蛋白質(zhì)的通性、純化與表征-閱讀頁(yè)
2025-05-16 18:07本頁(yè)面
【正文】 adex G25中的 Kd值分別為 ， 。 (2)當(dāng) Kd = 1時(shí)，分子可完全滲入凝膠內(nèi)部時(shí)，洗脫體積應(yīng)為外水體積與內(nèi)水體積之和，即 Ve=Vo+Vi (Ⅲ )。 3）有機(jī)溶劑沉淀法 定義 向水溶液中加入一定量親水性的有機(jī)溶劑 (如甲醇 、 乙醇和丙酮等 )， 降低溶質(zhì)的溶解度 ， 使其沉淀析出的分離純化方法 ， 稱為有機(jī)溶劑沉淀法 。 ? 水溶性有機(jī)溶劑本身的水合作用降低了自由水的濃度 ， 減少了溶質(zhì)分子表面原有水化層的厚度 ， 導(dǎo)致溶質(zhì)分子脫水凝聚 。 其缺點(diǎn) 主要是比鹽析更易使蛋白變性，需低溫操作。 原理 當(dāng)溶液 pH值為蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí) ， 分子表面的凈電荷為零 ，導(dǎo)致蛋白質(zhì)表面雙電層和水化膜的削弱或破壞 ， 分子間引力增加 ，溶解度降低 。其主要優(yōu)點(diǎn)在于很多蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)都在偏酸性范圍內(nèi)，而無(wú)機(jī)酸通常價(jià)格低廉，因此可以省去除酸的步驟。 5）聚丙烯酰胺凝膠電泳和等電聚焦電泳 （ 1）聚丙烯酰胺凝膠電泳 (PAGE) ?以聚丙烯酰胺凝膠為支持物的電泳。 ?IEF分離蛋白質(zhì)靠 分子篩效應(yīng)和電荷效應(yīng) ，可分離 pI僅差，分辨率高。 ?SDS和巰基乙醇存在的情況下，蛋白質(zhì)在電場(chǎng)上移動(dòng)的速度完全取決于蛋白質(zhì)分子量的大小，與蛋白質(zhì)本身電荷的多少和形狀無(wú)關(guān)，即只有 分子篩效應(yīng) 。 Mr= ———— RTs D(1vρ) 沉降系數(shù) S用高速離心機(jī)測(cè)定 Ultracentrifugation 蛋白質(zhì)的含量測(cè)定與純度鑒定 蛋白質(zhì)含量測(cè)定 總蛋白含量分析 ： 凱氏定氮法 、 Folin酚法 （ Lowry法 ） 、 雙縮脲法 、 考馬斯亮藍(lán)法 、 紫外吸收法 。 選用手段 ： 沉降分析 、 溶解度分析 、 結(jié)晶分析 （ 能結(jié)晶的一般比較純 ， 具有活性 ） 本章重點(diǎn)知識(shí) ?蛋白質(zhì)溶液的酸堿性和等電點(diǎn)的大小主要與什么有關(guān)？ ?蛋白質(zhì)膠體能保持穩(wěn)定的主要原因。 ?凝膠過(guò)濾分離蛋白質(zhì)的原理。 ?等電點(diǎn)沉淀法、 聚丙烯酰胺凝膠電泳 (PAGE)和 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（ SDSPAGE）分離蛋白質(zhì)的原
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