【正文】 3 4 5 6 注：劑量對數(shù)組距 =，劑量組間的等比級數(shù) = 第十七 頁 ，共八十八 頁 ?！?。 公式： lgLD50＝ Xk－ i(?p－ ) pq S＝ i ? n LD50的 95%可信限 ＝ (LD50177。 i組間對數(shù)劑量差值； Xk最大劑量的對數(shù)值； q存活率〔 q=1p〕； ∑p 各劑量組死亡率總和； n每組動物數(shù)。應用實例公式： lgLD50 =() ==~LD50及其 95% 可信限為 mg/kg〕第二十 頁 ，共八十八 頁 。 霍恩 (Horn)法查表 例如：全活例如：全活 全死劑量范圍為全死劑量范圍為 2001500mg/kg 劑量組選擇劑量組選擇 215,464,1000,2150 (t=2)第二十二 頁 ，共八十八 頁 。(二〕急性毒性替代法 “3R 〞原那么要求： 替代〔 Replacement〕 減少〔 Reduction〕 優(yōu)化〔 Refinement〕 常見的替代法有： 〔 limit test〕 〔 fixed dose method〕 〔 acute toxic class method〕 〔 up and down procedure〕 序貫法第二十四 頁 ，共八十八 頁 。受試物急性毒性很低時可采用此法。 方法要求：〔實際上是一種非死亡毒性評價〕 ① 固定劑量： 50、 300、 2024mg/kg； ② 預試驗：用單性別 1只動物循序進行，接受試驗前后的 2只動物間隔 24小時。 ⑤ 假設正式試驗 5mg/kg出現(xiàn)中毒表現(xiàn)或死亡，試驗終止，可定為高度 (T+)。第二十六 頁 ，共八十八 頁 。 注：按全球化學品分類及標簽協(xié)調(diào)制度〔 GHS〕標準評價定級第二十八 頁 ，共八十八 頁 。值。天。適用于毒性反響快速的化學藥物。序貫法實驗計算公式：式中： n使用動物總數(shù)； x每個劑量組的劑量； f每個劑量組動物數(shù)。應用實例第三十一 頁 ，共八十八 頁 。第三十二 頁 ，共八十八 頁 。 國內(nèi)健康相關產(chǎn)品毒性分級國內(nèi)健康相關產(chǎn)品毒性分級第三十四 頁 ，共八十八 頁 。 第三十六 頁 ，共八十八 頁 。GHS化學品急性毒性分級標準化學品急性毒性分級標準〔〔 2024〕〕 ≥≥ 第第 4級上限值級上限值注： GHS全球化學品分類及標簽協(xié)調(diào)制度 〔 Globally Harmonized System of Classification and Labeling of Chemicals 〕第三十八 頁 ，共八十八 頁 。前者的毒性小于后者。第四十 頁 ，共八十八 頁 。 LD50 177。 即 ～ 。 概念： 局部毒性作用又稱局部損害作用，是指生物機體暴露于化學物后，在其接觸或暴露部位造成的局部毒性損害作用，包括腐蝕性、刺激性與過敏性作用。第三節(jié) 一、眼睛刺激試驗 眼刺激性〔 eye irritation〕指眼球外表接觸受試物后所產(chǎn)生的可逆性炎性變化。 試驗方法： Draize 法〔 1944年〕 常用動物：白兔第四十三 頁 ，共八十八 頁 。法：在規(guī)定的時間內(nèi)觀察對兔眼的刺激和腐蝕作用程度，并按規(guī)定的分級標準進行評分。實驗期限：一般為 7天，必要時延長至 21天 (觀察期能足已評價刺激是否存在可逆性 )?！蚕囱坌Ч囼灐车谒氖?頁 ，共八十八 頁 。Draize 法眼損傷程度評分表：第四十六 頁 ，共八十八 頁 。第四十八 頁 ，共八十八 頁 。眼睛刺沖動物試驗替代法：眼睛刺沖動物試驗替代法： 利用尿囊絨膜與結膜結構相似性。 用分光光度計法測定溶血程度〔用分光光度計法測定溶血程度〔 Hb從從 RBC漏出〕。 〔用酶標儀測定〕血紅蛋白變性試驗〔用酶標儀測定〕 因角膜透明度降低是化學物破壞了蛋白質構象。 兔眼角膜上皮細胞兔眼角膜上皮細胞 SIRC模型，觀察細胞增殖、膜完整性等〔模型，觀察細胞增殖、膜完整性等〔中性紅不能沉積在死細胞內(nèi)，用酶標儀測定〕中性紅不能沉積在死細胞內(nèi)，用酶標儀測定〕 受試物受試物 +立體人類皮膚立體人類皮膚 +MTT，用酶標儀測定提取液中的，用酶標儀測定提取液中的 MTT吸吸光度〔光度〔 MTT不能沉積在死細胞內(nèi)〕不能沉積在死細胞內(nèi)〕第五十 頁 ，共八十八 頁 。 皮膚腐蝕性 (dermal corrosion〕指皮膚接觸或涂敷受試物后，引起局部的不可逆性組織損傷 。 試驗方法： Draize 法〔 1944年〕 常用動物：家兔或豚鼠 第五十一 頁 ，共八十八 頁 。 傷口消毒藥物一般都需要做破損皮膚刺激試驗。皮膚刺激試驗〔 Draize 法〕： 〔自身對照原那么〕 試驗方法： 將受試物一次或屢次涂敷于受試動物背部一側皮膚上 ()，涂敷持續(xù)時間一般為 4h，以生理鹽水處理另一側背部皮膚作自身對照。 實驗觀察期：一般為 14天。皮膚刺激試驗結果的影響因素：皮膚刺激試驗結果的影響因素： 〔皮膚受損程度〕；皮膚的完整性〔皮膚受損程度〕； ；固態(tài)受試物的物理狀態(tài)與溶解度； ；受試動物年齡與性別； 〔存在判斷差異〕等。無需做皮膚刺激試驗條件：無需做皮膚刺激試驗條件： ① 受試物為強酸或強堿類腐蝕性物質〔受試物為強酸或強堿類腐蝕性物質〔 pH≤2 或或 ≥ 〕〕 ② 受試物有很強的經(jīng)皮吸收毒性，經(jīng)皮受試物有很強的經(jīng)皮吸收毒性，經(jīng)皮 LD50小于小于 200 mg/kg體重；體重； ③ 急性經(jīng)皮毒性試驗中，受試物劑量達急性經(jīng)皮毒性試驗中，受試物劑量達 2024mg/kg體重仍未體重仍未出現(xiàn)皮膚刺激性作用。 第五十四 頁 ，共八十八 頁 。Draize第五十七 頁 ，共八十八 頁 。三、皮膚變態(tài)反響試驗 皮膚變態(tài)反響〔 skin sensitization〕 是皮膚對化學物產(chǎn)生的免疫源性皮膚反響，又稱過敏性接觸性皮炎或皮膚致敏反響。 試驗目的：確定重復接觸化學物是否可引起變態(tài)反響及其反響程度。 實驗設計：需做陽性對照和陰性對照，陰性對照動物僅給予受試物激發(fā)接觸。 致敏機制： 化學物在穿透皮膚的過程中，可作為半抗原與體內(nèi)某些特定的載體蛋白共價結合，形成完全抗原，誘導抗體形成，產(chǎn)生免疫記憶，如再次接觸較低濃度的相同或結構相似的化學物，即能引發(fā)皮膚變態(tài)反響。 ③ 局部淋巴結試驗〔 local lymph node assay， LLNA〕 實驗記錄： 記錄皮膚具有紅斑和水腫〔過敏反響〕的動物