dna重組技術的基本工具-閱讀頁
2025-07-29 14:33本頁面
【正文】 NA分子。（1）載體DNA必需有一個或多個限制酶的切割位點，以便目的基因可以插入到載體上去。（2）載體DNA必需具備自我復制的能力，或整合到受體染色體DNA上隨染色體DNA的復制而同步復制。（4）載體DNA必需是安全的，不會對受體細胞有害，或不能進入到除受體細胞外的其他生物細胞中去。實際上自然存在的質(zhì)粒DNA分子并不完全具備上述條件，都要進行人工改造后才能用于基因工程操作。P4尋根問底：根據(jù)你所掌握的知識，你能分析出限制酶存在于原核生物中的作用是什么嗎？解析：原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，但是，生物在長期的進化過程中形成了一套完善的防御機制，以防止外來病原物的侵害。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，從而達到保護自身的目的?；蚬こ讨兴玫倪B接酶有兩種：一種是從大腸桿菌中分離得到的。這兩種連接酶催化反應基本相同，都是連接雙鏈DNA的缺口（nick），而不能連接單鏈DNA。（2）DNA聚合酶是以一條DNA鏈為模板，將單個核苷酸通過磷酸二酯鍵形成一條與模板鏈互補的DNA鏈；而DNA連接酶是將DNA雙鏈上的兩個缺口同時連接起來。此外，二者雖然都是由蛋白質(zhì)構成的酶，但組成和性質(zhì)各不相同。因為一般基因有上千個堿基對?？赡苁鞘裁丛蛟斐傻模拷馕觯嚎赡苁羌羟形稽c或連接位點選得不對（也可能是其他原因）。【拓展閱讀】磷酸二酯鍵全稱為3′,5′－磷酸二酯鍵，是核酸中核苷酸的連接方式，組成了核酸的一級結構。若干個核苷酸間以3′,5′－磷酸二酯鍵連接成的多核苷酸鏈為核酸。另一端核苷酸上第3位的羥基是自由的，所以此核苷酸稱為3′羥基末端或3′端。2. 影響限制性內(nèi)切酶活性的因素（1）DNA純度在DNA樣品中若含有蛋白質(zhì)，或沒有去除干凈制備過程中所用的乙醇、EDTA、SDS、酚、氯仿和某些高濃度金屬離子，均會降低限制酶的催化活性，甚至使限制酶不起作用。使用所有限制酶均可發(fā)揮活性的一種緩沖液。據(jù)此可分為高鹽、中鹽和低鹽緩沖液，在進行雙酶解或多酶解時，若這些酶切割可在同種緩沖液中作用良好，則幾種酶可同時酶切；若這些酶所要求的緩沖液有所不同，可采用以下三種方法進行消化反應：先用要求低鹽緩沖液的限制性內(nèi)切酶消化DNA，然后補足適量的NaCl，再用要求高鹽緩沖液的限制酶消化；先用一種酶進行酶解，然后用乙醇沉淀酶解產(chǎn)物，再重懸于另一緩沖液中進行第二次酶解。不同的核酸內(nèi)切限制酶，具有各自的最適反應溫度。（4）DNA的分子結構DNA分子構型對核酸內(nèi)切限制酶的活性有很大影響，如消化超螺旋的DNA比消化線性DNA用酶量要高出許多倍。限制性內(nèi)切酶反應的終止 通常是采用65℃條件下溫浴5min；加終止反應液（）螯合Mg2 ，以終止反應。下列敘述不正確的是( ) A．常用相同的限制性內(nèi)切酶處理目的基因和質(zhì)粒B．DNA連接酶和DNA聚合酶是構建重組質(zhì)粒必需的工具酶C．可用含抗生素的培養(yǎng)基檢測大腸桿菌中是否導入了重組質(zhì)粒D．導入大腸桿菌的目的基因不一定能成功表達答案：B 解析：構建重組質(zhì)粒必需的工具酶是限制性內(nèi)切酶和DNA連接酶，其作用部位是磷酸與脫氧核糖之間的磷酸二酯鍵，而DNA聚合酶的作用是在DNA復制過程中用于連接堿基間的氫鍵，故B選項錯誤。下列敘述不正確的是 ( )A．基因非編碼區(qū)對于抗蟲基因在棉花細胞中的表達不可缺少B．重組DNA分子中增加一個堿基對，不一定導致毒蛋白的毒性喪失C．抗蟲棉的抗蟲基因可通過花粉傳遞至近緣作物，從而造成基因污染D．轉(zhuǎn)基因棉花是否具有抗蟲特性是通過檢測棉花對抗生素抗性來確定的答案：D 解析：基因具有特異性，一種基因只能控制一種性狀的表達。因此，轉(zhuǎn)基因棉花是否具有抗蟲特性是不能通過檢測棉花抗生素的抗性對來確定的。(1)科學家在進行上述基因操作時，要用同一種 分別切割質(zhì)粒和目的基因，質(zhì)粒的黏性末端與目的基因DNA片段的黏性末端就可通過 而黏合。經(jīng)分析，該植株含有一個攜帶目的基因的TDNA片段，因此可以把它看作是雜合子。(3)種植上述轉(zhuǎn)基因油菜，它所攜帶的目的基因可以通過花粉傳遞給近緣物種，造成“基因污染”。答案：(1)限制性內(nèi)切酶 堿基互補配對(2)3／4 雌雄配子各有1／2含抗除草劑基因；受精時，雌雄配于隨機結合(3)葉綠體遺傳表現(xiàn)為母系遺傳，目的基因不會通過花粉傳遞麗在下一代中顯現(xiàn)出來解析：1）在切割質(zhì)粒和目的基因時，要用同一種限制性內(nèi)切酶，使其產(chǎn)生相同的黏性末端，然后加入適量的DNA連接酶，質(zhì)粒的黏性末端與目的基因的黏性末端就會通過堿基互補配對而結合，形成一個重組DNA分子。（3）葉綠體DNA為細胞質(zhì)基因，故把目的基因?qū)肴~綠體后，給基因的遺傳方式就屬于細胞質(zhì)遺傳，其特點為母系遺傳，且后代一般不出現(xiàn)一定的分離比。4．［2003上海高考］“人類基因組計劃”中的基因測序工作是指測定 （ ） A．DNA的堿基對排列順序 B．mRNA的堿基排列順序C．蛋白質(zhì)的氨基酸排列順序 D．DNA的基因排列順序答案：A 解析：“人類基因組計劃”就是分析測定人類基因組的核苷酸序列，而基因是有遺傳效應的DNA片段，所以“人類基因組計劃”中的基因測序工作就是測定DNA（基因）的堿基對排列順序。5．［2003上海高考］下列關于基因工程的敘述，正確的是（ ） A．基因工程經(jīng)常以抗菌素抗性基因為目的基因B．細菌質(zhì)粒是基因工程常用的運載體C．通常用一種限制性內(nèi)切酶處理含目的基因的DNA，用另一種處理運載體DNAD．為育成抗除草劑的作物新品種，導入抗除草劑基因時只能以受精卵為受體答案：B 解析：在基因工程操作過程中，需要用同一種限制性內(nèi)切酶處理含目的基因的DNA和運載體DNA；細菌質(zhì)粒是基因工程常用的運載體，目的基因?qū)氲氖荏w細胞有多種，不僅僅是受精卵。超級水稻的培育和抗蟲棉的培育根據(jù)的原理是基因重組
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