分離科學(xué)與進(jìn)展中科大lecture(4)-閱讀頁(yè)
2024-11-03 11:56本頁(yè)面
【正文】 作展開劑，即反相層析 。點(diǎn)樣斑點(diǎn)在 2~3mm左右為佳，如試樣較稀，可等溶劑揮發(fā)后再在同一點(diǎn)多次點(diǎn)樣 ? 展開可使用上升法（展開較慢）、下降法（適用于小比移值試樣）、徑向法、雙向法（如氨基酸分離） 紙層析的顯色 ? 有色物質(zhì)可直接觀察 ? 無(wú)色物質(zhì)可用各種物理或化學(xué)方法顯色：紫外照射、利用顯色劑（酸堿指示劑、茚三酮）、還原劑（ SnCl2還原貴金屬離子金鉑鈀銠等） 薄層層析法 ? 薄層層析是在紙層析和柱層析的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種色層法。 薄層層析法的理論基礎(chǔ) ? 層析過(guò)程中，展開劑前緣移動(dòng)的距離與時(shí)間的平方根成正比： L = (k t)1/2 其中比例常數(shù)正比于展開劑的表面張力，反比于展開劑的粘度： k ? g/h 展開劑前緣移動(dòng)的速度 ： vf = dL/dt = (kt)1/2=k/2L 薄層層析法的理論基礎(chǔ) vf = k/2L ? 即展開劑前緣移動(dòng)的速度反比于展開劑前緣移動(dòng)的距離，而實(shí)際情況還要復(fù)雜得多，展開劑在薄層中的流動(dòng)速度是空間、時(shí)間的復(fù)雜函數(shù)。 薄層層析法的速率理論 ? 平均塔板高度可表示為： ? 其中 Z0為液面與原點(diǎn)間的距離， a, b, c為三個(gè)常數(shù)，對(duì)于一定的層析系統(tǒng)和一定的溶質(zhì)（即被分離組分），它們的值不變。 薄層層析法的速率理論 ? 此公式包括三項(xiàng)，從左至右為分子擴(kuò)散項(xiàng)，它隨展開距離的增大而增大；第二項(xiàng)是填充項(xiàng)，第三項(xiàng)是傳質(zhì)項(xiàng)，它們均隨展開距離的增加而減小。而隨吸附劑顆粒的增大，后兩項(xiàng)將成為主要的，因此要得到最佳的分離效果，合適的粒度是關(guān)鍵。實(shí)踐表明隨著 Rf值的降低（保留值增大），塔板高度顯著增大，因此有人建議將 b改為： b = 2gDm/qdpRf 薄層層析法的速率理論 ? 填充項(xiàng)常數(shù)： a = (dp5q/2Dm)1/3 式中 A是隨填充（涂鋪）情況而定的常數(shù)，當(dāng)填充情況極好時(shí)， A=1 ? 傳質(zhì)項(xiàng)常數(shù)： c = Sqdp3/2Dm S是隨傳質(zhì)情況而定的常數(shù)值，當(dāng)傳質(zhì)情況良好時(shí)， S= D. 高效薄層的超壓展開 薄層層析的分離度 ? 在薄層層析中層析效率同樣也可用分離度 Rs來(lái)表示。和柱層析相似，最常用的是硅膠和氧化鋁，它們的吸附能力強(qiáng)，可分離的試樣種類多，相對(duì)于柱層析薄層層析用的吸附劑粒度更細(xì)些。 薄層層析的吸附劑和薄層 ? 氧化鋁活度的測(cè)定 ? 一般把氧化鋁活化成 IIIII級(jí)或 III~IV級(jí)使用，很少使用I級(jí)（強(qiáng)吸附中心的存在導(dǎo)致斑點(diǎn)拖尾） 薄層層析的吸附劑和薄層 ? 硅膠：機(jī)械性能較差，必須加入粘合劑鋪成硬板使用，常用的粘合劑有煅石膏、聚乙烯醇、淀粉、羧甲基纖維素鈉（ CMC）等。硅膠 GF254指既含煅石膏又含熒光指示劑的硅膠；不含粘合劑只含熒光指示劑的硅膠稱為硅膠HF254+366， 254nm (ZnSiO4?Mn)，366nm(ZnS ? CdS ? Ag) 薄層層析的吸附劑和薄層 ? 反相鍵合固定相的硅膠： 薄層層析的吸附劑和薄層 ? 鋪層方法：干法鋪層（氧化鋁干板）；濕法鋪層 ? 預(yù)制薄層板，燒結(jié)板（因玻璃粉混合燒結(jié)，可經(jīng)洗滌后重復(fù)使用），厚薄層板 各種特制薄層 ? 混合薄層：由兩種不同的吸附劑混合而成。還可以把兩種吸附劑的混合配比逐漸改變，制成梯度薄層，按梯度方向展開，可使在均勻薄層在不能分離的組分得到分離 各種特制薄層 ? 酸堿薄層和 pH緩沖薄層：用于氨基酸或生物堿的分離等 ? 絡(luò)合薄層：用 AgNO3等無(wú)機(jī)試劑的水溶液代替水調(diào)硅膠煳來(lái)鋪制的薄層，可用于區(qū)分不飽和程度不同的脂肪酸以獲得良好的分離（結(jié)合力：雙鍵 三鍵 飽和） ? 涂布固定液的薄層：有各種涂布方法 各種特制薄層 ? 具有濃縮區(qū)的薄層：由兩種不同硅膠鋪成的薄層。 各種特制薄層 各種特制薄層 ? 高效薄層：由顆粒十分細(xì)小，粒度十分均勻，一般直徑為 5~7mm的硅膠吸附劑，加上高度惰性的粘合劑，鋪成的質(zhì)地十分致密、均勻、平滑的高效薄層預(yù)制板。 薄層層析中展開劑的 選擇、點(diǎn)樣和展開 ? 展開劑的選擇：展開劑、被分離組分的極性和吸附劑的活性這三者是相互關(guān)聯(lián)相互制約的。一般來(lái)講，在水中形成氫鍵的能力最強(qiáng)，在有機(jī)溶劑中形成氫鍵的能力較弱弱，在堿性有機(jī)溶劑中形成氫鍵的能
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