20xx年醫(yī)學(xué)專題—干細(xì)胞成骨、成脂、成軟骨誘導(dǎo)分化及檢測-在線瀏覽
2024-11-17 22:23本頁面
【正文】 用alcian blue 孵育5 min, 流水沖洗2 min ,麥?zhǔn)咸K木素復(fù)染5 min ,流水沖洗2 min ,晾干，顯微鏡下觀察細(xì)胞的蛋白聚糖沉積。誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨方向分化成骨誘導(dǎo)培養(yǎng): 取第 3代細(xì)胞, 接種入含體積分?jǐn)?shù)為 的新生牛血清 、 μmol/L 地 塞 米 松 、50 μmol/L 抗 壞 血酸 、10 mmol/L β 甘 油 磷 酸 鈉 的 高 糖 DMEM培養(yǎng)基進行成骨誘導(dǎo)培養(yǎng), 進行形態(tài)觀察、功能檢測。取 5 塊玻片, 每片隨機取 2個視野, 采用網(wǎng)格計數(shù)法, 計算堿性磷酸酶染色 陽性細(xì)胞的百分比。③鈣結(jié)節(jié)染色: Von Kossa’s礦化結(jié)節(jié)染色法 原理是將礦化基質(zhì)中的磷酸鹽(鈣)、碳酸鹽(鈣)轉(zhuǎn)變?yōu)榱姿徙y、碳酸銀，然后用日光、紫外線或強還原劑使其還原為黑色的金屬銀。Van kossa銀染色法試劑： 1．2%硝酸銀水溶液：硝酸銀2g蒸餾水加至100 ml。培養(yǎng)皿用PBS沖2次，95%乙醇固定10分鐘，蒸餾水沖洗3次2. 2%硝酸銀內(nèi)置暗處1小時3. 蒸餾水沖洗3次，再流水沖洗10分鐘4. 還原1小時（硫代硫酸鈉5g，蒸餾水100ml）5. 5%硫代硫酸鈉1小時()洗滌2遍； %（也有1％）硝酸銀水溶液中10min，日光或紫外光曝曬10－45 min，蒸餾水洗滌； %次亞硫酸鈉（3%硫代硫酸鈉沖洗）溶液中，蒸餾水洗； %中性紅襯染1 min，水洗，晾干，酒精系列脫水（常規(guī)順序：80％－90％－95％－100％1－100％2），二甲苯透明，中性樹膠封片。B 組以改進的方法染色: 4 %多聚甲醛固定標(biāo)本 ,5 %硫代硫酸鈉孵育 30min ,蒸餾水沖洗 ,然后用1 %硝酸銀溶液紫外線下染色 30min ,蒸餾水沖洗掉浮于細(xì)胞表面的黑色物質(zhì) ,繼續(xù)用 5 %硫代硫酸鈉染色 2min ,
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