【正文】 三糖，干擾fMettRNA與核糖體的結合，從而阻止蛋白質(zhì)合成的正確起始，并導致mRNA的錯讀。對鏈霉素敏感位點在30S亞基上。它所帶的氨基與AA tRNA上的氨基一樣，能與生長中肽鏈上的羧基生成肽鍵，這個反應的產(chǎn)物是一條339。 青霉素、四環(huán)素和紅霉素只與原核細胞核糖體發(fā)生作用，從而阻遏原核生物蛋白質(zhì)的合成，抑制細菌生長。因此，前3種抗生素被廣泛用于人類醫(yī)學，后兩種則很少在醫(yī)學上使用。DNA分子中的核苷酸排列順序不但決定了胞內(nèi)所有RNA及蛋白質(zhì)的基本結構，還通過蛋白質(zhì)（酶）的功能間接控制了細胞內(nèi)全部有效成份的生產(chǎn)、運轉和功能發(fā)揮。DNA和RNA雖然很相似，只有T或U及核糖的第二位碳原子上有所不同，但它們的生物學活性卻很不同。蛋白質(zhì)是生物信息通路上的終產(chǎn)物，一個活細胞在任何發(fā)育階段都需要數(shù)千種不同的蛋白質(zhì)。一、核苷酸的合成與代謝核苷酸是DNA和RNA的前體是細胞內(nèi)化學能流通領域中的載體（ATP， GTP）,是NAD、FAD、Sadenosylmethionine及 Coenzyme A等的重要成份。cAMP, cGMP還是第二信使。其次，把甘氨酸中的三個基團加到PRA上。第四，谷氨酰胺提供另一個N。第六，羧基化第七，通過分子重排將羧基從咪唑第4碳的環(huán)外氨基上轉移到第5位碳原子上。第十，再由N10甲基四氫葉酸提供一個甲基。參與合成AMP的是①腺苷琥珀酸合成酶和②腺苷琥珀酸裂解酶。 2. 嘌呤核苷酸合成中的反饋調(diào)節(jié) 3．嘧啶核苷酸是由天門冬酰胺、 PRPP和氨基甲酰磷酸等共同形成的嘧啶從頭合成途徑不同于嘌呤的合成，6原子嘧啶環(huán)首先被合成，然后才與核糖5磷酸相連。4．核苷單磷酸轉化為核苷三磷酸反應生成的ADP可通過糖酵解酶或氧化磷酸化途徑被進一步磷酸化。核苷二磷酸可通過一個公用的核苷二磷酸激酶被進一步磷酸化生成核苷三磷酸。所有dNTP都直接來自于NTP（其實是NDP）。催化該反應的酶是核糖核苷酸還原酶。每個R1亞基上都有兩個調(diào)節(jié)位點，當影響整體酶活性的那個位點與ATP相結合時，酶活性增加；而當它與dATP結合時，酶活性消失。當dATP與該位點相結合時，UDP和CDP的還原反應優(yōu)先進行。核糖核苷酸還原反應的主要過程1. 還原酶R2亞基處于氧化態(tài)X˙，向核糖339。位自由基。OH提供一個H原子，使之生成OH2基團。位自由基幫助維持239。4. R1亞基上的另一個SH基團為239。上的C˙OH向R2亞基上的XH發(fā)起攻擊。上的COH失去氧原子，生成dNDP。嘌呤和嘧啶降解后分別生成Uric Acid和Urea。核苷酸酶（539。二、在Adenosine deaminase的作用下生成Inosine；三、在nucleosidase的作用下生成Hypoxanthine或由Guanosine生成Guanine；四、在Xanthine oxidase或Guanine deaminase作用下生成Xanthine；五、在Xanthine oxidase的作用下生成Uric acid。如人體內(nèi)缺失adenosine deaminase，會引發(fā)嚴重的免疫缺失性疾病，因為此時T淋巴和B淋巴細胞不能正常發(fā)育。許多化療（chemotherapy）藥劑都針對核苷酸合成途徑。胸苷合成中的主要抑制劑有fluorouracil（氟脲）、methotrexate（氨甲基葉酸）和aminopterin（氨喋呤）。氨甲基葉酸和氨喋呤都是dihydrofolate reductase的抑制劑，氨甲基葉酸與該酶的親和力比底物dihydrofolate高100倍。