離子交換層析ppt課件-閱讀頁(yè)
2025-05-27 12:40本頁(yè)面
【正文】 ? 原則 : ? 所用洗脫液比吸附物質(zhì)具有更活潑的離子或基團(tuán) , ? 改變?nèi)芤旱? pH 或離子強(qiáng)度 ? *增強(qiáng)洗脫液與離子交換劑的結(jié)和力 ? *降低待分離物與離子交換劑的結(jié)合力 ? 洗脫方式 :梯度洗脫 離子交換層析分離氨基酸及其測(cè)定 ? (一 )原理 ? 氨基酸是兩性電解質(zhì)，各有一定的等電點(diǎn)（ pI）。本實(shí)驗(yàn)所用樣品為天冬氨酸和賴氨酸的混合液，分別屬于酸性氨基酸（ pI ）和堿性氨基酸（ pI ）。以強(qiáng)酸型 ? 陽(yáng)離 子 交換樹脂 Dowex 50為固定相，由于天冬氨酸在 pH 檸檬酸鈉緩沖液中 帶負(fù)電荷不與樹脂結(jié)合，首先被洗脫出來(lái)。隨后再通過(guò)改變洗脫液的 pH 值，降低賴氨酸與樹脂的親和力而將賴氨酸從樹脂中洗脫出來(lái)。因此可將收集到的水溶液與茚三酮試劑反應(yīng)，觀察其是否生成藍(lán)紫色化合物而判斷洗脫情況，并可通過(guò)比色定量 . ? (二 )試劑 ? Dowex 50 型 ? Dowex 50 為強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹脂 . 顆粒直徑 297μm，以帶負(fù)電荷的 磺酸基 團(tuán)（ — SO3H）為功能基團(tuán)，它的解離不受外界溶液 pH 的影響。 ? ? （ 1） pH 檸檬酸鈉緩沖液 ? 天冬氨酸 pI ＜ pH 檸檬酸鈉緩沖液帶負(fù)電荷。 ? (2) mol/L NaOH ? 改變洗脫體系的 pH值 ， 使本與樹脂結(jié)合的賴氨 ? 酸帶上負(fù)電荷 ， 從而被洗脫下來(lái) 。 ? ? 氨基酚與茚三酮反應(yīng)顯色以檢測(cè)氨基酸洗脫情況。再用 平衡 10分鐘。當(dāng)樣品進(jìn)入樹脂后，加入，每管收集3ml（控制流速 15滴 /分鐘）。用 10分鐘，再生。
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