dna復(fù)制ppt課件(2)-閱讀頁(yè)
2025-01-21 14:02本頁(yè)面
【正文】 sting strand of duplex DNA with newly synthesized material. DNase Ⅰ 真核生物 DNA聚合酶的種類及其功能 真核生物由不同 DNA聚合酶 分別負(fù)責(zé)起始和延伸 三種細(xì)胞核 DNA復(fù)制酶具有不同的功能 : ? DNA polymerase α 起始新鏈合成 ? DNA polymerase δ 延伸先導(dǎo)鏈 ? DNA polymerase ε 可能與后隨鏈合成有關(guān)，也可能具有其他功能 DNA聚合酶所具有的共同結(jié)構(gòu) ? 許多 DNA聚合酶有一個(gè)由三個(gè)結(jié)構(gòu)域組成的大裂隙，類似于手形。 ? 原核拓?fù)錁?gòu)酶 Ⅰ ： MW=100kD，單肽鏈，含 3~4個(gè) Zn。每次改變一個(gè)連環(huán)數(shù)。 ? 拓?fù)洚悩?gòu)酶 Ⅱ 拓?fù)洚悩?gòu)酶 Ⅱ 也稱旋轉(zhuǎn)酶。 使正超螺旋轉(zhuǎn)化為負(fù)超螺旋，每次改變兩個(gè)連接數(shù)。 Rep蛋白 提供解旋酶活性，它使兩鏈分離。 Three proteins unwind φX174 DNA 3`OH引發(fā)末端的產(chǎn)生 多種方法可以產(chǎn)生 3`OH末端 1) 3) 2) 起始需要解旋酶、單鏈結(jié)合蛋白和引發(fā)酶 復(fù)制復(fù)合體的形成 DNA合成鏈的延伸 半保留復(fù)制合成兩條新的 DNA鏈 DNA的合成是半不連續(xù)的 連接酶將岡崎片段連接在一起 前導(dǎo)鏈和后隨鏈的協(xié)調(diào)合成 DNA復(fù)制忠實(shí)性的控制 (1) 半保留復(fù)制的概念 DNA在復(fù)制時(shí)，兩條鏈解開分別作為模板，在 DNA聚合酶的催化下按堿基互補(bǔ)的原則合成兩條與模板鏈互補(bǔ)的新鏈，以組成新的 DNA分子。由于子代 DNA分子中一條鏈來(lái)自親代，另一條鏈?zhǔn)切潞铣傻?，這種復(fù)制方式稱為半保留復(fù)制 (semiconsertive replication)。 stahl用同位素（ 15N） 示蹤標(biāo)記加密度梯度離心技術(shù) 實(shí)驗(yàn) ,該實(shí)驗(yàn)跟蹤了生長(zhǎng)了三代的大腸桿菌， 證明了DNA是采取半保留的方式進(jìn)行復(fù)制 。因后隨鏈?zhǔn)遣贿B續(xù)合成的而先導(dǎo)鏈?zhǔn)沁B續(xù)合成的，所以我們稱之為半不連續(xù)復(fù)制（ semidiscontinuous replication)。 替換（ substitution): 指摻入錯(cuò)誤核苷酸（不正確配對(duì)） ?Note: DNA聚合酶通常具有 3`5`核酸外切酶活性，可以切除錯(cuò)配堿基；通過(guò)校正機(jī)制，復(fù)制忠實(shí)性還可提高 100倍。 DNA polymerases have exonuclease activity 修復(fù)會(huì)把含損傷堿基的一小段 DNA替換掉 DNA復(fù)制的終止 一般說(shuō)來(lái)，鏈的終止不需要特定的信號(hào)，也不需要特殊的蛋白質(zhì)來(lái)參與，到達(dá)終止位點(diǎn)后， DNA聚合酶離開 DNA雙鏈，終止發(fā)生。 DNA合成包括：起始、延伸和終止三個(gè)階段 ? 起始 (initiation)：涉及一種蛋白質(zhì)復(fù)合物，它識(shí)別復(fù)制起始點(diǎn) (origin)。只有當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)復(fù)合體和 DNA在復(fù)制處的特殊結(jié)構(gòu)結(jié)合時(shí)，復(fù)制體 (replisome)才存在，在復(fù)制體延 DNA移動(dòng)時(shí)，母鏈分開而子鏈合成； ? 終止（ termination)： 在復(fù)制子末端，終止反應(yīng)是必需的。
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