【正文】 越純越好；一般使用靈敏度最大的吸收波長作為測定波長。 （光學(xué)因素） College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 56 b．雜散光 儀器中常含有與所需波長相差較大的光，一般樣品不吸收， 所以不干擾測定。 A變大，正誤差。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 57 a. 吸光物質(zhì)在溶液中發(fā)生化學(xué)變化引起的偏離 ???? ???? HC rOH C rOOHOCr 222 2442272黃色橙色 由于吸光物質(zhì)變成了不同的存在形式 消除措施：控制適當(dāng)?shù)娘@色條件。 b. 配合物不穩(wěn)定也會引起的偏離 有些顯色配合物不穩(wěn)定 ,發(fā)生解離 （ 越稀 ） 。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 58 紫外 — 可見分光光度計 紫外－可見分光光度計由上五部分組成。 : 160～ 375nm，用于紫外光區(qū)。常用的色散元件有棱鏡和光柵。其特點(diǎn)是：色散波長范圍寬，分辨率高，色散率基本上不隨波長改變而改變。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 60 ★ 吸收池 absorption cell 比色皿 cuvette 玻璃吸收池：用于可見光區(qū) 石英吸收池：用于紫外區(qū) 1）盛放參比的吸收池和盛放樣品的吸收池應(yīng)匹配，即有相同的厚度與透光性。 比色池 、 、 、 微量池 流動池 5－ 11uL College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 61 ★ 檢測器 將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘栠M(jìn)行檢測。檢流計、數(shù)字顯示及微機(jī)（控制及數(shù)據(jù)的采集和處理）。 72 75 72英國 SP500型以及 Backman DU－ 8型 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 63 差值Δ A 光源 單色器 吸收池 檢測器 顯示 光束分裂器 特點(diǎn)：消除光源強(qiáng)度變化所引起的誤差 國產(chǎn) 710型、 730型、 740型都屬于這類型。 國產(chǎn) WFZ8005型 、 島津 UV260型 、 UV265型 11110lg BSbcIIA ??????? ? 22220lg BSbcIIA ???? ????bcAAIIA )(lg 121221?????? ?? ??????College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 65 分光光度計校正 儀器使用過一段時間后 波長 和 吸光度 出現(xiàn)漂移，要進(jìn)行校正。 吸光度校正 可用 K2CrO4標(biāo)準(zhǔn)溶液來校正吸光度標(biāo)度。L－ 1KOH溶液中，在 1cm光程的吸收池中，在 25℃時用不同波長測得的吸光度值（有表可對） 。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 67 最佳吸光度范圍 ～ (T％為 65～ 20％ ) ( ， College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 68 二、反應(yīng)條件選擇 顯色劑與待測離子生成配合物組成恒定、穩(wěn)定性好、吸收能力強(qiáng)，即 ε 大、顯色劑與配合物的吸收波長有明顯的差別，一般要求 Δ ε ＞ 60nm。 （配位數(shù)和水解等與 pH相關(guān)）。 當(dāng)組成簡單，共存組分很少，顯色劑沒有吸收時， 可消除溶劑、吸收池等因素的影響。 消除 顯 色劑 的吸收影響。這種參比溶液適用于試樣中有較多的共存組分，加入的顯色劑量不大，且顯色劑在測定波長無吸收的情況。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 71 小結(jié)： 參比溶液選擇原則： 凡是有色的溶劑或顯色劑或基底液，應(yīng)盡量消除對測定配合物的吸收影響。 如果仍有干擾，則可采取下列方式： College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 72 例雙硫腙能與 Hg2+、 Pb2+、 Cu2+、 Ni2+、 Cd2+等形成有色配合物，其中與 Hg2+生成的配合物最穩(wěn)定，而上述其他離子在此條件下不發(fā)生反應(yīng)。 [2] and ,“Ultraviolet and Visible Absorption Spectra of Aromatic Comp ounds” ,Wiley,New York, 1951.(597種芳香化合物 )。 [4] “Organic Electronic Spectral Data”， John Wiley and Sons， 1946～ （目前還在繼續(xù)編寫）。 例如 乙醇中微量苯的鑒定。 例如 標(biāo)準(zhǔn)菲的氯仿溶液在 296nm處有強(qiáng)吸收，測得摩爾吸光系數(shù)比精制的菲在相同波長處低 10％，說明菲樣品的實(shí)際含量只有 90％ College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 78 三、結(jié)構(gòu)分析 可以鑒定化合物中的共軛結(jié)構(gòu)和芳香環(huán)結(jié)構(gòu)（無這些結(jié)構(gòu)，則近紫外區(qū)內(nèi)無吸收）。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 85 （二）多組分定量方法 (a)當(dāng)各組分的吸收光譜不重疊，如單組分測定其濃度。 BBAABABABBAABABAbcbcAAAbcbcAAA2222211111????????????????????????1A??1B?? 2A??2B??可分別用已知濃度 A、 B純液求出 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 86 2. 雙波長法 — 等吸收點(diǎn)法 雙波長輸出信號為 Δ A 輸出訊號 Δ A與干擾組分 A無關(guān)，它只正比于待測組分 B的濃度，即消除了 A的干擾 . 吸收光譜重疊較為嚴(yán)重 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 87 當(dāng)干擾組分 A是陡坡狀，不存在兩個波長處等吸收點(diǎn)。 適應(yīng)范圍：濃度很稀或很濃溶液。導(dǎo)數(shù)光譜是解決干擾物質(zhì)與被測物光譜重疊，消除膠體等散射影響吸收，提高光譜分辨率的一種數(shù)據(jù)處理技術(shù)。同樣可得到二階、三階 n階導(dǎo)數(shù)信號亦與濃度成正比。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 91 三、配合物組分及其穩(wěn)定性常數(shù)的測定 摩爾比法、等摩爾連續(xù)變化法、斜率比法和平衡移動法四種，前兩種方法更為常用 1. 摩爾比法 (也稱為飽和法 ) 固定金屬離子 M的濃度，改變配位體 R的濃度，可得到一系列 CR/ CM值不同的吸光度曲線，曲線拐點(diǎn)處為 n. 設(shè)配合物電離度為 α 顯色 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 92 四、弱酸離解常數(shù)的測定 若測出 [L][HL],即可求出 Ka。 第三份為已知 pH值的緩沖溶液，分別在堿性和酸性體的最大吸收波長處測定總吸光度，解聯(lián)立方程求得 [L][HL]，然后按前式求出 Ka。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 95 澳洲的寶石蛋白石 (opal) 蛋白石是由二氧化硅 納米 球 (nanosphere)沉積形成的礦物，其色彩繽紛的外觀與色素?zé)o關(guān)， 而是因?yàn)樗?幾何結(jié)構(gòu)上的周期性 使它具有光子能帶結(jié)構(gòu)，隨著能隙位置不同，反射光的顏色也跟著變化 光子晶體－選擇反射太陽光中某波長光而呈現(xiàn)顏色 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 96 這是因?yàn)樘柟馐怯?紅 、橙、黃、綠、青、 藍(lán) 、紫七種顏色組成的。大氣中的塵埃以及其他微粒散射藍(lán)光的能力大于散射其他波長較長的光子的能力，因此天空顯現(xiàn)出藍(lán)色。 散射能力不同－使天空呈現(xiàn)藍(lán)色