大量N元素都是有機氮，被結合于氨基酸或核苷酸分子中。全世界氮肥廠每年生產(chǎn)的化肥僅含氮約108t，所以，如果沒有生物固氮，生命很快就不復存在了。主要有兩步反應：⑴Glutamate+ATP→γglutamylphosphate+ADP⑵γGlutamyl phosphate+NH4+→glutamine+Pi+H+總結：Glutamyl+NH4++ATP→glutamine+ ADP+Pi+H+因此，谷氨酰胺合成酶是氮代謝中的主要調(diào)控位點。Alanine，Glycine和其它至少6種gln代謝產(chǎn)物都是GS活性的變構抑制劑，每個抑制劑都只有部分抑制作用。當?shù)?97位酪氨酸被腺苷化后（加上AMP），該酶更容易受變構抑制劑的反饋調(diào)節(jié)。表181 人體必需氨基酸(*.哺乳期至幼兒期必需)表221 氨基酸合成的六條主要途徑。Tyrosine降解產(chǎn)物有dopamine（多巴胺），epinephrine（腎上腺素），norepinephrine，統(tǒng)稱為Catecholamines（兒茶酚胺）。本世紀80年代，科學家發(fā)現(xiàn)NO是人體內(nèi)重要的信號分子，它參與神經(jīng)傳遞、凝血和血壓調(diào)控等一系列生理反應。三、氨基酸及功能蛋白質(zhì)合成后的修飾，都以fMet（原核）或Met（真核）開始，多肽合成后，N端的formyl group、Met殘基，有時還包括N揣多個殘基或C端的殘基都會被切除。 。此外，AcetylCoA羧化酶常與Biotin分子相結合。有些蛋白質(zhì)只有在形成二硫鍵之后才有功能。該序列常常位于蛋白質(zhì)的氨基末端，長度一般在1336個殘基之間，有三個特點： （1）一般帶有1015個疏水氨基酸； （2）常常在靠近該序列N端疏水氨基酸區(qū)上游帶有1個或數(shù)個帶正電荷的氨基酸； （3）在其C末端靠近蛋白酶切割位點處常常帶有數(shù)個極性氨基酸，離切割位點最近的那個氨基酸往往帶有很短的側鏈（Ala或Gly）。蛋白質(zhì)合成之初，一旦信號肽序列的N端暴露在核糖體外，該序列（包括核糖體）就迅速與SRP（signal recognition particle）相結合，誘發(fā)SRP與GTP相結合，停止新生肽的進一步延伸（此時新生肽一般長約70個殘基左右）。 ER上的蛋白質(zhì)常常通過運轉載體將經(jīng)過修飾的蛋白質(zhì)送入高爾基體，再分別送到各個亞細胞位點。蛋白質(zhì)的核定位是通過多個蛋白的共同作用來實現(xiàn)的。NLS蛋白Importin復合物停留在核孔上，并在RanGTPase的作用下通過核孔。 蛋白質(zhì)降解是一個有序的過程。當細胞中存在有錯誤或半衰期很短的蛋白質(zhì)時，該蛋白酶就被激活。 在真核生物中，蛋白質(zhì)的降解需要Ubiquitin，一個有76個氨基酸殘基組成極為保守的蛋白參與。 成熟多肽N端第一個殘基對蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性有重要影響 。所以說，DNA復制的起始，標志了細胞進入一個新的周期。每個DNA復制的獨立單元被稱為復制子（replicon），主要包括復制起始位點（Origine of replication）和終止位點（terminus）。大腸桿菌DNA的復制需要有20種左右的酶和蛋白質(zhì)因子參與，整個DNA復制機器被稱之為DNA replicase system或replisome。Topoisomerase，主要功能是消除DNA解鏈過程中所產(chǎn)生的扭曲力。