乳酸菌實(shí)驗(yàn)報(bào)告-在線瀏覽
2024-09-13 08:38本頁(yè)面
【正文】 盞 牛角匙 pH試紙 血球計(jì)數(shù)板載玻片若干 恒溫培養(yǎng)箱 酸度計(jì) 擦鏡紙、吸水紙液體石蠟 顯微鏡 載玻片 玻片架、洗瓶、酒精燈火柴、滴管藥品：結(jié)晶紫，乙醇，草酸銨，碘，碘化鉀，番紅，KOH，NaCl，10％NaOH，2%氯化鐵。將兩液混勻即成。先將碘化鉀溶于少量蒸餾水中，然后加入碘使之完全溶解，再加入蒸餾水300ml即成。用時(shí)取10ml與80ml蒸餾水混勻即可?；旌螦和B液即成，按1：100稀釋即可。實(shí)驗(yàn)步驟：一、 培養(yǎng)基的培養(yǎng)1．稱量 用天平稱取蛋白胨1g, 牛肉膏1g , , , K2HPO4 , MnSO47H2O , 葡萄糖2g , 吐溫80 , CaCO3 1g放入燒杯。在瓊脂溶化的過(guò)程中，要控制火力的大小，并且不斷攪拌，以免培養(yǎng)基溢出或燒焦。3．調(diào)節(jié)pH 用滴管逐滴滴入1mol/L的NaOH溶液，邊滴邊攪拌，并隨時(shí)用精密的pH試紙測(cè)pH。注意：分裝時(shí)不要將培養(yǎng)基沾在管口和試管上段，以免引起污染。棉塞能防止雜菌污染，保證通氣良好。7．包扎 在管口外面包上一層牛皮紙，然后，用線繩扎好。2．將扎好的試管管口向上豎放在滅菌桶內(nèi)，再將滅菌桶放回滅菌鍋。3．加蓋，并將排氣軟管插入滅菌桶的排氣槽內(nèi)。4．設(shè)置滅菌溫度和時(shí)間。 6．滅菌所需時(shí)間到后，切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力將至0時(shí)，打開排氣閥，旋開蓋子，取出滅菌物品。四、菌懸液的配制先將酸奶樣品攪拌均勻，用無(wú)菌移液管吸取樣品10ml加入盛有90ml無(wú)菌水的三角瓶中，在旋渦均勻器上充分振搖20分鐘，使樣品均勻分散。然后再用一支1ml無(wú)菌吸管從此試管中吸取1ml注入另一盛有9ml無(wú)菌水的試管中，以此類推制成101010101010107各種稀釋度的菌懸液（要取7只15ml試管）。六、分離方法A．涂布平板法用三支1ml無(wú)菌吸管分別吸取10106和107的稀釋菌懸液各1ml，對(duì)號(hào)接種于與之對(duì)應(yīng)的3個(gè)無(wú)菌平板中，；盡快用無(wú)菌玻璃涂棒將菌液在平板上涂布均勻，平放與試驗(yàn)臺(tái)上20 Min；然后倒置于40℃恒溫箱中培養(yǎng)48小時(shí)。常用的劃線方法有。角，并將接種環(huán)上剩余物燒掉，待冷卻后通過(guò)第一次劃線部分做第二次平行劃線，再用同法通過(guò)第二次平行劃線部分做第三次平行劃線和通過(guò)第三次平行劃線部分作第四次平行劃線。（b）將挑取有樣品的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線。C．稀釋混合平板法 先分別吸取1ml的1010107稀釋度的菌懸液對(duì)號(hào)放入平板中，然后再倒入經(jīng)高溫消毒的并冷卻到50℃左右培養(yǎng)基中，邊倒入邊搖勻，使樣品中的微生物與培養(yǎng)基混合均勻，到冷凝成平板后，倒置于40℃恒溫箱中培養(yǎng)48小時(shí)。乳酸菌的菌落很小，大約1~3 mm，園形隆起，表面光滑或稍粗糙，呈乳白色、灰白色或暗黃色；在產(chǎn)酸菌落周圍還能產(chǎn)生CaCO3的溶解圈。 1) 用粗調(diào)節(jié)器提升鏡筒，將低倍物鏡旋到鏡筒下方，使鏡頭和載物臺(tái)距離約為5mm左右。3) 插上電源，開開電源開關(guān)。4) 開閉光圈，調(diào)節(jié)光線強(qiáng)弱，直至視野內(nèi)得到最均勻最適宜的光度為止。2) 然后以左眼看目鏡，另一眼睜開，一邊觀察視野，一邊扭動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使鏡頭緩慢地升高，至視野內(nèi)出現(xiàn)物像后，改用細(xì)調(diào)節(jié)器上下微微轉(zhuǎn)動(dòng)，仔細(xì)調(diào)節(jié)焦距和照明，直至視野內(nèi)獲得清晰的物像，選擇適宜部位，移到視野中心。 將高倍物鏡轉(zhuǎn)至鏡筒下方，調(diào)節(jié)光圈和聚光鏡，使光線亮度適中，再仔細(xì)反復(fù)轉(zhuǎn)動(dòng)微調(diào)螺旋，調(diào)節(jié)焦距，獲得清晰物象，再移動(dòng)推動(dòng)器選擇最滿意的鏡檢部位將染色標(biāo)本移至視野中央，待油鏡觀察。 在玻片標(biāo)本的鏡檢部位滴上一滴香柏油。 2) 左眼看目鏡，右手反時(shí)針方向微微轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)螺旋，下將載物臺(tái)，當(dāng)視野中有模糊地標(biāo)本物象時(shí)，改用細(xì)調(diào)螺旋，并移動(dòng)標(biāo)本直至標(biāo)本物象清晰為止。 4) 將各部分還原：下降載物臺(tái)最低處；轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器，使
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