【正文】 釋，測(cè)定多數(shù)脂質(zhì)體的粒徑在200～ 800nm 之間，平均粒度 350nm。 穩(wěn)定性觀察 將脂質(zhì)體鬼臼毒素混懸液置于 4℃冰箱中， 3個(gè)月后測(cè)定包封率為 ％， 6個(gè)月后的包封率為 ％；將脂質(zhì)體鬼臼毒素混懸液置于室溫下 6個(gè)月肉眼可見黃白色沉淀，包封率下降為 ％。表明將脂質(zhì)體涂膜劑較混懸液的穩(wěn)定性高。表明鬼臼毒素脂質(zhì)體混懸液具有熱不穩(wěn)定性。 皮膚靶向性研究 大鼠用 1％苯巴比妥鈉腹腔注射麻醉后．俯臥位固定大鼠于揲作臺(tái)，選取背部?jī)蓚?cè)對(duì)稱部位約 ，電動(dòng)剃須刀剃凈鼠毛， 3()只大鼠從 1～ 30隨機(jī)編號(hào)，單數(shù)左側(cè)涂抹 ％脂質(zhì)體鬼臼毒素混懸液，右側(cè)則涂抹 ％鬼臼毒素酊劑，雙數(shù)與之相反，用 1 mL注射器吸取藥物，每只涂藥量均為 。分別于取標(biāo)本前 1 24 h單劑量涂藥，每一時(shí)間涂 5只大鼠。皮膚組織標(biāo)本采用常規(guī)石蠟切片技術(shù)連續(xù)切片，厚 6～ 8μm，不染色 ,不封片。結(jié)果鬼臼毒素 24 h熒光值曲線下面積 (AUC)，表皮層中觀察組是對(duì)照組的 ，真皮層中是 ；對(duì)照組在涂藥 2 h后，表皮和真皮的熒光量即達(dá)到峰值，在 4 h后熒光量迅速降低，而觀察組在 4 h前，表皮和真皮中的熒光量較低， 6 h后逐漸增高，在 12 h達(dá)峰值，顯示脂質(zhì)體制劑使鬼臼毒素在皮膚中緩慢釋放，并持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間。對(duì)照組 33例涂鬼臼毒素軟膏，給藥方法同觀察組。χ2檢驗(yàn)兩者的治愈率及有效率均有明顯差異 (P)。經(jīng)藥理和毒理研究表明 ，水飛薊素具有明顯的保肝及 穩(wěn)定肝細(xì)胞膜作用，對(duì)各種毒物引起的肝臟損害有不同程度的保護(hù)和治療作用。為了改善水飛薊素口服給藥的生物利用度，四川大學(xué)華西藥學(xué)院、上海醫(yī)藥工業(yè)研究院、中國(guó)藥科大學(xué)等進(jìn)行了水飛薊素固體脂質(zhì)納米粒、前體脂質(zhì)體及微乳的研制 [33， 5962]。 5)℃水浴下，使其完全溶解于適量的乙酸乙酯中，作為有機(jī)相；取一定量的 poloxamer 188和甘油分散于同溫度 的水中，作為水相。 min 攪拌的條件下，將有機(jī)相緩慢注入 (80177。在室溫下， 1 500 bar，高壓乳勻 5次，迅速冷至室溫，得 SI N水分散體。 28nm，包封率為 177。 選用 5％乳糖和 2％乳糖加 2％葡萄糖作為支架劑，－ 45℃預(yù)凍 10 h，升溫至－ 25℃維持 5 h，再升溫至－ 5℃維持 2 h，再升溫至 10℃維持 2 h，最后升溫至 30℃維持 6 h，即得 SM－ SLN凍干粉。 35 nm，包封率為 177。 粒徑對(duì)口服吸收的影響 稱取處方量的 水飛薊素（ SM） 、山榆酸甘油酯、大豆磷脂，在 (8O177。取一定量的 poloxamer 188和甘油分散于 4 ℃ 的水中，形成均勻的水相，加入上述所得凍干固體，研磨至形成均勻的微粒水分散體系后，分別采用高壓乳勻法 (70 MPa，10 cycles)、高速剪切分散乳化法 (10000r 見表 96。s， n=3) 分別測(cè)定大鼠口服 3種粒度大小的 SM－ SLN后得血藥濃度，血藥濃度經(jīng)時(shí)曲線圖見圖 915。 Desai等 [63]的研究表明，在胃腸道里， PP組織吸收的納米粒子的濃度比非 PP組織吸收的粒子濃度高 2～ 200倍，與其他粒徑的粒子 (500 nm和 1，10 um)相比， 100 nm左右的粒子可以更有效的通過 PP和其他腸系淋巴組織進(jìn)入血液循環(huán)，因此，粒徑在 100 nm左右的粒子可以獲得更高的生物利用度。 2)g，雌雄各半，隨機(jī)分為 20組，每組 6只。迅速解剖處死小鼠取出心、肝、脾、肺、 腎、腦各器官，濾紙吸干，精密稱重后，加入適量蒸餾水研成勻漿，備用。