【正文】 使用后將其高壓滅菌或按感染性廢物處理。 或者采用一次性滅菌棉簽 。 最好使用不需要再進(jìn)行消毒的一次性接種環(huán) 。 ? 4． 準(zhǔn)備高壓滅菌和／或處理的廢棄樣品和培養(yǎng)物應(yīng)當(dāng)放置在防漏的容器內(nèi) ， 如實(shí)驗(yàn)室廢物袋 。 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 生物安全柜的使用 ? 1． 應(yīng)參考國家標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)文獻(xiàn) ， 介紹生物安全柜的使用方法和局限性 。 應(yīng)明確注明當(dāng)出現(xiàn)溢出 、 破損或不良操作時(shí) ， 安全柜就不再能保護(hù)操作者 。 ? 3． 生物安全柜在使用中不能打開玻璃觀察擋板 。 樣品在放人安全柜內(nèi)的工作區(qū)前需要清除表面污染 。 允許使用微型電加熱器 ， 但最好使用一次性無菌接種環(huán) 。 ? 7． 盡量減少操作者身后的人員流動(dòng) 。 ? 9． 實(shí)驗(yàn)記錄 、 移液管以及其他物品不能夠阻礙前面的空氣格柵 ， 因?yàn)檫@將干擾氣體流動(dòng) ， 引起物品的潛在污染和操作者的暴露 。 ? 11．工作開始前和結(jié)束后，安全柜的風(fēng)機(jī)應(yīng)至少運(yùn)行 5分鐘。 盡可能用塑料制品代替玻璃制品 。 ? 3． 以下兩點(diǎn)可以減少針刺事故： ? (a)注射時(shí)特別小心 ? (b)減少使用注射器和針頭；許多操作可用帶 ? 有鈍頭導(dǎo)管的注射器替代 。 ? 4． 不要重新給用過的針頭戴護(hù)套 。 ? 5． 應(yīng)當(dāng)用塑料吸管代替玻璃吸管 。 ? 2． 操作時(shí)應(yīng)戴手套以及眼睛和黏膜的保護(hù)裝置 。 血液和血清應(yīng)當(dāng)小心吸取 ， 而不能傾倒 。 ? 4． 移液管使用后應(yīng)完全浸入次氯酸鹽或其他適當(dāng)?shù)南疽褐?。 ? 5．帶有血凝塊等的廢棄樣品管，在加蓋后應(yīng)當(dāng)放在適當(dāng)?shù)姆缆┤萜鲀?nèi)高壓滅菌和／或焚燒。 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 離心機(jī)的使用 ? 1． 在使用實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)時(shí) ， 儀器良好的機(jī)械性能是保障微生物安全的前提條件 。 ? 3． 離心機(jī)放置的高度應(yīng)當(dāng)使低于平均身高的工作人員也能夠看到離心機(jī)腔體內(nèi)部 ， 以正確放置十字軸和離心管套 。 ? 5． 用于離心的試管和樣品容器應(yīng)當(dāng)始終牢固蓋緊(最好使用螺旋蓋 )。 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 離心機(jī)的使用 ? 7． 離心管套和十字軸應(yīng)按重量配對(duì) ， 并在裝載離心管后正確平衡 。 ? 9． 空離心管套應(yīng)當(dāng)用蒸餾水或乙醇 (異丙醇 ， 70％ )平衡 。 ? 10． 對(duì)于危險(xiǎn)度 3級(jí)和 4級(jí)的微生物 ， 必須使用可封口的離心離心管套 (安全杯 )。 ? 12． 應(yīng)當(dāng)每天檢查離心機(jī)內(nèi)轉(zhuǎn)子部位的腔壁是否被沾染或弄臟 。 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 離心機(jī)的使用 ? 13． 應(yīng)當(dāng)每天檢查離心轉(zhuǎn)子和離心管套是否有腐蝕或細(xì)微裂痕 。 ? 15． 使用后離心管套應(yīng)當(dāng)?shù)怪么娣攀蛊胶庖毫鞲?。 