蛋白質(zhì)組學(xué)ppt-在線瀏覽
2024-09-26 00:58本頁面
【正文】 FDA共同投資 數(shù)百萬 美元建立癌癥不同階段的蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫。 Celera公司投資上億美元獨自啟動了全面鑒定和分類匯總?cè)祟惤M織、細(xì)胞和體液中的蛋白質(zhì)及其異構(gòu)體，構(gòu)建新一代的蛋白質(zhì)表達(dá)數(shù)據(jù)庫的工作。 ? 科技部已將疾病蛋白質(zhì)組研究列入我國 “ 973”計劃項目和 “ 863”計劃項目 ； 國家自然科學(xué)基金委員會也將 “ 蛋白質(zhì)組研究 ” 列為重點項目。 第二節(jié) 蛋白質(zhì)組表達(dá)模式的研究方法 ? 研究蛋白質(zhì)組組成成分、差異和功能 主要研究目標(biāo) （一）蛋白質(zhì)組研究中的樣品制備 ?通?？刹捎眉?xì)胞或組織中的全蛋白質(zhì)組分進行蛋白質(zhì)組分析。 樣品預(yù)分級的主要方法 ? 蛋白質(zhì)溶解性：可溶性蛋白、非溶性蛋白等 ? 蛋白質(zhì)定位：膜蛋白、核蛋白等 ? 蛋白質(zhì)細(xì)胞器定位：線粒體、高爾基體、葉綠體等 樣品預(yù)分級主要作用在于提高低豐度蛋白質(zhì)的上樣量和檢測靈敏度 。 激光捕獲顯微切割 (laser capture microdissection， LCM) 可直接在顯微鏡下從組織切片中精確分離特定的細(xì)胞或細(xì)胞群。 特 點 ? 可分離 10～ 100 kD分子量的蛋白質(zhì) ? 高靈敏度和高分辨率 ? 便于計算機進行圖像分析處理 ? 與質(zhì)譜分析匹配 2DE技術(shù)的缺點 極酸 、 極堿性蛋白質(zhì) ， 疏水性蛋白質(zhì) ， 極大蛋白質(zhì) 、 極小蛋白質(zhì)以及低豐度蛋白質(zhì)用此種技術(shù)難于有效分離 。 新型非凝膠技術(shù) 液相色譜法 liquid chromatography， LC 毛細(xì)管電泳 capillary electrophoresis， CE （三）常見蛋白質(zhì)顯色技術(shù) 考馬斯亮藍(lán)染色 常見顯色方法比較 考染和 銀染的比較 有機染料和銀染 ?考染靈敏度為 30~100ng，線性范圍是 20倍；銀染的線性范圍是 40倍，靈敏度是考染的 100倍。 ?胺基黑常用于轉(zhuǎn)印至聚偏二氟乙烯（ PVDF）和 /或硝酸纖維素膜上的蛋白質(zhì)的染色。 ?這兩種染色技術(shù)都可減少膠內(nèi)蛋白質(zhì)產(chǎn)量。 ? 結(jié)果表現(xiàn)為膠面著色而蛋白質(zhì)點透明 。 ? 它主要適用于蛋白質(zhì)顯色 、 完整蛋白質(zhì)的膠上被動提取以及質(zhì)譜分析 。 膠體擴散染料 ?主要用于高靈敏度檢出電轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素和PVDF膜上的蛋白質(zhì)，不用于膠內(nèi)染色。 ?這種技術(shù)主要包括印度墨水染料、膠體金屬染料等。 后者最為常用 ， 其典型代表是已經(jīng)商品化的 SYPRO Red、 Orange、 Ruby等熒光染料 。 染色后的凝膠用標(biāo)準(zhǔn)的實驗室 300nm紫外透射儀進行照像保存 ， 其線性范圍為 3個數(shù)量級 。 ? 在 Tris/甘氨酸轉(zhuǎn)印緩沖液中染色后 ， 蛋白質(zhì)可被轉(zhuǎn)印至膜上并進行免疫染色或 Edman測序來鑒定蛋白質(zhì) 。 它們不包含戊二醛 、 甲醛或 Tween20等 ，很容易和集成化蛋白質(zhì)組學(xué)平臺 （ 包括自動化凝膠染色儀 、 圖像分析工作站 、 機器人剪切儀器 、 蛋白質(zhì)酶解工作站和質(zhì)譜儀等 ） 相結(jié)合 。 （四）凝膠的圖像處理分析和膠內(nèi)酶切 ? 凝膠圖像的掃描： ? 圖像加工： ? 斑點檢測和定量： ? 凝膠配比： ? 數(shù)據(jù)分析： ? 數(shù)據(jù)呈遞和解釋： ? 2DE數(shù)據(jù)庫的建立： ? 目前有多種圖像分析軟件可用于膠的圖像分析 : MelanieII (BioRad), PD Quest (BioRad), Phoretix 2D Full, (Amersham Pharmacia Biotech) ImageMaster 2d Platinum ? 這些軟件可以完成蛋白質(zhì)點的識別、匹配等，具有很強的分析功能，但其缺點是需要很多的圖像手工校對， 正常肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞的蛋白質(zhì)組雙向電泳差異表達(dá)譜 園點標(biāo)記的點為兩者的差異蛋白 數(shù)字號碼為蛋白質(zhì)點在參考膠中的索引號 蛋白質(zhì)的膠內(nèi)酶切 包括感興趣蛋白點的挖取、含蛋白質(zhì)凝膠的脫色、膠內(nèi)蛋白質(zhì)的酶切等過程 （五）質(zhì)譜分析 樣
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