按文獻(xiàn)方法 [64]測(cè)定臟器及全血中水飛薊賓含量。 圖 916 血漿中藥物濃度經(jīng)時(shí)曲線 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小鼠口服 SM－ SLN和 SM后， SM－ SLN組在血漿中的 AUC、MRT、 t1/2 (、 、 )值分別比 SM組 (、 、 )高 、 倍、 ，且 SM－ SLN組的藥物總體清除率 (CLs)降低近 3倍，表明 SM－ SLN能明顯提高藥物的口服生物利用度，延長(zhǎng)藥物在血漿中的作用時(shí)間。 2 水飛薊素前體脂質(zhì)體 制備與表征 水飛薊素前體脂質(zhì)體的制備稱取處方量的大豆磷脂 、膽固醇 、水飛薊素 ，超聲分散 30s，制成類脂質(zhì) 溶液，然后稱取過 100目篩的甘露醇粉末，置于茄形瓶中，分次加入適量的類脂質(zhì)溶液，于(37177。取前體脂質(zhì)體 3g，加水 10 mL，室溫下以 50 r粒徑測(cè)定結(jié)果顯示，水飛薊素前體脂質(zhì)體水合后， %的脂質(zhì)體粒徑 nm，脂質(zhì)體的平均粒徑為 nm．多分散指數(shù)為 ，包封率為（ 177。 透射電鏡下可以觀察到 ，水合后的脂質(zhì)體基本上是類橢圓狀的單室脂質(zhì)體。 圖 918 大鼠灌服水飛薊素脂質(zhì)體 血漿中藥物濃度經(jīng)時(shí)曲線 (n=6) 試驗(yàn)結(jié)果表明，給予水飛薊素原藥的混懸液時(shí)，水飛薊賓總血漿濃度和游離水飛薊賓血漿濃度都在檢測(cè)限以下，無法測(cè)定，而給予水飛薊素脂質(zhì)體時(shí)，體內(nèi)吸收很迅速， 20 min血漿中總藥物濃度就達(dá)峰值， 1 h時(shí)血漿中游離藥物也達(dá)峰值，且總藥物濃度 Cmax 和游離藥物 C max 分別為 ug 3 水飛薊素微乳 制備與表征 將中碳鏈脂肪酸甘油酯 (MCT）、乳化劑 Cremophor RH40和助乳化劑 1， 2一丙二醇以 5： ： 37℃水浴中 50r／ min攪勻，加入 5％的水飛薊素，繼續(xù)攪拌直至形成紅棕色均一透明的液體，即得到水飛薊素自乳化微乳。 圖 919 水飛薊素微乳的電子透射顯微照片（ 1000） 穩(wěn)定性考察 將裝有水飛薊素自微乳 10ml的安瓿封口，分別于光照 (45001x)和高溫 (6O℃，相對(duì)濕度 75％ )放置 10d， (4O177。 5) 放置 3個(gè)月進(jìn)行穩(wěn)定性考察。表明水飛薊素自微乳液穩(wěn)定。具有藥理活性的主要成分有莪術(shù)醇、莪術(shù)酮、莪術(shù)二酮、焦莪術(shù)酮等。其制劑在宮頸癌、肝癌 、 心血管疾病及病毒性感染 疾病 治療方面均取得了滿意的療效。這種吸收方式可使抗病毒、抗腫瘤藥物更易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用。 1 莪術(shù)油固體脂質(zhì)納米粒 制備 取莪術(shù)油 ，在 75℃ 177。在 2 10 3 r將所得初乳在 75℃ 177。 取適量莪術(shù)油一 SLN混懸液，加入適量的凍干保護(hù)劑甘露醇，在 － 40℃ 抽真空條件下， 48 h低溫冷凍干燥得凍干粉，外觀呈淡黃色粉末狀，流動(dòng)性良好。用激光散射粒度測(cè)定儀測(cè)定其粒徑，平均值為 nm，粒徑分布圖見圖921， 可見粒徑分布較窄，且基本呈正態(tài)分布。 圖 920 莪術(shù)油一 SLN透射電鏡照片（ 105） 圖 921 莪術(shù)油一 SLN粒徑分布 2 莪術(shù)油納米乳劑 制備 取甘油、吐溫 80，攪拌分散于 60℃處方量 2/5的蒸餾水中。待卵磷脂與 F68分散完全后，將莪術(shù)油逐滴加入到水相中，同時(shí)磁力攪拌，加完后，以探頭式超聲破碎儀超聲 6min，即得莪術(shù)油初乳。將此膠體分散體系用高壓均質(zhì)機(jī)于 130MPa 循環(huán) 3 次，即可得到乳光明顯的莪術(shù)油乳劑。 )nm；透射電鏡下觀察納米乳劑形態(tài)為類球狀 ,大小均勻；采用葡聚糖凝膠柱層析法測(cè)定吉馬酮的包封率為 (177。 