如果將離心機(jī)放置在傳統(tǒng)的前開式的 I級(jí)或 Ⅱ 級(jí)生物安全柜內(nèi) ， 這些粒子由于運(yùn)動(dòng)過快而不能被安全柜內(nèi)的氣流截留 。但是 ， 良好的離心操作技術(shù)和牢固加蓋的離心管可以提供足夠的保護(hù) ， 以防止感染性氣溶膠和可擴(kuò)散粒子的產(chǎn)生 。 使用實(shí)驗(yàn)室專用攪拌器和消化器 (stomacher)更為安全 。 蓋子應(yīng)能封蓋嚴(yán)密 ， 襯墊也應(yīng)處于正常狀態(tài) 。 由于玻璃可能破碎而釋放感染性物質(zhì)并傷害操作者 ， 建議使用塑料容器 ， 尤其是聚四氟乙烯 (po1ytetranuoroe thylene， PTFE)容器 。 可能的話 ， 這些儀器可在生物安全柜內(nèi)覆蓋塑料罩進(jìn)行操作 。 ? 6． 應(yīng)對(duì)使用超聲處理器的人員提供聽力保護(hù) 。 塑料 (聚四氟乙烯 )研磨器更加安全 。 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 冰箱與冷柜的維護(hù)和使用 ? 1． 冰箱 、 低溫冷柜和干冰柜應(yīng)當(dāng)定期除霜和清潔 ，應(yīng)清理出所有在儲(chǔ)存過程中破碎的安瓿和試管等物品 。 ? 2． 儲(chǔ)存在冰箱內(nèi)的所有容器應(yīng)當(dāng)清楚地標(biāo)明內(nèi)裝物品的學(xué)名 、 儲(chǔ)存日期和儲(chǔ)存者的姓名 。 ? 3． 應(yīng)當(dāng)保存一份凍存物品的清單 。 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 裝有凍干感染性物質(zhì)安瓿的開啟 ? 當(dāng)打開裝有凍干物的安瓿時(shí)必須小心 ， 因?yàn)槠鋬?nèi)部可能處于負(fù)壓 ， 瞬間進(jìn)入的空氣可能使一些物質(zhì)擴(kuò)散進(jìn)入空氣 。 ? 2． 如果管內(nèi)有棉花或纖維塞 ， 可以在管上靠近棉花或纖維塞的中部銼一痕跡 。 ? 4． 將頂部小心移去并按污染物處理 。 ? 6．緩慢向安瓿中加入液體來重懸凍干物，避免出現(xiàn)泡沫。 如果需要低溫保存 ， 安瓿應(yīng)當(dāng)儲(chǔ)存在液氮上面的氣相中 。 當(dāng)從冷凍儲(chǔ)存器中取出安瓿時(shí) ， 實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)當(dāng)進(jìn)行眼睛和手的防護(hù) 。 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 樣品的收集 、 標(biāo)記和運(yùn)輸 ? 1． 始終遵循常規(guī)預(yù)防措施；所有操作均要戴手套 ? 2． 應(yīng)當(dāng)由受過培訓(xùn)的人員來采集病人或動(dòng)物的血樣 。 用完后自動(dòng)廢棄針頭 。 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 玻璃器皿和 “ 銳器 ” ? 1． 盡可能用塑料制品代替玻璃制品 。 ? 2． 不能將皮下注射針作為移液管使用 。 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 用于顯微觀察的薄膜和涂片 ? 用于顯微觀察的血液 、 唾液和糞便樣品在固定和染色時(shí) ， 并不必殺死涂片上的所有微生物和病毒 。 ? 自動(dòng)化儀器 (超聲處理器 、 渦旋混合器 ) ? 1． 為了避免液滴和氣溶膠的擴(kuò)散 ， 這些儀器應(yīng)采用封閉型的 。 ? 3，在每一步完成后應(yīng)根據(jù)操作指南對(duì)儀器進(jìn)行消毒。 小塊樣品 ， 如針頭活檢樣品 ， 能夠在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)固定和消毒 ， 但是較大樣品則可能需要幾天時(shí)間 。