核酸的生物化學(xué)ppt課件-閱讀頁(yè)
2025-05-27 04:29本頁(yè)面
【正文】 線管 ——染色質(zhì) ：由核心顆粒與連接區(qū)構(gòu)成的核小體彼此串聯(lián)，成串珠狀，再進(jìn)一步卷曲，形成超螺線管結(jié)構(gòu)。（ 2） DHU環(huán)（二氫尿嘧啶）。（ 4） T?環(huán)：含胸腺嘧啶核苷和假尿嘧啶核苷為特征。中間為密碼子 Codon。 ? 分子大小可用長(zhǎng)度、鹼基對(duì)數(shù)目及分子量表示。 ? DNA分子大小測(cè)定的經(jīng)典方法：超速離心測(cè)沉降系數(shù)（ S） 核酸的理化性質(zhì)： 酸性化合物 ? 兩性 \但酸性強(qiáng)： DNA、 RNA在其多核苷酸鏈內(nèi)既有酸性的磷酸基又有堿性的含氮雜環(huán)堿，因此核酸與蛋白質(zhì)一樣，也是兩性電解質(zhì)。 ? 電泳行為 ——泳向正極（ pH78）： 在中性或堿性溶液中，核酸帶負(fù)電荷，在外加電場(chǎng)作用下向陽(yáng)極移動(dòng)。當(dāng)向核酸溶液中加入適當(dāng)鹽溶液后，帶正電荷的金屬離子即可將核酸的負(fù)離子中和，在有乙醇或異丙醇存在時(shí)核酸即可從溶液中沉淀析出。 核酸的理化性質(zhì)：降解 ? 酸水解： DNA較 RNA更敏感， N糖苷鍵斷裂，嘌呤鹼比嘧啶鹼更不穩(wěn)定 ? 鹼水解： DNA對(duì)鹼穩(wěn)定，鹼水解多用于 RNA。 ? 酶降解：內(nèi)切酶（胰 DNase I)、外切酶（蛇毒磷酸二酯酶） 核酸的理化性質(zhì)： 高分子性質(zhì) ? 粘度 DNARNA 核酸的分子量很大，核酸溶液具有較大的粘性。 RNA溶液的粘度較 DNA為小。 粘度測(cè)定可用作 DNA變性的指標(biāo) 。核酸分子大小表示方法有以下幾種：即千道爾頓 (kD)、堿基對(duì) (bp)或千堿基對(duì) (kb)數(shù)目、離心沉降常數(shù) (s)。如真核生物核糖體小亞基中含的 rRNA分子大小為 18S，大亞基中的 rRNA有 28S、 5S和 種分子。 核酸的紫外吸收 ? 核酸中的嘌呤鹼、嘧啶鹼及其組成的核苷、核苷酸及核酸對(duì)紫外光都有強(qiáng)吸收作用。 ? 低色效應(yīng)（ Hypochromic effect）： DNA雙螺旋松散后，所得的光吸收值幾乎是其組成中所有核苷酸光吸收值的總和。 ? 核酸分子中鹼基的克分子數(shù)與磷的克原子數(shù)相等，可根據(jù)核酸溶液中的磷含量及紫外光的吸收值來(lái)測(cè)定核酸量。 根據(jù)變性因素區(qū)分為堿變性、熱變性等。 與核酸分子長(zhǎng)度有關(guān)，分子愈長(zhǎng)， Tm愈高。 DNA變性的復(fù)性 renaturation DNA發(fā)生熱變性后，經(jīng)緩慢降溫，如放置室溫逐漸冷卻，解開(kāi)的互補(bǔ)鏈之間對(duì)應(yīng)的堿基對(duì)再形成氫鍵，恢復(fù)完整的雙螺旋結(jié)構(gòu)，稱DNA熱變性的復(fù)性。 慢 驟 ● 核酸分子雜交 hybridization 當(dāng)不同來(lái)源的核酸變性后一起復(fù)性時(shí)，只要這些核酸分子中含有相同序列的片段，即可形成堿基配對(duì)，出現(xiàn)復(fù)性現(xiàn)象，形成雜種核酸分子，或稱雜化雙鏈，稱核酸分子雜交。 ? 在適當(dāng)條件或環(huán)境中與待測(cè)核酸樣品雜交，通過(guò)放射性同位素自顯影、顯色、發(fā)光或熒光檢測(cè)，判斷待測(cè)的核酸分子是否含有與探針同源的核酸序列。 DNA的生物合成 ? DNA生物合成的概念 生物體內(nèi)由 DNAP催化合成 DNA的過(guò)程，包括 DDDP指導(dǎo)的 DNA合成 —— 復(fù)制 RDDP指導(dǎo)的 DNA合成 —— 反轉(zhuǎn)錄 DDDP、重組酶或 SOS系統(tǒng)酶參與的 DNA修復(fù) DNA的復(fù)制合成 ? 半保留復(fù)制概念 復(fù)制起始點(diǎn)（ ori）和方向（ 5’? 3’） 復(fù)制體系 —— DnaB（識(shí)別 ori） 、解旋酶 (Topo)、解鏈蛋白(Rep蛋白 )、引發(fā)酶 /前體、 DNAPIII、 DNAPI、DNA連接酶 半保留復(fù)制 DNA合成進(jìn)行時(shí)，以兩條親代 DNA鏈中的每 —條鏈為模板，在 DNA指導(dǎo)下的 DNA聚合酶催化下，按 A與 T、 G與C堿基配對(duì)原則合成子代 DNA的過(guò)程稱DNA的復(fù)制 (replication)。 解旋、解鏈： DNA Topo酶和解鏈酶，松弛 DNA超螺旋結(jié)構(gòu)，形成復(fù)制叉 RNA引物合成：前導(dǎo)鏈在引發(fā)酶和引發(fā)前體合成 RNA引物（ 10~60nt)，隨從鏈引物在引發(fā)酶和引發(fā)前體以及 DnaA蛋白聯(lián)合作用下。此時(shí)出現(xiàn)的缺口由 DNA的繼續(xù)延長(zhǎng)而填補(bǔ)，然后由 DNA連接酶將這些片段再連接起來(lái)，形成完整的 DNA鏈。 ? DNA損傷可有 DNA的斷鏈、鏈內(nèi)交聯(lián)和鏈間交鏈等； DNA的突變可分為點(diǎn)突變、缺失突變、插入突變和置換突變。修復(fù)有多種方式
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