第十三章酶類藥物-在線瀏覽
2025-01-30 16:09本頁(yè)面
【正文】 ⑧ （ 3）表面活性劑法 酶的純化 不同的酶，因性質(zhì)不同，其純化工藝可能有很大不同。 純化過(guò)程中的技術(shù)難點(diǎn)： （ 1）雜質(zhì)的除去 ① 調(diào) pH和加熱沉淀法 ② 蛋白質(zhì)表面變性法 ③ 選擇性變性法 ④ 降解或沉淀核苷酸法 ⑤ 利用結(jié)合底物保護(hù)法除去雜蛋白 （ 2）脫鹽 ① 透析 ② 凝膠過(guò)濾 （ 3）濃縮 ① 冷凍干燥法 ② 離子交換法 ③ 超濾法 ④ 凝膠吸水法 （ 4）酶的結(jié)晶 ① 酶的結(jié)晶方法 鹽析法、有機(jī)溶劑法、復(fù)合結(jié)晶法、透析平衡法、等電點(diǎn)法 ② 結(jié)晶條件的選擇 ? 酶液的純度 ? 酶的濃度 ? 溫度、時(shí)間、 pH、晶種、結(jié)晶器皿處理 （ 5）酶分離和純化中應(yīng)注意的問(wèn)題 ① 防止酶蛋白變性 ② 防止輔助因子流失 ③ 防止酶被蛋白水解酶降解 （三）微生物發(fā)酵法 高產(chǎn)菌株的選育 獲取優(yōu)良菌株有三種途徑： ? 從自然界分離篩選 ? 用物理或化學(xué)方法處理、誘變 ? 用基因重組與細(xì)胞融合技術(shù)，構(gòu)建性能優(yōu)良的工程菌。 （ 2）發(fā)酵的 pH：可通過(guò)培養(yǎng)基原始 pH或添加緩沖劑或通過(guò)調(diào)節(jié)通氣量等方法實(shí)現(xiàn)。 ② 攪拌能使氣泡打碎，增加氣液體接觸面積，加快氧的溶解速度；攪拌使液體形成湍流，延長(zhǎng)氣泡在培養(yǎng)液中的停留時(shí)間，提高空氣的利用率；攪拌可增加液體的湍流作用，有利于熱交換和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與菌體細(xì)胞的均勻接觸，同事稀釋細(xì)胞周?chē)x產(chǎn)物，有利于促進(jìn)細(xì)胞的新陳代謝。 ② 常用消泡劑：天然油類，醇類，脂肪酸，胺類，酰胺類，磷酸酯類，聚硅氧烷等。 ③ （ 5）添加誘導(dǎo)劑和抑制劑 第二節(jié) 重要酶類藥物的性質(zhì)及生產(chǎn)方法 一、胃蛋白酶 （一）組成與性質(zhì) ① 淡黃色粉末，具有肉類特殊的氣味及微酸味； ② 吸濕性強(qiáng)、易溶于水，水溶液呈酸性。難溶于乙醚、氯仿等有機(jī)溶劑。最適pH=。 ⑤ 胃蛋白酶能水解大多數(shù)天然蛋白質(zhì)底物，尤其對(duì)兩個(gè)相鄰芳香族氨基酸構(gòu)成的肽鍵最為敏感。 （二）生產(chǎn)工藝 工藝流程 工藝過(guò)程及控制要點(diǎn) ① 酸解，過(guò)濾 ② 脫脂，去雜質(zhì) ③ 濃縮，干燥 胃膜素和胃蛋白酶聯(lián)產(chǎn)工藝 ① 胃膜素也是從豬胃粘膜中提取的一種黏蛋白。 ② 聯(lián)產(chǎn)工藝：向分離胃膜素的母液中，邊攪拌邊加冷丙酮，至相對(duì)密度，既有淡黃色胃蛋白酶沉出，靜置過(guò)夜，去上清液，沉淀真空干燥，即得胃蛋白酶。人
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