20xx年醫(yī)學(xué)專(zhuān)題—干細(xì)胞成骨、成脂、成軟骨誘導(dǎo)分化及檢測(cè)(參考版)
2024-11-17 22:23本頁(yè)面
【正文】 油紅O配方油紅O1g,異丙醇100ml或70%酒精100 ml,將油紅O放入燒瓶于水浴中加溫溶解或放入溫箱中60℃30min,用前過(guò)濾,臨用時(shí)取油紅O10ml,蒸餾水10ml,兩者混合后立即變成鮮紅色液體,靜止30mi n后過(guò)濾使用.油紅O染色①固定于10%中性甲醛溶液內(nèi)1～2d.②蒸餾水洗冰凍切片1 0～20μm入蒸餾水.③用70～80%異丙醇或酒精稍洗或用蒸餾水稍洗.④入油紅O 染色15～25min.⑤入異丙醇或酒精或蒸餾水洗.⑥用蘇木素淡染細(xì)胞核,充分水洗,用甘油明膠或用PVP封固.內(nèi)容總結(jié)
（1）三個(gè)方向誘導(dǎo)分化
誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化
一、誘導(dǎo)方法
將細(xì)胞懸液置于 50 mL聚苯乙烯培養(yǎng)瓶(Nunclon)中培養(yǎng)
。誘導(dǎo)脂肪方向分化誘導(dǎo)分化細(xì)胞以每毫升 5 104 ,接種于培養(yǎng)皿中 ,細(xì)胞達(dá)到 80 %匯合后更換成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)液(L－DMEM 培養(yǎng)液 ,10 % FBS , 地塞米松 106mol/L , 胰島素10 mg/L , 3異丁基1甲基黃嘌呤（3isobutyl1methylxanthine，IBMX mmol/L ,吲哚美辛 ),對(duì)照組繼續(xù)加常規(guī)培養(yǎng)液 ,每 3 天換液一次。兔抗羊Ⅱ抗室溫 1 h, 磷酸鹽緩沖液洗 3 次,5 min/ 次。 體 積 分 數(shù) 的過(guò)氧化氫孵育 10 min, 磷酸 鹽 緩 沖 液洗 3 次, 5 min/ 次。茜素紅染色步驟棄培養(yǎng)基，培養(yǎng)皿用PBS沖洗2次，95% (也有90％)乙醇固定10－30min，蒸餾水沖洗3次 % （or %）茜素紅[茜素紅－TrisHcl(PH )]染色,37℃,30min ,用清水沖洗。配方二 茜素紅溶液（Ⅱ）取1克茜素紅，溶于100毫升95%酒精中，攪拌，然后跟900毫升1%氫氧化鉀溶液相混，即成深紫色的茜素紅染液?茜素紅(Fl
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