【正文】 將這些組分濃縮， ? 最后用加熱的方法釋放出這些組分，進(jìn)行GC分析。 第三節(jié)、動(dòng)態(tài)頂空（吹掃 /捕集）技術(shù) 第四節(jié)、 頂空 /氣相色譜測定方法作為標(biāo)準(zhǔn)方法的使用情況 ? 目前，頂空／氣相色譜分析方法已經(jīng)廣泛地應(yīng)用于各種實(shí)驗(yàn)室作為標(biāo)準(zhǔn)方法測定環(huán)境樣品中各種有毒污染物。 ? 下面就美國、德國和日本三個(gè)國家中將頂空／氣相色譜方法作為標(biāo)準(zhǔn)方法的使用情況作一個(gè)簡要介紹。 ? 使用靜態(tài)頂空／氣相色譜方法測定廢水中和 PVC樹脂中的氯乙烯、 ? 污泥中和乳膠中的氯乙烯； ? 美國聯(lián)邦食品和藥品管理局也接受了靜態(tài)頂空／氣相色譜方法測定植物油、合成食品、醋等樣品中的氯乙烯； ? 美國藥典中也提議使用靜態(tài)頂空／氣相色譜方法測定藥品中揮發(fā)性有機(jī)物雜質(zhì)。諸如： 1972年就規(guī)定了靜態(tài)頂空／氣相色譜方法測定塑性包裝材料 (玻璃紙和聚乙烯薄膜 )中的殘存溶劑。 ? 食品接受和包裝工業(yè)聯(lián)合委員會(huì)也規(guī)定使用靜態(tài)頂空／氣相色譜方法分析測定包裝薄膜材料中的殘存溶劑。 ? 目前列出的有靜態(tài)頂空／氣相色譜方法用于測定血漿中各種揮發(fā)性有機(jī)物，諸如：丙酮、苯和烷基苯、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、 1， 1和 1，2二氯乙烷、 1， 1， 2三氯乙烷、 1， 2二氯乙烯、三氯乙烯、四氯乙烯、 2溴一 2一氯 1， 1， 1三氟乙烷、 1， 4二氧六環(huán)、 2己醇、異丙基苯、二硫化碳、苯乙烯和有機(jī)溶劑等。 德國 ? 在 1979年 10月 26日，前西德聯(lián)邦衛(wèi)生部發(fā)布的規(guī)范中關(guān)于食品中和 PVC產(chǎn)品中可允許的最大的氯乙烯單體濃度測定的指定方法是靜態(tài)頂空／氣相色譜分析方法。 日本 ? 在日本， 1992～ 1994期間發(fā)布了三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)方法用于測定飲用水和排污水中痕量揮發(fā)性有機(jī)污染物。 ? 總之，頂空技術(shù)與色譜聯(lián)用作為一種廣泛使用的可靠和有效的分析測定技術(shù)，已成為很多國家及組織的標(biāo)準(zhǔn)方法。 血液中乙醇含量的測定 (a:混合標(biāo)樣 ,b:一個(gè)酒后駕車司機(jī)的血樣） 動(dòng)態(tài)頂空色譜的應(yīng)用 ? 廢水中揮發(fā)芳烴的分析 —— EPA方法 602 ? 飲用水中揮發(fā)性有機(jī)物分析 —— EPA方法 ? 食品的氣味分析（靜態(tài)、動(dòng)態(tài)也可以） ? 藥物中殘留溶劑的分析 第 五 章 膜分離 第一節(jié)、膜分離技術(shù)在色譜領(lǐng)域中的進(jìn)展 第二節(jié)、色譜分析中的膜過程和膜塊結(jié)構(gòu) 第三節(jié)、膜分離技術(shù)在色譜分析中的應(yīng)用簡介 第一節(jié)、膜分離技術(shù)在色譜領(lǐng)域中的進(jìn)展 ? 膜分離是近年來新發(fā)展起來的可用于分析化學(xué)領(lǐng)域中的新技術(shù)之一。 第一節(jié)、膜分離技術(shù)在色譜領(lǐng)域中的進(jìn)展 ? 膜分離技術(shù)不但可以進(jìn)行揮發(fā)性物質(zhì)的分離和濃縮，而且可以進(jìn)行半揮發(fā)性的或者不揮發(fā)性的物質(zhì)的分離和濃縮。 ? 如：環(huán)境保護(hù)監(jiān)測、生物分析、材料性能測定、工業(yè)衛(wèi)生調(diào)查和評(píng)價(jià)、食品品質(zhì)分析、醫(yī)療診斷、化妝品和香料組成分析、商品質(zhì)量檢驗(yàn)等行業(yè)。