dna重組技術(shù)的基本工具(1)-在線瀏覽
2025-02-09 02:15本頁(yè)面
【正文】 酯鍵 DNA連接酶 DNA聚合酶 連接 DNA鏈 雙鏈 單鏈 連接部位 在兩 DNA片段之間形成磷酸二酯鍵 將單個(gè)核苷酸加到已存在的核酸片段的末端上，形成 磷酸二酯鍵 模板 不需要 需要 DNA連接酶與 DNA聚合酶是同一物質(zhì)嗎 ? 聚焦二： “分子縫合針” DNA連接酶 DNA復(fù)制 要讓一個(gè)從甲生物細(xì)胞內(nèi)取出來的基因在乙生物體內(nèi)進(jìn)行表達(dá)，首先得將這個(gè)基因送到乙生物的細(xì)胞內(nèi)去。 基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體 — “分子運(yùn)輸車” ⒈運(yùn) 載體需要的條件： ⑴有 1~多個(gè)限制酶切點(diǎn) ⑵對(duì)受體細(xì)胞無害 ⑶導(dǎo)入基因能在受體細(xì)胞中復(fù)制、表達(dá) ⑷有某些標(biāo)記基因，便于篩選 ⒉常用運(yùn)載體： ⑴細(xì)菌的質(zhì)粒 ⑵ λ 噬菌體的衍生物或某些動(dòng)植物病毒 ⑶假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制或不能轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)基因生物能有預(yù)想的效果嗎？ ⑴作為分子運(yùn)輸車 ——載體，如果沒有切割位點(diǎn)將會(huì)怎樣？ ⑵霍亂菌的質(zhì)粒多個(gè)限制酶切點(diǎn)，你會(huì)用它來做分子運(yùn)輸車嗎？ ⑷目的基因有沒有進(jìn)入受體細(xì)胞，如何去發(fā)現(xiàn)？ 常用的載體：質(zhì)粒 能復(fù)制并帶著插入的目的基因一起復(fù)制 有切割位點(diǎn) 有標(biāo)記基因的存在，可用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基鑒別 限制性核酸內(nèi)切酶 （分子手術(shù)刀 ) 識(shí)別雙鏈 DNA分子中 特定 核苷酸序列，并且使每條鏈中 特定部位 的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。 EcoliΙ 連接酶 將切下來的 DNA片段拼接成新的 DNA片段。 有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)。 質(zhì)粒、動(dòng)植物病毒和 λ 噬菌體的衍生物 。 …CTGCA …G (1) GC… CG… …G …CTTAA G… ACGTC… …GC … CG GT… CA… AATTC… G… (2) (3) (5) (6) (7) (8) …CTGCA …G G… ACGTC… (1) (5) …AC …TG …AC …TG GT… CA… (2) (7) GC… CG… …GC … CG (6) (3) （ 4）
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