ch2蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)-閱讀頁(yè)
2025-05-11 08:57本頁(yè)面
【正文】 = Derivative of B A B （二）蛋白質(zhì)組學(xué)的主要研究方法 A B E. Coli grown at 30186。 C Differential Expression （二）蛋白質(zhì)組學(xué)的主要研究方法 熒光差異染色 利用兩種不同的熒光染料如 Cy3（綠光）和 Cy5（紅光）分別對(duì)從對(duì)照和處理材料提取的蛋白質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記、混合、混合樣品進(jìn)行蛋白質(zhì)雙向電泳分離，分別以兩種不同的激光去激發(fā)掃描生成兩種不同的彩色圖像，然后再將兩者疊加，根據(jù)電泳斑點(diǎn)所形成的顏色判斷蛋白質(zhì)的代謝變化。 膠內(nèi)酶解過(guò)程費(fèi)時(shí) 、 費(fèi)力 ， 難于與質(zhì)譜聯(lián)用實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化 。 毛細(xì)管電泳 (capillary electrophoresis， CE)。 ICAT試劑的結(jié)構(gòu)包含一個(gè) 生物素頭部 、一個(gè) 連接部分 和一個(gè)碘激活的 羰基基團(tuán) ，其中羰基基團(tuán)能夠特異性地與肽鏈中的半胱氨酸側(cè)鏈反應(yīng)，借助于生物素親和標(biāo)記將其抽提出來(lái)。 （二）蛋白質(zhì)組學(xué)的主要研究方法 （二）蛋白質(zhì)組學(xué)的主要研究方法 同位素標(biāo)記親和標(biāo)簽方法 （ 1）兩個(gè)蛋白質(zhì)樣品 (細(xì)胞狀態(tài) I和細(xì)胞狀態(tài) Ⅱ) 分別單獨(dú)用 d0– ICAT和 d8– ICAT試劑標(biāo)記； （ 2）混合、胰蛋白酶水解； （ 3）肽混合物用生物素 — 親和色譜柱分析，含半胱氨酸殘基肽被結(jié)合在柱上； （ 4）洗脫、串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)定量。 參考文獻(xiàn)： 同位素親和標(biāo)簽 (ICAT)系列技術(shù)及其在蛋白質(zhì)組研究中的應(yīng)用 （二）蛋白質(zhì)組學(xué)的主要研究方法 蛋白芯片 (protein chip)技術(shù) （二）蛋白質(zhì)組學(xué)的主要研究方法 （ 1） 點(diǎn)樣 ：未經(jīng)處理的樣品 (如血清 ， 尿液等 )直接點(diǎn)在芯片上 ， 根據(jù)芯片表面不同的化學(xué)或生物特性結(jié)合相應(yīng)的蛋白質(zhì)； （ 2） 沖洗： 洗去芯片上結(jié)合的非蛋白組份； （ 3） 加上能量吸收分子溶液：在芯片表面形成含有分析物和大量能量吸收分子 “ 晶體 ” ； （ 4） 激光解吸電離法 (SELDI)：將保留在芯片上的蛋白質(zhì)洗脫下來(lái)； （ 5） 質(zhì)譜分析： 電離的蛋白質(zhì)可以通過(guò)飛行時(shí)間質(zhì)譜儀精確地測(cè)定它們的質(zhì)量 。 肽質(zhì)量指紋鑒定的依據(jù)：第一種蛋白質(zhì)都有特定的氨基酸序列，被特定的蛋白質(zhì)酶水解可以得到一套特定肽鏈片斷（肽片段質(zhì)量圖譜） 。 （ 三）質(zhì)譜在蛋白質(zhì)鑒定中的應(yīng)用 由于在 ESI條件下待分析物可能帶上一個(gè)或多個(gè)電荷，而 MALDITOF ( MatrixAssisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry, 基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜 )分析中的離子一般只帶一個(gè)電荷，比較容易計(jì)算。 目前一級(jí)質(zhì)譜鑒定蛋白質(zhì)的算法（肽質(zhì)量紋）主要用在 MALDITOF產(chǎn)生的質(zhì)譜圖上。 （三）質(zhì)譜在蛋白質(zhì)鑒定中的應(yīng)用 Bovine Carbonic anhydraseand human Hsp70s protein （ 一級(jí)質(zhì)譜） （三）質(zhì)譜在蛋白質(zhì)鑒定中的應(yīng)用 （三）質(zhì)譜在蛋白質(zhì)鑒定中的應(yīng)用 PMF中的問(wèn)題 （ 1）質(zhì)量相近的多肽怎么處理？ 限制用來(lái)搜索的數(shù)據(jù)庫(kù)，如果做的試驗(yàn)用的是小白鼠的組織，那么你可以只在鼠類的數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索；要求必須有多個(gè)多肽和數(shù)據(jù)庫(kù)相匹配，才做出最后的蛋白質(zhì)鑒定。雙向電泳的一個(gè)電泳點(diǎn)上可能有 23個(gè)蛋白。 這里的假設(shè)是一級(jí)質(zhì)譜中的一個(gè)峰就對(duì)應(yīng)了一個(gè)多肽，實(shí)際情況可能并不是這樣。這樣就可以適應(yīng)一張質(zhì)譜圖里有多個(gè)蛋白的情況。 數(shù)據(jù)庫(kù)搜索算法一般包括兩個(gè)步驟： 第一個(gè)步驟是篩選數(shù)據(jù)庫(kù)里的多肽，找出所有可能與質(zhì)譜圖匹配的多肽。 （三）質(zhì)譜在蛋白質(zhì)鑒定中的應(yīng)用 MS for Characterization of Proteins and peptide Peptide mass fingerprinting (MALDITOF) Database theoretical digestion Digestion Matching a
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