盡管如此，膜分離技術(shù)與現(xiàn)代分析儀器的結(jié)合仍然可以完成大量的分析測試工作，成為當(dāng)代最具競爭力的 GC或 MS分析樣品制備方法和技術(shù)之一。 ? 樣品中有機(jī)物分子通過膜進(jìn)行分離通常需要經(jīng)過如下 5個(gè)步驟 ： ①樣品中的有機(jī)物分子通過擴(kuò)散到達(dá)膜介質(zhì)的一側(cè)表面； ②有機(jī)物分子被溶解并進(jìn)入膜中； ③在膜中，被溶解的有機(jī)物分子形成濃度梯度并擴(kuò)散通過膜； ④在膜的另一側(cè)表面，有機(jī)物分子解吸成為蒸氣； ⑤有機(jī)物蒸氣分子滲透并脫離膜介質(zhì)表面。膜萃取和微捕集串聯(lián)／質(zhì)譜或氣相色譜的分析方法和技術(shù)具有處理過程簡便、規(guī)范、快速、準(zhǔn)確等特點(diǎn)。 第三節(jié)、膜分離技術(shù)在色譜分析中的應(yīng)用 ? 環(huán)境樣品中揮發(fā)性有機(jī)污染物的分離和測定 (飲用水、地下水、地表水、工業(yè)廢水、環(huán)境空氣和室內(nèi)空氣中揮發(fā)性有機(jī)污染物的分析測定 ) ? 食品樣品中風(fēng)味和香味物質(zhì)測定 (各種酒類產(chǎn)品、風(fēng)味蔬菜、新鮮水果等風(fēng)味和香味物質(zhì)分析測定 )色譜分析中的膜過程和膜塊結(jié)構(gòu) 第六章 熱解吸 ? 熱解吸的原理 ? 熱解吸裝置 ? 使用熱解吸技術(shù)時(shí)應(yīng)注意的問題 ? 熱解吸技術(shù)的應(yīng)用固相萃取技術(shù)的應(yīng)用 第七章 衍生化技術(shù) 第一節(jié)、 衍生化的目的與條件 第 二 節(jié) 、 氣相色譜中常用的柱前衍生化方法 第 三 節(jié) 、 液相色譜中常用的柱前衍生化方法 第 四 節(jié) 、 固相化學(xué)衍生化法 第 五 節(jié) 、 衍生化反應(yīng)所需設(shè)備及注意事項(xiàng) 第 六 節(jié) 、 衍生化技術(shù)的應(yīng)用 第一節(jié)、衍生化的目的與條件 ? 什么是衍生化 衍生化是將樣品中的待測組分制成衍生物，使其更適合于特定的分析方法。 第一節(jié)、衍生化的目的與條件 ? 作用： （ 1）提高檢測靈敏度； （ 2）改變化合物的色譜性能，改善分離效果 （ 3）適合進(jìn)一步做化合物的結(jié)構(gòu)鑒定； （ 4）擴(kuò)大色譜分析的應(yīng)用范圍 ?衍生化反應(yīng)發(fā)生在色譜分離之前 ?如脂肪酸的酯化使其沸點(diǎn)降低，便于氣化 分類 ?衍生化反應(yīng)發(fā)生在色譜分離之后 ?主要是為了提高檢測的靈敏度 柱前 柱后 第一節(jié)、衍生化的目的與條件 Text Text 將一些不適合某種色譜技術(shù)分析的化合物轉(zhuǎn)化成 可以用該種色譜技術(shù)分析的衍生物。 如一些異構(gòu)體在色譜上很難分離 利用衍生化反應(yīng)可以幫助化合物結(jié)構(gòu)的鑒定， 柱前衍生化的目的 柱前衍生化的目的 柱前衍生化的條件 1 2 3 4 反應(yīng)能迅速、定量的進(jìn)行，反應(yīng)重復(fù)性好，反應(yīng)條件不苛刻，容易操作。 衍生化反應(yīng)產(chǎn)物 只有一種，反應(yīng) 的副產(chǎn)物和過量 的衍生化試劑應(yīng) 不干擾目標(biāo)化合 物的分離與檢測。 第二節(jié)氣相色譜中常用的柱前衍生化方法 ? 硅烷化反應(yīng) ? 含有質(zhì)子性基團(tuán)的化合物 (如醇，酚，酸，胺，硫醇等 )與硅烷化試劑反應(yīng)形成揮發(fā)性的硅烷衍生物，一般反應(yīng)式為： ? 能進(jìn)行硅烷化的化合物反應(yīng)活性一般為：醇酚 羧酸 胺 酰胺， ? 反應(yīng)活性還受空間立體阻礙的影響，其醇的反應(yīng)活性為伯醇 仲醇 叔醇， ? 