葫蘆素 葫蘆素類成分是一類從植物中提取的高度氧化的四環(huán)三萜類化合物，今已發(fā)現(xiàn) 40多種，葫蘆素 BE（ CuBE）主要從中藥甜瓜蒂中提取的。有人通過體外抗瘤試驗(yàn)證明 [6768]，葫蘆素BE對(duì)人舌鱗癌 Tca8113和人頰鱗癌 BcaCD885細(xì)胞系、人腺樣囊性癌 (ACC－ M)和粘液表皮樣癌 (MEC－ 1)細(xì)胞系有較強(qiáng)的相對(duì)抗腫瘤活性。 制備與表征 將 CuBE 和 PLA 按質(zhì)量比 1： 3 的比例溶于乙酸乙 脂 混合溶液中，混合均勻后加人含有表面活性劑的 水性溶液中，室溫下以中速電磁攪拌 6 h，溶于乙酸乙脂 混合溶液中的聚乳酸由于乙酸乙 脂 的揮發(fā)而發(fā)生聚合，將藥物包裹、鑲嵌和吸附而形成載藥納米微粒，然后用微孔濾膜抽濾即得乳白色的 CuBEPLANP 膠體溶液，在 CuBEPLANP 膠體溶液中加人 10％的甘露醇作支架劑，拌攪溶解后以2 ml／瓶分裝于安瓿中，然后冷凍干燥即得 CuBEPLANP 凍干針劑。 CuBEPLANP凍干針劑在透射電鏡下均為球形顆粒，無粘連，粒徑分布范圍為 47120 nm，平均粒徑 為 85nm。 ％，包封率為 ％ 177。 體外釋藥研究 用 ％生理鹽水作為釋藥介質(zhì)，取 CuBEPLANP凍干針劑 5瓶，每瓶均用 l0 m1生理鹽水溶散后，定量轉(zhuǎn)移至透析袋中，然后懸置于盛有 50 m1生理鹽水的 100 m1錐形瓶中，塞緊，將錐形瓶放置于 37℃ 恒溫水溶振蕩器上，以 60r/min恒溫恒速振蕩，在實(shí)驗(yàn)后第 0. 、 、 、 、 、 l2 .0、 、 、． 、 、 、 h吸取釋藥介質(zhì) 5 m1，用高效液相色譜儀測(cè)定藥物含量．同時(shí)補(bǔ)充等量 5 ml生理鹽水，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的累積釋藥百分率。經(jīng)數(shù)據(jù)處理， CuBE－PLA－ NP凍干針劑的體外累積釋藥規(guī)律與 Higuchi方程擬合。 圖 922 CuBEPLANP凍干針劑體外累積釋藥曲線 靶向性研究 用高頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌株 U14 建立昆明小鼠頰癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移模型，用CuBEPLANP 和葫蘆素 BE(CuBE)分別進(jìn)行癌周黏膜下注射，注射后在 15 個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)處死動(dòng)物，用高效液相色譜儀檢測(cè)血、心、肝、脾、肺、腎和頸淋巴結(jié)在不同時(shí)間點(diǎn)的藥物濃度，用靶向指數(shù)、選擇性指數(shù)、靶向效率、相對(duì)靶向效率和藥物峰濃度比來全面評(píng)價(jià) CuBEPLANP 的頸淋巴結(jié)靶向性。結(jié)論平均粒徑為 85 nm 的 CuBEPLANP 對(duì)口腔癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶具有良好的靶向性，既提高頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶內(nèi)藥物濃度和延長(zhǎng)藥物持續(xù)作用時(shí)間，同時(shí)也降低了血、心、肝、脾、肺、腎中藥物濃度。結(jié)果 CuBE－ PLA－ NP39。 mg/ kg和 5. 60 mg/kg177。 mg/ kg和 mg/kg177。無論皮下和靜脈注射，當(dāng) CuBE和 CuBE－ PLA－ NP的注射劑量小于半數(shù)致死量(LD50 )時(shí)，用藥后 小鼠攝食、小便、毛發(fā)及活動(dòng)度均無變化，當(dāng) CuBE和 CuBE－PLA－ NP的劑量超過 LD50值時(shí)，存活小鼠的活動(dòng)度和毛發(fā)的光澤度有所下降，余無明顯變化。