【正文】 假單胞菌屬、黃單胞菌屬等。 轉(zhuǎn)化過程大致可分為： 感受態(tài)階段 DNA的結(jié)合與吸收 轉(zhuǎn)化 DNA的整合 （ 1） 感受態(tài)階段 感受態(tài) （ Competence） 是指 受體細(xì)胞最易接受外源 DNA片段 ，并實現(xiàn)其轉(zhuǎn)化的一種生理狀態(tài) 。 研究發(fā)現(xiàn) ， 能進(jìn)行轉(zhuǎn)化的受體細(xì)胞必須處于感受態(tài) 。 一般原核生物的核基因組是一條環(huán)狀 DNA長鏈，在自然或人為條件下均易斷裂成碎片，故轉(zhuǎn)化因子通常只是 15kb左右長的片段，其上平均含有 15個基因。供體菌的 dsDNA片段與感受態(tài)細(xì)胞表面的膜連 DNA結(jié)合蛋白相結(jié)合，其中一條鏈被水解，另一條進(jìn)入細(xì)胞。 來自供體菌的 ssDNA片段被細(xì)胞內(nèi)的特異蛋白結(jié)合，并使其與感受態(tài)細(xì)胞染色體上的同源區(qū)段配對重組，形成一小段雜合 DNA區(qū)段，隨著染色體 復(fù)制而復(fù)制，形成轉(zhuǎn)化子（即含有雜合 DNA的受體菌）。 轉(zhuǎn)染 與轉(zhuǎn)化不同之處是病毒或噬菌體并非遺傳基因的供體菌 ，中間也不發(fā)生任何遺傳因子的交換或整合 ， 最后也不產(chǎn)生具有雜種性質(zhì)的轉(zhuǎn)化子 。獲得新遺傳性狀的受體細(xì)胞，稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)子（ transductant）?，F(xiàn)在 ， 許多原核生物都發(fā)現(xiàn) 有轉(zhuǎn)導(dǎo)現(xiàn)象 ， 如 大腸桿菌 、 枯草桿菌 、假單胞菌屬 、 志賀氏菌屬 、 葡萄球菌屬 、 弧菌屬和根瘤菌屬等 。 目前 已知 的轉(zhuǎn)導(dǎo) 方式主要有以下幾 種 ： 普遍轉(zhuǎn)導(dǎo) 局限轉(zhuǎn)導(dǎo) 溶源轉(zhuǎn)變 （ 1） 普遍轉(zhuǎn)導(dǎo)（ Generalized transduction） 通過完全缺陷噬菌體對供體菌任何 DNA小片段的 “ 誤包 ” ，而實現(xiàn)其遺傳性狀傳遞至受體菌的轉(zhuǎn)導(dǎo)現(xiàn)象，稱為普遍轉(zhuǎn)導(dǎo)。 ① 完全普遍轉(zhuǎn)導(dǎo) ②流產(chǎn)普遍轉(zhuǎn)導(dǎo) 經(jīng)轉(zhuǎn)導(dǎo)獲得供體菌 DNA片段的受體菌，如果外源 DNA在其內(nèi)既不進(jìn)行交換、整合和復(fù)制，也不迅速消失，而僅進(jìn)行轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)譯和性狀表達(dá)，這種現(xiàn)象稱為流產(chǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)。所以，能在選擇性培養(yǎng)基平板上形成 一個 微小菌落 （即其中只有一個細(xì)胞是轉(zhuǎn)導(dǎo)子） 就成了流產(chǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)子的特點。 是指通過部分缺陷的溫和噬菌體把供體菌的少數(shù)特定基因攜帶到受體菌中，并獲得表達(dá)的轉(zhuǎn)導(dǎo)現(xiàn)象。 