胺的反應(yīng)活性為：伯胺 仲胺。其結(jié)構(gòu)為： ? 2． N,O雙 (三甲基硅 )三氟乙酰胺 （ BSTFA） ? 室溫為液體，既可單獨(dú)使用，也能與 TMCS等催化劑共同使用，其應(yīng)用最廣，反應(yīng)副產(chǎn)物三氟乙酸和三甲基硅三氟乙酰胺的揮發(fā)性很強(qiáng)，出現(xiàn)在 GC的前沿，不干擾測定。其結(jié)構(gòu)為： 常用的硅烷化試劑 ? 4． N三甲基硅二乙胺 （ TMSDEA） ? 是中等強(qiáng)度的硅烷化試劑，強(qiáng)堿性，強(qiáng)揮發(fā)性，很適合于低分子羧酸和氨基酸的硅烷化，TMSDEABSTFATMCS吡啶（ 30+99+1+1000）能使酪氨酸和色氨酸的酸性、堿性、中性代謝物同時(shí)硅烷化。其結(jié)構(gòu)為： 硅烷化注意事項(xiàng) ? 硅烷化反應(yīng)總是在密閉小瓶中進(jìn)行，因?yàn)樗泄柰榛噭┘捌溲苌锒己芤资軡駳獾乃庾饔茫?TMS更易水解。 ? 吡啶是最合適的溶劑，其他還有二甲基甲酰胺，二甲基亞砜和四氫呋喃等也能作硅烷化反應(yīng)的介質(zhì)。而羧酸酯的極性較弱，揮發(fā)性也強(qiáng)，很符合 GC的要求，所以許多羧酸在 GC測定之前都要衍生化成相應(yīng)的酯，最常用的是甲基酯。此反應(yīng)的速度快、產(chǎn)率高、很少副反應(yīng)，而且反應(yīng)條件比較溫和。常溫下酚羥基也能與重氮甲烷緩慢反應(yīng)，因此含有酚羥基的羧酸進(jìn)行甲酯化時(shí)可能有副反應(yīng)，但是冷卻到 0℃以下就可避免酚羥基的反應(yīng)。通常將這些催化劑制成一定濃度的甲醇溶液。 ? 三氟乙酸酐法 在三氟乙酸酐的存在下有機(jī)酸和醇可以反應(yīng)生成酯 ? RCOOH + R’OH RCOOR’+H20 此法特別適于空間位阻較大的有機(jī)酸和醇或酚的酯化。而且這些試劑穩(wěn)定性好、爆炸性小。 ?；苌椒? ? 為什么要酰化 ?；芙档土u基、氨基、巰基的極性，改善這些化合物的色譜性能，酰化還能增加氨基酸、糖類等化合物的揮發(fā)性，也能使兒茶酚胺等易于氧化的化合物的穩(wěn)定性增強(qiáng)。 ? ?；噭┯腥?： 酰鹵、酸酐和有反應(yīng)活性的?；锶缫阴＿溥?，應(yīng)根據(jù)需要進(jìn)行選擇。還可以用醋酸鈉為堿性催化劑，以醋酐為乙?；噭?，這一反應(yīng)曾用于分析尿樣中分離得到的糖類化合物。其他的堿性催化劑包括三乙胺和 N甲基咪唑。 酰化衍生化方法 2．多氟?；磻?yīng) ? 最常用的多氟酰化反應(yīng)是 三氟乙酰（ TFA） 、 五氟丙酰（ PFP）和七氟丁酰（ HFB） 化。 ? 從文獻(xiàn)看有一種趨勢，即 TFA常用于氨基酸的衍生化，只為了增加其揮發(fā)性，而不以 ECD檢測。 第七章 衍生化技術(shù) 第一節(jié)、 衍生化的目的與條件 第 二 節(jié) 、 氣相色譜中常用的柱前衍生化方法 第 三 節(jié) 、 液相色譜中常用的柱前衍生化方法 第 四 節(jié) 、 固相化學(xué)衍生化法 第 五 節(jié) 、 衍生化反應(yīng)所需設(shè)備及注意事項(xiàng) 第 六 節(jié) 、 衍生化技術(shù)的應(yīng)用 第三節(jié)、液相色譜中常用的柱前衍生化方法 ? 可見 紫外衍生化 ? 液相色譜使用最多的是紫外檢測器，為了使一些沒有紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物能被紫外檢測器檢測，往往是通過衍生化反應(yīng)在這些化合物的分子中引入有強(qiáng)紫外吸收的基團(tuán) ? 許多重要藥物并沒有強(qiáng)的可見 紫外（ VisUV）吸收，為了能用可見 紫外檢測器進(jìn)行檢測，需將強(qiáng)發(fā)色團(tuán)引入到這些化合物中。下面按被測化合物類別來介紹它們的衍生化試劑。 