胞前必須先注射抗原 ， 使體內(nèi)發(fā)生免疫反應(yīng) ， 而且參與融合的細(xì)胞應(yīng)是漿細(xì)胞 (只有漿細(xì)胞能產(chǎn)生抗體 )或已免疫過的 B淋巴細(xì)胞 ， 不能簡(jiǎn)單地說 B淋巴細(xì)胞 。 ③ 兩次篩選：第一次利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，第二次是篩選出能分泌特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。這種 雜種細(xì)胞 的特點(diǎn)是既能迅速大量繁殖 ,又能產(chǎn)生單一的特異性 抗體 。由于該細(xì)胞群是單個(gè)雜交瘤細(xì)胞克隆得來的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強(qiáng)的單克隆抗體。 B淋巴細(xì)胞融合 ？ 小鼠 骨髓瘤細(xì)胞 可以在 體外 培養(yǎng)條件下大量 增殖， B淋巴細(xì)胞能夠產(chǎn)生抗體，細(xì)胞的同源性越近，融合形成的雜種細(xì)胞越易成活。 問題解釋 胞間的融合？ 就目前常用的細(xì)胞融合方法來看，不管是用物理的、化學(xué)的方法，還是生物的方法，其 融合率都不可能是 100%。 即使兩個(gè)細(xì)胞已發(fā)生融合，但并不一定是研究者期望得到的細(xì)胞類型。 的單克隆抗體能否用于人體疾病的治療 ？ 試分析 ？ 不能 。 植物體細(xì)胞雜交和單克隆抗體的制備的比較 植物體細(xì)胞雜交 動(dòng)物細(xì)胞融合 (單克隆抗體的制備 ) 理論基礎(chǔ)(原理 ) 細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的全能性 細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞增殖 融合前處理 酶解法去除細(xì)胞壁 (纖維素酶、果膠酶 ) 注射特定抗原，免疫處理正常小鼠 促融方法 (1)物理法：離心、振動(dòng) 、電刺激等 (2)化學(xué)法：聚乙二醇(PEG) (1)物、化法：與植物細(xì)胞融合相同 (2)生物法：滅活的仙臺(tái)病毒 植物體細(xì)胞雜交 動(dòng)物細(xì)胞融合 (單克隆抗體的制備 ) 過程 第一步 原生質(zhì)體的制 備 (酶解法 ) 正常小鼠免 疫處理 第二步 原生質(zhì)體的融合 (物、化法 ) 動(dòng)物細(xì)胞的融合 (物、化、生法 ) 第三步 雜種細(xì)胞的篩 選與培養(yǎng) 雜交瘤細(xì)胞的篩選與培養(yǎng) 第四步 雜種植株的誘 導(dǎo)與鑒定 單克隆抗體 的提純 意義和用途 (1)克服遠(yuǎn)源雜交不親和的障礙，大大擴(kuò)展了雜交的親本組合范圍 (2)克服有性雜交的母系遺傳現(xiàn)象，獲得細(xì)胞質(zhì)基因的雜合子，研究細(xì)胞質(zhì)遺傳 (1)制備單克隆抗體等 (2)診斷、治療、預(yù)防疾病 利用 細(xì)胞工程方法，以 SARS病毒核衣殼蛋白為抗 原制備出單克隆抗體。 (1).該實(shí)驗(yàn)方案的目的是： ________________ (2).該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？ (3).A是從小鼠的脾臟中取得 __________ 該細(xì)胞能夠產(chǎn)生 ______ 。 (5).C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括 ________培養(yǎng)和__________培養(yǎng)兩個(gè)階段，其中 _____代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。 狂犬病病毒的核酸是 RNA， 機(jī)體感染病毒后產(chǎn)生的特異性 IgG抗體 ， 能消除狂犬病病毒 ， 這是接觸狂犬病病毒后及時(shí)注射疫苗和特異性抗體的重要依據(jù) 。 請(qǐng) 根據(jù)上述材料，回答下列問題： (1)狂犬病病毒的毒力可發(fā)生變異。將野毒株在家兔腦________內(nèi)連續(xù)傳 50代后，變成固定毒株。 (2)特異性抗體獲取的方法可用單克隆抗體制備法。 (3)如圖是單克隆抗體制備過程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答： ① 圖中 A過程，從小鼠的脾臟中取得的 “ 小鼠細(xì)胞” 是 ________細(xì)胞，該細(xì)胞能夠產(chǎn)生 ________。 ② 圖中 B過程是細(xì)胞融合，該過程需要用滅活的________、聚乙二醇或電激等誘導(dǎo) 。 與這種方法制備的抗體相比 ，單克隆抗體具有 __________________________________等 特點(diǎn) 。 (5)單克隆抗體技術(shù)還有哪些用途？________________________________________。 山東理綜 ,35人類在預(yù)防與診療傳染性疾病過 程中 ,經(jīng)常使用疫苗和抗體 。 (2)過程②構(gòu)建 A基因表達(dá)載體時(shí) ,必須使用 和 兩種工具酶。 (4)對(duì)健康人進(jìn)行該傳染病免疫預(yù)防時(shí) ,可選用圖 中基因工程生產(chǎn)的 所制備的疫苗 。或用圖 中的 進(jìn)行特異性結(jié)合檢測(cè) 。 卡佩基、奧利弗 埃文斯。所謂“基 因靶向”技術(shù) (人們大都稱之為基因“敲除”技術(shù) ) 是指利用細(xì)胞脫氧核糖核酸 (DNA)可與外源性 DNA 同源序列發(fā)生同源重組的性質(zhì) ,定向改造生物某一 基因的技術(shù) 。 有了 “ 基因靶向 ” 這一高精 度瞄準(zhǔn)鏡 ,科學(xué)家就可以精確瞄準(zhǔn)任何一個(gè)基因 , 使其失去活性 ,進(jìn)而研究該基因的功能。 第二步是用修改過 的基因取代原有基因 。 用修改過的基因取代原有基 因時(shí)還需要 酶。 給出一種檢驗(yàn)胰島素基因是否被 “ 敲除 ” 的方法 。 ② 重組細(xì)胞培養(yǎng)成胚胎的過程所用的培養(yǎng)基 ,從物 理性質(zhì)上看屬于 ,培養(yǎng)基中 至少要加入水 、 無機(jī)鹽 、 葡萄糖 、 氨基酸 、 維生 素 、 促生長(zhǎng)因子 、 微量元素和 等 物質(zhì) ,同時(shí)要?jiǎng)?chuàng)造適宜溫度 、 pH和無菌條件 ,其中 需要無菌環(huán)境的原因是 。 (2)“ 敲除 ” 一種基因需 要分兩步來完成：第一步是利用限制性核酸內(nèi)切 酶切除哺乳動(dòng)物染色體中有某種功能的基因 。 基因探針 可檢驗(yàn)?zāi)康幕?。 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基的成 分有水 、 無機(jī)鹽 、 葡萄糖 、 氨基酸 、 維生素 、 動(dòng) 物血清等 ,需在無菌條
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