Primases，為DNA復制提供RNA引物。DNA Ligases，使新生DNA鏈上的缺口（339。p）生成磷酸二酯鍵。DNA復制起始中的主要步驟a. 大約20個左右的DnaA蛋白首先與OriC中的4個9堿基重復區(qū)相結合；b. 識別并使3個13堿基串聯(lián)重復區(qū)DNA形成開環(huán)結構；c. DnaB蛋白在DnaC的幫助下與未解鏈序列結合。當細胞中存在足夠的SSB和DNA gyrase時，DnaB的解鏈效率非常高。Once in each cell cycle。OriC中有11個GATC回文結構（一般說來，256bp才應有一個GATC重復）。此時，oriC與細胞原生質(zhì)膜相結合。復制起始可能還受ATP水解過程調(diào)控，因為DnaA只有與ATP相結合時才能與oriC區(qū)DNA相結合。由DNA helicase解開雙螺旋，由拓樸異構酶消除DNA鏈上的扭曲力，SSB結合使DNA單鏈穩(wěn)定。滯后鏈的合成：產(chǎn)生Okazaki fragments，消除RNA引物并由DNA pol I補上這一小段DNA序列，由DNA Ligase把兩個片段相連。Ter有點像一個陷井（trap），使復制叉只能進入，不能出來。4. 真核細胞DNA的復制比大腸桿菌更復雜真核生物的origin of replication被稱為ARSautonomously replicating sequences或者被稱為replicators。㈡、DNA的損傷修復1． 錯配修復（mismatch Repair）錯配修復對DNA復制忠實性的貢獻力達102103，DNA子鏈中的錯配幾乎完全都被修正，充分反映了母鏈的重要性。去掉堿基后的核苷酸被稱為AP位點（apurinic or apyrimidinic）。3. 核苷酸切除修復（nucleotideexcision repair）當DNA鏈上相應位置的核苷酸發(fā)生損傷，導致雙鏈之間無法形成氫鍵，由核苷酸切除修復系統(tǒng)負責進行修復。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)轉座這一命名并不十分準確，因為在轉座過程中，可移位因子的一個拷貝常常留在原來位置上，在新位點上出現(xiàn)的僅僅是拷貝。1． 轉座子的分類和結構特征a. 簡單轉座子轉座子（transposon，Tn）是存在于染色體DNA上可自主復制和移位的基本單位。一個細菌細胞常帶有少于10個IS序列。IS序列都是可以獨立存在的單元，帶有介導自身移動的蛋白。一旦形成復合轉座子，IS序列就不能再單獨移動，因為它們的功能被修飾了，只能作為復合體移動。不同轉座子的靶序列長度不同，但對于一個特定的轉座子來說，它所復制的靶序列長度都是一樣的，如IS1兩翼總有9個堿基對的靶序列，而Tn3兩端總有5bp的靶序列。在復制性轉座中，所移動和轉位的是原轉座子的拷貝。TnA類轉座主要是這種形式。① 轉座引起插入突變。③ 轉座產(chǎn)生的染色體畸變?；蚪MDNA通過一個被稱為轉錄的過程把貯存在雙鏈DNA分子中的遺傳信息轉換到與模板DNA鏈相互補的RNA單鏈上。 1． 依賴于DNA的RNA合成從DNA合成反應的化學本質(zhì)、極性和模板的使用這三方面來說，轉錄與復制是相同的。 一旦RNA聚合酶啟動了基因轉錄，它就會沿著模板539。方向不停地移動，合成RNA鏈，直到遇到終止信號時才釋放新生的RNA鏈，并與模板DNA脫離。端核苷酸的定位，因為活細胞內(nèi)部根據(jù)終止信號正確終止的RNA與一個經(jīng)過剪接的RNA在339。模板DNA上都有終止轉錄的特殊信號終止子，每個基因或操縱子都有一個啟動子，一個終止子。端的正常結構。