可見 紫外衍生化 ? 和苯甲酰氯一樣，芳基磺酰氯也能與 伯胺和仲胺 反應(yīng)，而且反應(yīng)條件也很相似。反應(yīng)時(shí)將甲苯磺酰氯溶于丙酮并加入 酸氫鈉溶液，維持 70℃ ，反應(yīng) 1h。剩余 TSCl對(duì)某些產(chǎn)物的測定有干擾，因此需用正己烷洗滌除去。二甲胺基偶氮苯磺酰氯（ DABSCl）是氨基酸的一種衍生化試劑，反應(yīng)產(chǎn)物的最大吸收在 420～ 450nm，在這一波長范圍內(nèi)檢測生物樣品時(shí)，能減少內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。 可見 紫外衍生化 ? ? 異氰酸苯酯（ PIC）與 伯胺 和 腫胺 形成 N,N/取代脲，反應(yīng)在二甲基甲酰胺中進(jìn)行，數(shù)分鐘內(nèi)定量衍生。 可見 紫外衍生化 ? ? 異硫氰酸苯酯（ PITC）與氨基酸的衍生化反應(yīng)，據(jù)條件不同有兩種反應(yīng)產(chǎn)物。樣品需預(yù)先干燥，室溫反應(yīng) 5min即可完成。 ? 一種為苯基乙內(nèi)酰硫脲（ PTH），此反應(yīng)涉及到氨基和羧基，即生成 PTC氨基酸后，進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成更穩(wěn)定的 PTH： 可見 紫外衍生化 ? ? 苯基異硫氰酸酯與 醇類 反應(yīng)生成苯基甲酸酯 可見 紫外衍生化 ? ? 茚三酮是氨基酸自動(dòng)分析儀的柱后衍生化試劑，也可用于其它色譜分離氨基酸的柱后衍生化。 可見 紫外衍生化 ? ? 有機(jī)酸 很容易與酰溴基反應(yīng)生成酯，常用的酰溴基試劑有苯甲酰溴，萘甲酰溴、甲氧基苯甲酰溴、對(duì)溴基苯甲酰溴和對(duì)硝基苯甲酰溴等。 可見 紫外衍生化 ? 7. 2,4二硝基苯肼（ 2,4DNPH） ? 2,4二硝基苯肼（ 2,4DNPH）是較早應(yīng)用于酮、醛、羰基甾體和糖等 羰基化合物 的可見 紫外衍生化試劑，產(chǎn)物為苯腙化合物，其反應(yīng)式為： 熒光衍生化 ?為什么要熒光衍生化 ? HPLC的熒光檢測器靈敏度比紫外檢測器高得多，適合半痕量分析。 ? 熒光衍生物的激發(fā)波長和發(fā)射波長往往與試劑本身不同，因此熒光衍生化反應(yīng)既可在柱前也可在桂后進(jìn)行。 熒光衍生化 ? 上述衍生物的熒光激發(fā)波長范圍為350~370nm， ? 發(fā)射波長范圍為 490～ 540nm，取決于目標(biāo)化合物和測量時(shí)使用的溶劑。因此熒光衍生反應(yīng)不需要純化衍生物，可以直接進(jìn)樣。 ? 但由于電化學(xué)檢測器只能檢測具有電化學(xué)活性的化合物，如果目標(biāo)化合物沒有電化學(xué)活性就不能被檢測。 ? 電化學(xué)衍生化試劑的特點(diǎn)？ ? 由于 硝基 具有電化學(xué)活性，一系列帶有硝基的衍生化試劑與 羥基、氨基、羧基和羰基 化合物反應(yīng)，可生成電化學(xué)活性的衍生物。同時(shí)，由于反應(yīng)后過量的衍生化試劑存在，對(duì)下一步的色譜分析形成干擾，有時(shí)還需要進(jìn)行進(jìn)一步的分離。 ? 為了改進(jìn)衍生化方法，使之使用更加方便、快捷，有人 以硅膠或高分子小球?yàn)榛w ，在其 表面結(jié)合一種反應(yīng)劑 ，然后填裝在短管內(nèi)，當(dāng)樣品液通過反應(yīng)管時(shí)就可以發(fā)生各種化學(xué)反應(yīng)，包括還原、氧化、基團(tuán)轉(zhuǎn)移和催化等。衍生化反應(yīng)中的一些特殊要求，決定了進(jìn)行衍生化反應(yīng)操作的某些特點(diǎn)，并導(dǎo)致開發(fā)出一些專用裝置。其容積為 1~20mL，并配有各種材料的瓶塞和墊片。 ? 衍生化反應(yīng)的加熱可以用恒溫浴或加熱塊加熱，攪拌可用人工或者超聲波振蕩或者用微型電磁攪拌器攪拌