以 低頻轉(zhuǎn)導(dǎo) 為例說明： 溫和噬菌體感染 供 體菌后， 可 使 供體 細(xì)胞溶源化， 當(dāng) 該 供體 菌發(fā)生誘導(dǎo)裂解時， 由于 極少數(shù)（ 105）的前噬菌體發(fā)生不正常切離，其結(jié)果會將插入位點兩側(cè)之一的少數(shù)宿主基因（如 λ 前噬菌體的兩側(cè)分別為 gal基因 和 bio基因）連接到噬菌體 DNA上，通過衣殼的 “ 誤包 ” ，就形成了缺陷噬菌體（ Defective phage） 。 （ 3） 溶源轉(zhuǎn)變（ Iysogenic conversion） 如 白喉棒狀桿菌 （ Corynebacterium diphtheriae） 和 肉毒梭菌 （ Clostridium botulinum） 當(dāng)溫和噬菌體感染宿主而使其發(fā)生溶源化時 ， 因噬菌體的基因整合到宿主的核基因組上 ， 而使后者獲得了除免疫性以外的新性狀的現(xiàn)象 ， 稱為溶源轉(zhuǎn)變 。 在細(xì)菌和放線菌中 普遍 存在接合現(xiàn)象 ， 尤以生活于動物腸道內(nèi)的一些 G－ 細(xì)菌最為常見 。 此外 ， 接 合還可發(fā)生在不同屬的一些種間 ， 如 鼠傷寒沙門氏菌 間或鼠傷寒沙門氏菌與痢疾志賀氏菌 （ Shigella dysenteriae） 間 。 通過接合而獲得新性狀的受體細(xì)胞 ， 稱為接合子 （ conjugant） 。 對接合行為的研究 表明： 。 根據(jù)細(xì)胞中是否存在 F因子及其存在方式的不同 ， 可把 分成四種相互聯(lián)系的接合型菌株 ： F+(雄性 )菌株 F(“雌性 ” )菌株 Hfr菌株 F’菌株 （ 1） F+（ 雄性）菌株 細(xì)胞中存在游離的 F因子 ， 細(xì)胞表面還有與 F因子數(shù)目相當(dāng)?shù)男跃?。 （ 2） F（ “雌性 ” ）菌株 在 F菌株中不含 F因子 ， 細(xì)胞表面也沒有性菌毛 。 但它可通過與 F+菌株或 F’菌株的接合而接受供體菌的 F因子或 F’因子 ， 從而使自己轉(zhuǎn)變成 “ 雄性 ” 菌株 。 在 Hfr細(xì)胞中 ， 其 F因子已從游離狀態(tài)轉(zhuǎn)變成在核染色體組特定位點上的整合狀態(tài) (頻率約 105)。 所以 ， 越是處于 Hfr染色體前端的基因 ， 進(jìn)入 F的幾率就越高 。 因此 ， Hfr與 F接合的結(jié)果其重組頻率雖最高 ， 但仍然為 F。 （ 4） F’菌株 當(dāng) Hfr菌株內(nèi)的 F因子因不正常切離而脫離核染色體組時 ， 可重新形成游離的但攜帶一小段染色體基因的特殊 F因子 ， 稱為 F’因子或 F’ 質(zhì)粒 。 能進(jìn)行原生質(zhì)體融合的細(xì)胞是極其廣泛的 ， 不僅包括原核生物中的細(xì)菌和放線菌 ， 而且還包括各種真核生物的細(xì)胞 。 原生質(zhì)體融合的主要步驟： ① 選擇親本： 先選擇兩個有特殊價值的并帶有選擇性遺傳標(biāo)記的細(xì)胞作為親本； ② 脫壁： 在高滲溶液中，用適當(dāng)?shù)拿摫诿福?xì)菌或放線菌可用溶菌酶或青霉素處理，真菌可用蝸牛酶或其他相應(yīng)的脫壁酶等）去除細(xì)胞壁； ③ 融合： 將形成的原生質(zhì)體進(jìn)行離心聚集，加入促融合劑PEG(Polyethylene glycol,聚乙二醇 )或通過電脈沖等促進(jìn)融合 。 ⑤鑒定： 當(dāng)形成菌落后，通過影印接種法，將其接種到各種選擇性培養(yǎng)基上，鑒定它們是否為融合子，最后再測定其他生物學(xué)性狀或生產(chǎn)性能。 具體表現(xiàn)為： 原有形態(tài)性狀變得不典型：蘇云金芽孢桿菌的芽孢和伴孢晶體變小 生長速度變慢：細(xì)黃鏈霉菌 “ 5406” 菌株在平板培養(yǎng)基上不產(chǎn)孢子 代謝產(chǎn)物生產(chǎn)能力下降 ， 即負(fù)變：藤倉赤霉產(chǎn)赤霉素能力下降 致病菌對宿主侵染力下降：白僵菌對宿主致病力減弱 對外界不良條件包括低溫 、 高溫或噬菌體侵染等抵抗能力的下降 。 狹義的復(fù)壯 ： 是一種消極措施 ， 指在菌種已發(fā)生衰退的情況下 ， 通過純種分離和生產(chǎn)性能測定 ， 從 已 衰退的群體中 將 少數(shù)尚未衰退的個體篩選出 來 ， 以達(dá)到恢復(fù)原有 菌種 典型性狀的 目的 。 衰退的防止 菌種的復(fù)壯 菌種的復(fù)壯 菌種的傳代次數(shù)越多 ， 產(chǎn)生的突變幾率也越高 ， 因此 ， 應(yīng)盡量避免不必要的移種和傳代 ， 并將必要的傳代降低到最低限度 。 （ 3） 利用不同類型的細(xì)胞接種傳代 放線菌和絲狀真菌的菌絲細(xì)胞 是多 核 的或 是異核體 ， 如 果 用菌絲接種 很 容易出現(xiàn)衰退 ， 而 用 孢子 接種 ， 不易出現(xiàn)衰退 。 （ 1） 純種分離 純種分離 法 菌落純（菌種純） 細(xì)胞純（菌株純） 平板表面涂布法 平板劃線分離法 瓊脂培養(yǎng)基澆注法 用 “ 分離小室 ” 分離單細(xì)胞 用顯微操縱器分離單細(xì)胞 用菌絲尖端切割法分離單細(xì)胞 通過純種分離 ， 可將退化菌種的一部分仍保持原有典型性狀的細(xì)胞分離出來 ， 經(jīng)擴大培養(yǎng) ， 即 可恢復(fù)原菌株的典型性狀 。 （ 3） 淘汰已衰退的個體 “5406”（ 農(nóng)用抗生素 ） 放線菌 （ Streptomyces microflavus）的分生孢子采用 10至 30℃ 的低溫處理 5~7天 后 ， 死亡率達(dá)到 80％ ，而存活的 抗低溫個體 ， 主要是 未退化的健壯個體 ， 這樣就 達(dá)到了復(fù)壯的目的 。 這時 如用 衰退菌株去感染菜青蟲的幼蟲 ， 然后再從病死蟲體內(nèi)重新分離出典型的產(chǎn)毒菌株 。 二 .菌種的保藏 菌 種 是 一 個 國 家 所 擁 有 的 重 要 自然 資源 ， 菌種保藏（ Preservation） 是一項重要的微生物學(xué)基礎(chǔ)工作 。 目前 ， 一些發(fā)達(dá)國家都設(shè) 立了 相應(yīng)的菌種保藏機構(gòu) 。 菌種保藏 的 原理 ： 1） 挑選典型菌種 (type culture)的優(yōu)良純種 ， 最好采用它們的休眠體 (如分生 孢 子 、 芽 孢 )； 2） 創(chuàng)造一個適合其長期休眠的環(huán)境條件 ； 諸如干燥 、 低溫 、 缺氧 、避光 、 缺乏營養(yǎng)以及添加保護(hù)劑或酸度中和劑等 ， 其中干燥 、 低溫是最重要的因素 。 常用的 7種菌種保藏方法為： 美國典型菌種保藏中心 （ ATCC ） 目前僅采用兩種方法： ① 冷凍干燥保藏法：保藏期一股可達(dá) 5~15年； ② 液氮保藏法：保藏期一般 20年以上 。