現(xiàn)代分子診斷技術-在線瀏覽
2024-10-28 20:26本頁面
【正文】 定 DNA診斷系統(tǒng) DNA指紋 遺傳性疾病的分子診斷技術,基因診斷,基因,蛋白質,性狀,生化診斷,基因診斷,臨床診斷,傳統(tǒng)的診斷程序 先要對病原物質進行培養(yǎng)，培養(yǎng)后再分析它的生理學特性 確定它到底是哪一類的病原物，是病毒、細菌，還是其他物質 實踐證明:比較有效,檢測到病原微生物相對比較特異 診斷成本高、速度慢、效率低 如砂眼衣原體、朊病毒,檢測寄生蟲感染的診斷方法的比較,現(xiàn)代分子診斷技術主要是指應用免疫學和分子生物學的方法對病原物質進行診斷檢測 一種有效的診斷方法應具備： 專一性（specificity）強，診斷只對某一種病原菌分子產(chǎn)生陽性反應 靈敏度(sensitivity)高 操作簡單(simplicity),基因診斷的特點,特異性高 檢測目標是基因，為原始的致病因素 靈敏度高 待測標本往往微量，目的基因只需pg水平 穩(wěn)定性高 基因的化學組成為核酸，比蛋白質穩(wěn)定，且不需處于活性狀態(tài) 診斷范圍廣，適應性強 確切的診斷，也能確定與疾病的關聯(lián)狀態(tài) 臨床應用前景好,基因診斷優(yōu)點,從基因水平徹底揭示疾病的病因及發(fā)病機制 顯著提早產(chǎn)前診斷的時間 無需對組織、器官或細胞進行選擇 快捷準確、安全,基因診斷常用的技術,核酸分子雜交 PCR（聚合酶鏈式反應） 限制性酶切分析 SSCP（單鏈構象多態(tài)性分析） DNA 測序 DNA 芯片技術,DNA Southern blot, FISH,PCR, Sequencing, micoarray, restriction analysis, RFLP，SSCP RNA Northern blot, RTPCR, micoarrays Protein Western blot, Immunohistochemistry, microarray,Southern blot,N,N T T N T T,FISH,PCR技術,DNA測序,指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接將大量探針以顯微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后與標記的樣品雜交，通過對雜交的檢測分析，得出樣品的遺傳信息（基因序列及表達的信息）,由于在制備過程中運用了計算機芯片的制備技術如顯微光蝕刻、顯微打印等，且常用硅芯片作為固相支持物，所以稱為DNA芯片技術,DNA芯片技術的概念,DNA芯片技術原理,大規(guī)模集成的固相雜交 基本原理是核酸分子雜交，即依據(jù)DNA雙鏈堿基互補配對、變性和復性的原理,以大量已知序列的寡核苷酸、cDNA或基因片段作探針，檢測樣品中哪些核酸序列與其互補，然后通過定性、定量分析得出待測樣品的基因序列及表達的信息,DNA芯片技術流程,Biological Sample,Analyze data,Scanner,microarray,“Hybridize”,arrayer,Microarray fabrication Sample preparation Molecular hybridization Detection and analysis,基因診斷的原理,利用分子生物學和分子遺傳學的技術，從DNA或RNA水平檢測、分析基因的存在、變異和表達狀態(tài)，從而對疾病做出診斷的方法 策略 檢測已知的能產(chǎn)生某種特定功能蛋白的基因 檢測與某種遺傳標志連鎖的的致病基因 檢測表型克隆基因,基因治療的機理,基因置換：正?；蛉〈虏』?基因修正：糾正致病基因的突變堿基序列 基因修飾：目的基因表達產(chǎn)物補償致病基因的功能 基因抑制：外源基因干擾、抑制有害基因的表達 基因封閉：封閉特定基因的表達 “自殺基因”的應用 免疫基因的治療 耐藥基因的治療,美國醫(yī)學家WF這個4歲女孩由于遺傳基因有缺陷，自身不能生產(chǎn)ADA，先天性免疫功能不全，只能生活在無菌的隔離帳里。在以后的10個月內她又接受了7次這樣的治療，同時也接受酶治療。,謝德爾，1999,分子診斷,利用PCR技術或PCR與分子雜交標記相結合，可以快速準確地檢測出病原性物質。 DNA與RNA雜交: A=U、 G≡C 。如果把核心序列串聯(lián)起來作為分子探針與不同個體的DNA進行分子雜交，就會出現(xiàn)各自特有的雜交圖譜?！碑斎?，真假母親也就水落石出了。 三國時代（公園220—280年）謝承著《會稽先賢傳》中的《以弟血滴兄骨》可能是記錄此法的最早的史料：陳業(yè)的哥哥因海難不幸殞命，當時一同遇難的有五六十人，并且尸體都已嚴重腐敗而無法辨認死者的身份。陳業(yè)就這樣確認其兄的尸骨。明末清初的檢驗書籍中都有相同的記載：“親子兄弟或自幼分離，欲相認識。命各刺出血，滴一器內，真則共凝為一，否則不凝也。,九年后，他被診斷為患有“膀朧癌”，兩年后死于該病。就是這個基因的微小變化，使其抑癌功能受損，導致九年后細胞癌變的發(fā)生。她帶有血友病基因，并將其傳給了她的兒女。血友病在女性一般表現(xiàn)為隱性遺傳，較少發(fā)病，但會傳給后代；在男性則表現(xiàn)為顯性遺傳，顯示出病癥。,一、PCR－酶解鑒定,正?；驗镃CTGAGG 鐮刀形貧血病患者的基因為CCTGTGG 限制性內切酶CvnI的識別序列為CC TNAGG,方法: 在CvnI位點的兩點設計兩個引物。 擴增的DNA用CvnI酶處理，酶解產(chǎn)物用凝膠電泳分開，經(jīng)溴化乙錠染色后就可在紫外燈下檢查DNA帶型。,三、PCRELISA檢測,在PCR反應體系中加入生物素標記的dUTP和其他3種dNTP 3’端經(jīng)DIG標記特異性探針 包被有抗生物素抗體的酶標板 抗堿性磷酸酶（AP）－DIG抗體 如果加入的DIG標記的探針可與擴增片段結合，則酶標板上有顏色反應發(fā)生，否則不會有顏色的變化,四、PCRDGGE法,原理 變性梯度凝膠電泳（DGGE）是一種根據(jù)DNA片段的熔解性質而使之分離的凝膠系統(tǒng) Tm值主要取決于DNA分子中GC含量的多少 DGGE將凝膠設置在
環(huán)評公示相關推薦
鄂ICP備17016276號-1