微生物遺傳變異與育種(3)-閱讀頁
2025-01-29 00:18本頁面
【正文】 ● 夾層培養(yǎng)法 （ 4）鑒定缺陷型 (生長(zhǎng)譜法 ) 1）制備基本 培養(yǎng)基； 2）加充分洗 滌菌懸液； 3）加待測(cè)營(yíng) 養(yǎng)物； 4）觀察生長(zhǎng)。 .3 基因重組 ●基因重組（遺傳重組）： 兩個(gè)獨(dú)立基因組內(nèi)的遺傳物 質(zhì)，通過一定的途徑轉(zhuǎn)移到一 起，形成新的穩(wěn)定的基因組過程。 轉(zhuǎn)化的基本條件 （ 1）感受態(tài)： 受體菌最容易接受外源 DNA 片段并能實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化的一種生理狀態(tài)。種屬的特異性；） 外部因素（ CAMP、聚乙二醇、二價(jià)陽 離子 低溫低滲 CaCl處理、培養(yǎng)條件） ● 轉(zhuǎn)化頻率： ～ 1%（很低），最高 10%，質(zhì)粒 為良好的轉(zhuǎn)化因子。 ● 大?。好恳晦D(zhuǎn)化 DNA片段分子量約 1 107， 約占 染色體組 %，平均 15個(gè)基因。 If DNA from a virus is used as the cloning vector, the process is called transfection. (Introduction to microbiology, John L. Ingraham ) （ 二 ） 轉(zhuǎn)導(dǎo) 完全缺陷或部分缺陷噬菌體為媒介 ,使受體細(xì)胞獲得供體細(xì)胞部分遺傳性狀的現(xiàn)象。 ● 完全轉(zhuǎn)導(dǎo) (形成轉(zhuǎn)導(dǎo)子 ) 感染復(fù)數(shù)：感染的噬菌體數(shù) /被感染細(xì)胞數(shù) ● 流產(chǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)： (僅形成一個(gè)轉(zhuǎn)導(dǎo)子 , 產(chǎn)生小菌落 ) ● 經(jīng)轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)入受體菌的供體菌 DNA片段 ， 在受體菌內(nèi)不交換、整合、復(fù)制，也不迅速消失，僅進(jìn)行轉(zhuǎn)錄、翻譯、性狀表達(dá)轉(zhuǎn)導(dǎo)現(xiàn)象。 A、低頻轉(zhuǎn)導(dǎo)（ＬＦＴ） １） ?噬菌體感染 ２）誘導(dǎo)裂解 ３）不正常切離（低頻轉(zhuǎn)導(dǎo)裂解物） （ ?dgal、 ?dbio） ４）形成局限轉(zhuǎn)導(dǎo)子 B、高頻轉(zhuǎn)導(dǎo)（ＨＦＴ） 1）概念 ●低頻轉(zhuǎn)導(dǎo) (LFT)裂解物：溶源 噬菌體感染后， 帶少數(shù)局限轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體 的細(xì)胞 裂解物。 (來源： LFT裂解物以高的感染復(fù)數(shù)感染宿主 ) ● 雙重溶源菌 2）高頻轉(zhuǎn)導(dǎo)：在局限轉(zhuǎn)導(dǎo)中，用雙重溶源 菌誘導(dǎo)后產(chǎn)生的高頻轉(zhuǎn)導(dǎo)裂解物轉(zhuǎn)導(dǎo)受體菌 可獲得的高達(dá) 50% 的轉(zhuǎn)導(dǎo)子，稱之 ~。 ●白喉毒素： 白喉?xiàng)U菌的 223。 ● 存在方式 :四種接合型菌株 F F+ 菌株 Orit：起始子 Hfr菌株： 高頻重組菌株， F+整合在染色體上 成為附加體的狀態(tài)，若與 F 接合，有很高的重組 頻率。 ● 主要步驟： 1）選擇親本 2）制備原生質(zhì)體 3）促融 4）原生質(zhì)體再生 5）融合子檢出 6）篩選 Metabolic engineering by genome shulffling Nature biotechnology 2022, 20, 666 建議讀物： 總結(jié)： 167。 菌種 衰退的防止： 1）減少傳代次數(shù) 2）良好培養(yǎng)條件 3）利用不易衰退 的細(xì)胞傳代 4） 菌種的有效保藏 ● 菌種保藏相關(guān)問題： 1．保藏條件：低溫、干燥、無氧、低 營(yíng)養(yǎng)、保護(hù)劑 菌種的有效管理 保藏機(jī)構(gòu)： ATCC、 CCTCC 有效的保藏方法 ● 常用保藏方法比較：
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