【正文】 烯二酸鹽 細(xì)胞得率（ g細(xì)胞 /g基質(zhì)） Better 理化條件適宜 培養(yǎng)基的理化條件 ⒈ pH ⒉ 水分活度（ Aw）和滲透壓 ⒊ 氧化還原電位（ Eh） Better pH 各大類微生物都有合適的生長 pH范圍 細(xì)菌： ~ 放線菌： ~ 酵母菌： ~ 霉菌： ～ 藻類： ～ 原生動物： ～ pH的內(nèi)源調(diào)節(jié) 緩沖劑（ KH2PO K2HPO4） 不溶性碳酸鹽 CaCO3或碳酸氫鈉 弱酸鹽：檸檬酸鹽、乳酸鹽等 液氨或鹽酸 Better 水分活度（ Aw）和滲透壓 微生物在等滲環(huán)境中良好生長 高滲環(huán)境生長受抑：質(zhì)壁分離 低滲環(huán)境脆弱菌體易破裂死亡：吸水膨脹 微生物有一定的適應(yīng)滲透壓變化的能力 細(xì)胞內(nèi)滲透壓的調(diào)節(jié)機制 滲透壓大小由溶液中所含的的分子或離子的質(zhì)點數(shù)決定 幾個數(shù)據(jù) 大腸桿菌膨壓： 2 atm G+細(xì)菌： 20 atm G細(xì)菌： 5～ 10 atm Better Better Better 水分活度 Aw Def 相同溫度和壓力下，體系中溶液的水蒸汽壓與純水的蒸汽壓之比。 表示微生物可實際利用的 游離水 的含量 ? Aw = p/p0 = ERH/100 （ 0Aw1） 式中 Pw代表溶液蒸汽壓力 , POw代表純水蒸汽壓力。 微生物生長的最低 Aw 普通細(xì)菌： （嗜鹽細(xì)菌 , 葡萄球菌 ） 普通酵母： （耐高滲酵母： ） 普通霉菌： （干性霉菌： ） Better Better 幾種溶液的水活度值 溶 液 aw 30%葡萄糖溶液 1%葡萄糖 +20%甘油 1%葡萄糖 +40%蔗糖 飽和氯化鈉溶液 飽和氯化鈣溶液 飽和氯化鎂溶液 飽和氨化鋰溶液 Better 幾種微生物生長的最適 aw值 微 生 物 aw 一般細(xì)菌 酵母菌 霉菌 嗜鹽細(xì)菌 嗜鹽真菌 嗜高滲酵母菌 Better 時間 h Better 常見食品的水分活度 物品名稱 Aw 物品名稱 Aw 純水 香腸 人血 果醬 新鮮水果 ～ 飽和蔗糖液 海水 咸魚 家畜鮮肉 糖果、干果 面包 谷物、面粉 糖醬、火腿 奶粉 Better （ 3）氧化還原電位（ Eh） 度量某氧化還原系統(tǒng)中的還原劑釋放電子或氧化劑接受電子趨勢的一種指標(biāo) 影響 Eh的因素 與氧分壓有關(guān) 受 pH影響。 在營養(yǎng)缺陷型 （ 生長因素異養(yǎng)型 ） 微生物的培養(yǎng)基中 ， 必須配入所缺的生長因素 。 （ 3） pH值 ：指滅菌后 pH值 ， 這與 pH緩沖液和緩沖物 （ 如 CaCO3） 的使用有關(guān) 。 如：實驗室用的麥汁培養(yǎng)基 馬鈴薯浸汁培養(yǎng)基 大生產(chǎn)用山芋干粉糖化醪 Better 一些營養(yǎng)物質(zhì)的來源與成分 ? 優(yōu)點： 營養(yǎng)豐富、種類多樣、配制方便、價格低廉 ? 缺點： 成分不清楚，不穩(wěn)定 ? 適用： 一般實驗室及發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)中的菌種培養(yǎng)和某些發(fā)酵產(chǎn)物的產(chǎn)生 Better Better 玉米漿的平均化學(xué)組成 (以干物質(zhì)計 ) Better ? 合成培養(yǎng)基 synthetic medium， defined medium 利用化學(xué)成分完全了解的高純化學(xué)試劑制成的培養(yǎng)基。