注射后 48h放血處死動(dòng)物，縱形剖開注射部位肌肉，觀察股四頭肌變化。 實(shí) 驗(yàn)結(jié)果表明， CuBEPLANP凍干針劑對(duì)機(jī)體的毒副作用和局部刺激性小于 CuBE。從時(shí)間依賴性殺傷效應(yīng)曲線（圖923）可看出： CuBE對(duì) Tea8113和 BeaCD885的時(shí)間依賴性殺傷效應(yīng)主要在用藥后的前 5 d， 5 d后其時(shí)間依賴性殺傷效應(yīng)增加很小，但 CuBEPLANP由于是緩釋劑，它對(duì) Tea8113和 BeaCD885的時(shí)間依賴性殺傷效應(yīng)一直持 續(xù)在整個(gè)實(shí)驗(yàn)的 8 d，但在相同濃度的相同時(shí)間點(diǎn)，其 IC50大于 CuBE的 IC50。從圖中可看出， CuBE和 CuBE－ PLA－ NP對(duì) Tea811BcaCD885均有高度敏感的殺傷活性，且這種殺傷作用呈劑量依賴性，即藥物濃度越大，殺傷作用越強(qiáng)。近年來的研究表明雄黃可通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞 DNA的合成，增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能等多種因素發(fā)揮抗腫瘤作用，顯示出廣闊的應(yīng)用前景。歷來雄黃的臨床運(yùn)用都 是以水飛的形式，工業(yè)生產(chǎn)速度慢，且顆粒較大，吸收度小。 納米雄黃的制備方法有： 方法一：將 － 氛的球磨罐中，同時(shí)裝入 － 20kg的磨球，使球與雄黃粉比保持在（ 5:1）－（ 15:1），控制高能球磨機(jī)的轉(zhuǎn)速和時(shí)間，使其在 200－ 400r/min(轉(zhuǎn) /分 )和 2－ 60h范圍，溫度控制在－ 50~100℃，以獲取平均粒徑 小于 100nm的雄黃粉末。 兩種方法所用惰性氣體為氮?dú)夂投趸肌? 王曉波等 [73]用家兔做了納米雄黃的藥代動(dòng)力學(xué)研究。結(jié)果表明，納米級(jí)雄黃粉體與傳統(tǒng)雄黃比較，其藥代動(dòng)力學(xué)發(fā)生顯著變化，吸收相增大而消除相減小，這為雄黃納米化研究提供了有力依據(jù)。結(jié)果表明，對(duì)應(yīng)粒徑 100－ 500nm的雄黃，凋亡率分別為 %, %,%, %，其藥效作用呈現(xiàn)明顯的尺寸效應(yīng)，納米顆粒表現(xiàn)出尤為突出的生物效應(yīng)。結(jié)果顯示，納米雄 黃能顯著降低 HL－ 60細(xì)胞的成活率并產(chǎn)生典型的細(xì)胞凋亡，包括細(xì)胞形態(tài)改變、 DNA梯帶形成、具有 subG1phase的細(xì)胞數(shù)量增加，而相同濃度的原料雄黃未誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，納米雄黃可能是通過提高脂質(zhì)過氧化和減小細(xì)胞膜的通透性來誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的。該藥味苦性寒，歸心、肝、腎、大腸經(jīng)，具有清熱燥濕、瀉火解毒等功效，其主要有效成分是以鹽酸小檗堿為代表的生物堿 [76]。黃連中所含的生物堿為水難溶性，以常規(guī)粉末入藥生物利用度低，藥效難以得到充分得發(fā)揮。 納米黃連的制備及體外溶出度研究 取一定量的黃連原料用 FFC230粉碎機(jī)粉碎，過 100 目篩得到黃連的常規(guī)粉體樣品。再取部分黃連常規(guī)粉體用高速離心氣流沖擊粉碎機(jī)粉碎，經(jīng)離心式空氣分級(jí)機(jī)分級(jí)，得到黃連的納米粉體樣品。 分別進(jìn)行黃連常規(guī)粉體、超微粉體和納米粉體的體外溶 出度試驗(yàn)，結(jié)果溶出4h時(shí)黃連納米粉體和超微粉體的小檗堿溶出量比常規(guī)粉體分別增加 %和%。從圖中可以看出，隨著黃連粉體粒徑的減小，小檗堿的溶出速率加快，黃連超微粉體和納米粉體中小檗堿溶出速率比常規(guī)粉體大，而納米粉體比超微粉體表現(xiàn)得更加