端部分出現(xiàn)不穩(wěn)定的rU a. 依賴于ρ因子的終止105的六聚體蛋白，它能水解各種核苷三磷酸，實際上是一種NTP酶。有人認為，在RNA合成起始以后，ρ因子即附著在新生的RNA鏈上，靠ATP水解產(chǎn)生的能量，沿著539。方向朝RNA聚合酶移動，到達RNA的339。終止過程需要消耗能量，所以，ρ因子具有終止轉錄和核苷三磷酸酶兩種功能。這兩種結構特征的存在同樣決定了轉錄的終止。端的正常結構。端部分出現(xiàn)不穩(wěn)定的rU TFⅡH還參與DNA的損傷修復。 Actinomycin D和Acridine阻斷RNA鏈的延伸 所以，RNA加工成熟主要包括：5’加帽子結構；3’加多聚A；切除內(nèi)含子 。OH 作為親核基團向Intron 539。Group II內(nèi)含子切除體系核內(nèi)mRNA原始轉錄產(chǎn)物的剪輯方式可能是最常見的。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)至少有5種snRNAsU1，U2，U4，U5，U6。年份 事 件 1869 F Miescher首次從萊茵河鮭魚精子中分離DNA。 1952 . 。 1957 。 19591960 S. Ochoa發(fā)現(xiàn)RNA聚合酶和信使RNA，并證明mRNA決定了蛋白質(zhì)分子中的氨基酸序列。 1964 C. Yanofsky和S. Brenner等人證明，多肽鏈上的氨基酸序列與該基因中的核苷酸序列存在著共線性關系。 1966 ，、。 19721973 ，于72年獲得第一個重組DNA分子，73年完成第一例細菌基因克隆。1977年完成了全長5387bp的噬菌體φ174基因組測定。 1980 美國聯(lián)邦最高法院裁定微生物基因工程可以專利化。 1982 美、英批準使用第一例基因工程藥物胰島素；Sanger等人完成了入噬菌體48,502bp全序列測定。 1984 斯坦福大學獲得關于重組DNA的專利。 1988 J. D. Watson出任人類基因組計劃首席科學家。 1992 歐共體35個實驗室聯(lián)合完成酵母第三染色體全序列測定(315kb) 1994 第一批基因工程西紅柿在美國上市。 1997 英國愛丁堡羅斯林研究所獲得克隆羊?；蚬こ痰闹饕獌?nèi)容或步驟:1. 從生物有機體基因組中，分離出帶有目的基因的DNA片段。3. 將重組DNA分子轉移到適當?shù)氖荏w細胞（亦稱寄主細胞）并與之一起增殖。5. 將目的基因克隆到表達載體上，導入寄主細胞，使之在新的遺傳背景下實現(xiàn)功能表達，產(chǎn)生出人類所需要的物質(zhì)。amp。某物質(zhì)在電場作用下的遷移速度叫作電泳的速率，它與電場強度成正比，與該分子所攜帶的凈電荷數(shù)成正比，而與分子的磨擦系數(shù)成反比（分子大小、極性、介質(zhì)的粘度系數(shù)等）。將DNA、RNA放到電場中，它就會由負極→正極移動。DNA的脈沖電泳技術 :PFGEPulsefield gel electrophoresis2． 核酸的分子雜交技術在大多數(shù)核酸雜交反應中，經(jīng)過凝膠電泳 分離的DNA或RNA分子，都是在雜交之前，通過毛細管作用或電導作用按其在凝膠中的位置原封不動地吸印 轉移到濾膜上的。核酸分子雜交實驗包括如下兩個步驟：將核酸樣品轉移到固體支持物濾膜上，這個過程特稱為核酸印跡(nucleic acid blotting)轉移，主要有電泳凝膠核酸印跡法、斑點和狹線印跡法(dot and slot blotting)、菌落和噬菌斑印跡法(colony and plaque blotting)；將具有核酸印跡的濾膜同帶有放射性標記或其它標記的DNA或RNA探針進行