章12節(jié)核酸的結(jié)構(gòu)與功能-閱讀頁
2025-05-18 08:30本頁面
【正文】 數(shù)目在一到幾個。 即在一個 假想軸 的兩側(cè)，堿基序列之間有倒轉(zhuǎn)重復(fù)關(guān)系， DNA變性后，倒轉(zhuǎn)重復(fù)序列之間可以形成 十字形結(jié)構(gòu) 或 發(fā)夾結(jié)構(gòu) 。 正超螺旋：即 左旋超螺旋。 Lk = Lko Relaxed closed circular Rejoin the DNA Lk = Lko – 4 ?Lk = 4 Break the circular DNA Untwist 4 x 360o twist 4 x 360o Lk = Lko + 4 ?Lk = + 4 DNA isolated from cell negatively supercoiled by ~ 6 turns per 100 turns of the helix. ?Lk / Lk = Negatively supercoiled positively supercoiled 溴乙錠、放線菌素 D等分子扁平狀，可嵌入 DNA堿基間，使相鄰堿基對間隔增加（ ），超螺旋解旋，盤繞數(shù)減少，超螺旋向相反方向（右）旋轉(zhuǎn)，為負(fù)超螺旋。 可見超螺旋總是向抵消 初級螺旋改變 的方向發(fā)展。 超螺旋的分離和檢測： 1） 超速離心； 2） 瓊脂糖凝膠電泳 負(fù)超螺旋的形成： 將螺旋的方向定為向上 則向左轉(zhuǎn)形成 正 超螺旋 向右轉(zhuǎn)即 負(fù) 超螺旋 387 bp 3 kb M P R M: λDNA/HindIII+EcoR I P：重組質(zhì)粒 pBSK387bP R：重組質(zhì)粒 pBSK387bP用酶切割后 第二節(jié) DNA的理化性質(zhì) 差異很大，分子量 106109，真核常在 1010以上 SV40 3106 T2或 T4噬菌體 λ 噬菌體 大腸桿菌 DNA 流感嗜血桿菌 8108 小鼠線粒體 DNA 人第三對染色體 DNA的長度 納米 到 厘米 φx174 為 μm， 果蠅巨染色體為 μm 一 、 DNA的分子大小 二、核酸的粘度 DNA分子 具有很高的粘度。 DNA為線型，其長度與直徑之比 107，很稀的溶液也有極大的粘度， RNA粘度 小得多。 RNA只有局部雙螺旋 ， 浮密度比雙鏈 DNA高 ， 沉低；雙鏈 DNA高于蛋白質(zhì)的浮密度 ， 居中 ， 據(jù)此可用超速離心分離 。 W每升溶液中磷的重量 （ g), 。 ? 核酸變性時 e(p)值顯著升高 ， 稱 增色效應(yīng) ， ? 變性的核酸復(fù)性后 ， e(p)值又回復(fù)到原來水平 ， 稱 減色效應(yīng) 。當(dāng)溶液 pH＞ 4時，核苷酸鏈中的磷酸全部解離，多陰離子，核酸為多元酸，具有一定的酸性，等電點(diǎn)較低。 六、核酸的變性、復(fù)性和雜交 （一） 變性 ：對 DNA加熱時， DNA雙鍵之間的氫鍵斷裂的過程，稱 DNA的 變性 或叫 DNA的 融解 。 增色效應(yīng) ： DNA在 260NM處 紫外 吸光值增加的現(xiàn)象。 DNA分子有紫外吸收是因?yàn)猷奏?、嘌呤堿基；變性時 DNA雙螺旋內(nèi)的堿基充分暴露，提高了吸光值。 Application DNA denaturation at high pH keto form enolate form keto form enolate form Base pairing is not stable anymore because of the change of tautomeric (異構(gòu) ) states of the bases, resulting in DNA denaturation （酮式） （烯醇式） RNA hydrolyzes at higher pH because of 2’OH groups in RNA Effect of Alkali amp。 介質(zhì)中的 離子強(qiáng)度 ：離子強(qiáng)度較低的介質(zhì)中， DNA的熔解溫度較低，離子強(qiáng)度較高的介質(zhì)中， DNA的 Tm值較高，且發(fā)生熔解的溫度范圍較小。一般1M NaCl中保存較為穩(wěn)定。復(fù)性后物化性質(zhì)恢復(fù) DNA變性后 驟然冷 至低溫時，不能復(fù)性。 變性 DNA的 濃度 越高越容易復(fù)性 均質(zhì) 的較異質(zhì)的變性 DNA容易復(fù)性 真核細(xì)胞中的 重復(fù)序列 ， 復(fù)性最快 （三）分子雜交 變性 /復(fù)性理論的應(yīng)用：分子雜交 （即由 DNA復(fù)性研究發(fā)展而成的實(shí)驗(yàn)技術(shù)）。用于估計(jì) DNA間的同源性，進(jìn)化相關(guān)性，DNA限制性片段等。
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