現(xiàn)代生物科技專題講義-在線瀏覽
2025-02-06 02:10本頁面
【正文】 據(jù)我們剛剛掌握的知識，你能推測這其中的原因嗎？ 原核生物細(xì)胞中的限制酶會將外源 DNA切割掉，使之失效，以保證自身的安全，但是不會切割自身的DNA，這是原核生物在長期進(jìn)化過程中形成的一套防御機(jī)制。小飛守角制作 大腸桿菌的一種限制酶（ EcoRⅠ）能識別 GAATTC序列，并在 G和A之間切開形成黏性末端。小飛守角制作G A A T T C C T T A A G 中軸線C T T A A G A A T T C G C C C G G G G G G C C C C C C G G G G G G C C C 黏性末端平末端大腸桿菌的一種限制酶（ EcoRⅠ )能識別GAATTC序列， SmaⅠ 識別 CCCGGG序列:小飛守角制作切割 DNA分子時產(chǎn)生的兩種不同末端小飛守角制作 限制酶切割 DNA后形成的末端 —— 黏性末端、平末端是如何形成的？思考：小飛守角制作? 什么叫黏性末端？ 當(dāng)限制酶 從識別序列的中心軸線兩側(cè)切開時， 被限制酶切開的 DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個 伸出的核苷酸 ，他們之間正好 互補(bǔ)配對 ，這樣的切口叫 黏性末端 。小飛守角制作Ｅ coRI限制酶 SmaI限制酶識別序列 －ＣＣＣＧＧＧ－切割位點(diǎn) Ｇ和Ａ之間 Ｃ和Ｇ之間未端類型 平末端黏性末端－ＣＴＴＡＡＧ－ －ＧＧＧＣＣＣ－－ＧＡＡＴＴＣ－小飛守角制作切割后的形式： 2種末端注： 限制酶是一大類酶，不是一種酶。黏性末端平末端小飛守角制作? 要想獲得某個特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個切口？可產(chǎn)生幾個黏性末端？要切兩個切口，產(chǎn)生四個黏性末端。小飛守角制作思考與探究思考與探究為什么限制酶不剪切細(xì)菌本身的為什么限制酶不剪切細(xì)菌本身的 DNA？？ 通過長期的進(jìn)化，細(xì)菌中含有某種限制酶的細(xì)胞，其 DNA分子中或者 不具備 這種限制酶的 識別切割序列 ，或者通過甲基化酶 將甲基轉(zhuǎn)移 到所 識別序列 的堿基上，使 限制酶不能將其切開 。 小飛守角制作限制性核酸內(nèi)切酶 ——“ 分子手術(shù)刀”小飛守角制作小飛守角制作小飛守角制作 T磷酸二酯鍵1234512345 A小飛守角制作磷酸二酯鍵即脫氧核糖、磷酸之間的連接A TGGCA TCTTC GAA小飛守角制作演示小飛守角制作重播小飛守角制作DNA連接酶 ── “分子縫合針 ”切斷的 DNA片段要與受體細(xì)胞的 DNA連接，你覺得可以用什么酶？DNA聚合酶和 DNA連接酶有何相同點(diǎn)和不同點(diǎn)？小飛守角制作二、 DNA連接酶 ——“ 分子縫合針 ”作用： 將雙鏈的 DNA片段連接起來（連接兩核苷酸之間的磷酸二酯鍵）小飛守角制作G A A T T C C T T A A G 即脫氧核糖、磷酸基之間的連接 GP AP小飛守角制作DNA聚合酶小飛守角制作DNA聚合酶和 DNA連接酶的異同點(diǎn)⑴ DNA聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的核酸片段 的末端上，形成磷酸二酯鍵；而 DNA連接酶是在兩 個 DNA片段之間形成磷酸二酯鍵，不是在單個核苷 酸與 DNA片段之間形成磷酸二酯鍵。因此 DNA連接酶不需要模板。小飛守角制作DNA連接酶和 DNA聚合酶的異同? 基因工程中所用的連接酶有兩種：從大腸桿菌中分離得到的 E這兩種酶的催化反應(yīng)基本相同，都是連接雙鏈 DNA的缺口，而不能連接單鏈 DNA。? DNA聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的核苷酸片段的3’末端的羥基上，形成磷酸二酯鍵；而連接酶是在兩個DNA片段之間形成磷酸二酯鍵。?
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