如果必須進(jìn)行冰凍切片，應(yīng)當(dāng)罩住冰凍機(jī)，操作者要戴安全防護(hù)罩 (面具 )。 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 生物安全實(shí)驗(yàn)室消毒與滅活 ? 消毒和滅菌的基本常識(shí)對(duì)于實(shí)驗(yàn)室生物安全是至關(guān)重要的。因此，有必要利用已知的普通信息來確立更具體的和標(biāo)準(zhǔn)化的程序，以滿足某些特殊實(shí)驗(yàn)室中各種不同生物危害水平的需求。 清除表面污染時(shí)可以使用次氯酸鈉 (Na0C1)溶液；含有 1％ 有效氯的溶液適于普通的環(huán)境衛(wèi)生設(shè)備 ， 但是當(dāng)處理高危環(huán)境時(shí) ， 建議使用高濃度 (5g／ L)溶液 ?？梢酝ㄟ^加熱多聚甲醛或煮沸福爾馬林所產(chǎn)生的甲醛蒸氣熏蒸來清除房間和儀器的污染 。 前 ， 房間的所有開口 (如門窗等 )都應(yīng)用密封帶或類似物加以密封 。 熏蒸后 ， 該區(qū)域必須徹底通風(fēng)后才能允許人員進(jìn)入 。 可 以采用氣態(tài)的碳酸氫銨來中和甲醛 。 ? 注：甲醛是一種危險(xiǎn)和有刺激性的氣體，并懷疑有致癌性。操作時(shí)應(yīng)當(dāng)采用“雙人”制。 然后在生物安全柜內(nèi)放置第二個(gè)放有比多聚甲醛多 10 ％的碳酸氫銨的加熱板或盤 。 如果相對(duì)濕度低于 70 ％ ， 在使用強(qiáng)力膠帶[如 “ 管道密封膠帶 ” (ducttape)]密封前部封閉板前 ， 還要在安全柜內(nèi)部放置一個(gè)開口的盛有熱水的容器 。 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 打開多聚甲醛盤的加熱開關(guān)， 1小時(shí)后或多聚甲醛完全蒸發(fā)后關(guān)閉。移去第二個(gè)盤子的蓋后打開加熱開關(guān)，讓碳酸氫銨揮發(fā)。移去前封閉板 (或塑料布 )后就可以使用生物安全柜了。 但是這并不能代替實(shí)驗(yàn)室人員需要經(jīng)常地 、 徹底地洗手 。 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 大多數(shù)情況下 ， 用普通的肥皂和水徹底沖洗對(duì)于清除手部污染就足夠了 。 手要完全抹上肥皂 ， 搓洗至少 10秒鐘 ， 用干凈水沖洗后再用干凈的紙巾或毛巾擦干(如果有條件 ， 也推薦使用暖風(fēng)干手器 )。 如果沒有安裝 ， 應(yīng)使用紙巾或毛巾關(guān)上水龍頭以防止再度污染洗凈的手 ?！?干 ” 熱沒有腐蝕性 ， 可用來處理實(shí)驗(yàn)器材中許多可耐受 160~C或更高溫度 2～ 4小時(shí)的物品 。 高壓滅菌的濕熱法則最為有效 。 ? 滅菌后的物品必須小心操作并保存，以保證在使用之前不再被污染。 對(duì)于大多數(shù)目的 ， 下列組合可以確保正確裝載的高壓滅菌器的滅菌效果： ? —— 134℃ 、 3分鐘 —— 126℃ 、 10分鐘 ? —— 121℃ 、 15分鐘 —— 115℃ 、 25分鐘 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 高壓滅菌器的裝載 ? 為了利于蒸汽的滲透和空氣排出 ， 高壓滅菌物品應(yīng)松散包裝放置在滅菌器內(nèi) 。 通過高壓滅菌器內(nèi)的蒸汽 ， 由下而上置換空氣并經(jīng)排氣孔排出 。 此時(shí)記為滅菌開始時(shí)間 。 生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范 ? 高壓滅菌器使用注意事項(xiàng)下列規(guī)定能夠減小操作壓力容器時(shí)會(huì)發(fā)生的危害