7H2O FeSO4 如： LB培養(yǎng)基 (g/L)： Tryptone 1, Yeast Extract 5, NaCl 1, Better 據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分類 （ 1） 液體培養(yǎng)基 liquid medium 呈液體狀態(tài)的培養(yǎng)基 應(yīng)用 微生物生理、代謝研究 獲得大量菌體 發(fā)酵工業(yè)大規(guī)模生產(chǎn) （ 2） 固體培養(yǎng)基 solid medium 外觀呈固體狀態(tài)的培養(yǎng)基 Better 固體培養(yǎng)基 ? 凝固劑 ? ~2%瓊脂：聚半乳糖的硫酸酯 ? 5~12%明膠：蛋白質(zhì) ? 固體物料組成的疏散固體培養(yǎng)基（麩皮、玉米、 米糠、稻草、大米、麥粒、面包等） ? 用帶有微孔的濾膜覆蓋于營養(yǎng)瓊脂或浸有液體培養(yǎng)基的纖維素襯墊上而成 Better ? 固體培養(yǎng)基 ① 凝固培養(yǎng)基 （ solidified medium） ：液體培養(yǎng)基中加入適當(dāng)凝固劑（ gelling agent）而成。如在液體培養(yǎng)基中加入 1～ 2％瓊脂或 5～ 12％明膠作凝固劑，就可以制成遇熱可融化、冷卻后則凝固的固體培養(yǎng)基，此即凝固培養(yǎng)基。 血清培養(yǎng)基 無機硅膠培養(yǎng)基 (專門用于化能自養(yǎng)微生物分離、純化的固體培養(yǎng)基 ) Better ③ 天然固體培養(yǎng)基： 由天然固體物質(zhì)直接制成的固體培養(yǎng)基。濾膜主要用于對含菌量很少的水中微生物的過濾、濃縮，然后揭下濾膜，把它放在含適當(dāng)營養(yǎng)液的襯墊上進行培養(yǎng)，待長出菌落后，可計算出單位水樣中的含菌量。此方法不僅繁瑣，而且重復(fù)性差，并常導(dǎo)致純培養(yǎng)物樁雜苗污染。 利用固體培養(yǎng)基分離培養(yǎng)微生物的技術(shù)，首先是由德國細(xì)菌學(xué)家 Robert Koch及其助手建立的。上述方法的缺點是一些細(xì)菌在土豆培養(yǎng)基上生長狀態(tài)較差 。值得提及的是， Koch還是一個業(yè)余攝影家，是他首先拍出細(xì)菌的顯微照片，具有利用鎳鹽和明膠制備膠片的豐富經(jīng)駐。但由于明腔溶點低，而且容易樁一些微生物分解利用，其使用受到限制。 Better 凝固劑 瓊脂的特點 ? a) 不被微生物液化分解和利用； ? b) 在微生物的生長溫度范圍內(nèi)能保持固體狀態(tài)； ? c) 凝固點的溫度對微生物無害； ? d) 不會因培養(yǎng)基滅菌而被破壞； ? e) 透明度好 ， 粘著力強； ? f) 配制方便 、 價格低 。瓊脂的加量為 %左右。 Better 固體培養(yǎng)基的應(yīng)用廣泛 菌種分離計數(shù) 選種育種 檢驗雜菌 菌種保藏 生物活性物質(zhì)的生物測定 真菌孢子 微生物固體培養(yǎng)和大規(guī)模生產(chǎn) 半固體培養(yǎng)基（ Semisolid Medium）應(yīng)用 菌運動性、趨化性研究 細(xì)菌、酵母菌菌種保藏 厭氧菌的培養(yǎng)分離和計數(shù) 噬菌體效價測定 Better 按照培養(yǎng)基的特殊用途分類 （ 1）加富培養(yǎng)基 enriched medium 為分離某種微生物而專門設(shè)計， 加入了助長該類微生物的營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基。 （ 3）鑒別培養(yǎng)基 differential medium 添加了某種試劑或化學(xué)藥品而對特定的微生物起鑒別作用的培養(yǎng)基。 （ 5）發(fā)酵培養(yǎng)基 fermentation medium 用于合成某種預(yù)定的發(fā)酵的培養(yǎng)基。 ? 現(xiàn)代基因克隆技術(shù)中也常用選擇培養(yǎng)基，在篩選含有重組質(zhì)粒的基因工程菌株過程中，利用質(zhì)粒上具有的對某種 (些 )抗生素的抗性選擇標(biāo)記，在培養(yǎng)基中加人相應(yīng)抗生素，就能比較方便地淘汰非重組菌株，以減少篩選目標(biāo)菌株的工作量。將大腸桿菌接種在伊紅－美蘭培養(yǎng)基上 ， 當(dāng)大腸桿菌發(fā)酵乳糖時 ， 能使伊紅－美蘭培養(yǎng)基上 ， 當(dāng)大腸桿菌發(fā)酵乳糖時 ， 能使伊紅－美蘭結(jié)合成黑色化合物 ， 所以在這種培養(yǎng)基上長出來的大腸桿菌 ， 呈紫黑色并帶我金屬光澤的小菌落 ， 而產(chǎn)氣桿菌在這種培養(yǎng)基上長出的是較大的棕色菌落 。 精確測定 冷卻后測定 過度加熱 貯存時間：吸收二氧化碳 Better 瓊脂膠體強度 當(dāng) pH，瓊脂固體培養(yǎng)基滅菌后不再凝固或凝固不堅，重新調(diào)節(jié) pH可恢復(fù)其膠體性質(zhì) Better 滅菌 （詳見第七章微生物的生長與控制） ?及時滅菌 ? 培養(yǎng)基為什么要及時滅菌？ ? 避免微生物污染，改變培養(yǎng)基的化學(xué)組成 ?滅菌的方法 ? 熱滅菌 ? 冷滅菌 ?濕熱滅菌的工藝條件 121℃ － 30 min（是如何制訂的） Better 滅菌對培養(yǎng)基的影響 ?熱敏感性物質(zhì) ? 糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖（如何解決？） ?形成沉淀 ? 磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽離子形成沉淀（添加鰲合劑 EDTA） ?培養(yǎng)基的 pH Better 培養(yǎng)基的鑒定（制備檢驗）與保存 ? 一般性狀檢查 ? 顏色、澄清度、 pH、軟硬度 ? 無菌檢查 ? 37攝氏度 24培養(yǎng)過夜 ? 性能試驗 ? 已知菌種生長代謝鑒定 ? 培養(yǎng)基的保存 Better 本章小結(jié) 微生物的營養(yǎng)素 微生物的營養(yǎng)類型 微生物的營養(yǎng)方式 微生物培養(yǎng)基的設(shè)計和配制 Better 小 結(jié) ? 微生物需要大約 10種大量元素 ， 部分是用于構(gòu)成碳水化合物 、 脂質(zhì) 、 蛋白 、 核酸 ,幾種其它元素 ，很少量地需要作為輔酶和輔基 。 ? 營養(yǎng)分子不能通過被動擴散持續(xù)穿過細(xì)胞質(zhì)膜 ，它們必須被三種主動運輸機制中的一種進行運輸 。 Better 本章主要概念題 ? 什么是大量元素 、 什么是微量元素 。 ? 什么叫碳源 、 列出微生物常用的碳源 。 Better ? 微生物利用氮源有何特點 ？ ? 什么叫氨基酸自養(yǎng)型 ？ 什么叫氨基酸異養(yǎng)型 ？ ? 比較營養(yǎng)物質(zhì)進入細(xì)胞的差異 ？ ? 1 什么叫培養(yǎng)基 ？ 什么是天然培養(yǎng)基 ？ ? 1 什么是半固體培養(yǎng)基 ？ ? 1 什么叫碳氮比 ？ ? 1配制備培養(yǎng)基的基本原則是什么？ Better 本 章 思 考 題 1. 什么是生長因子？ 2. 圖解營養(yǎng)物質(zhì)進入細(xì)胞的幾種方式 3. 簡述配制培養(yǎng)基的基本原理 4. 歸納本章的名詞解釋 5. 請查閱相關(guān)資料，發(fā)現(xiàn)一培養(yǎng)基，請闡述其中各個成分的作用，并判斷屬于什么類型的培養(yǎng)基（書本上的培養(yǎng)