制備色譜技術(shù)與操作及實驗經(jīng)驗-在線瀏覽
2024-08-23 21:48本頁面
【正文】 備色譜泵的廠商很多。（9）檢測器的選用一般的分析池的最大允許流速僅為5 mL/min 或者10mL/min。有時，采用旁路分離管，將少量流體導入分析池進行檢測，是一個不錯的辦法，但其濃度的誤差會相對較大。分析譜圖的峰形狀，對確定保留時間也有很大的參考價值。許多實驗室和工廠都采用了餾分收集器。在做分離的時候，也有一些分析色譜的時候，不能用到的技巧。（13）柱轉(zhuǎn)換技術(shù)通過接頭或者閥門，實現(xiàn)柱子的簡單延長，或者比較方便地實現(xiàn)對其中一個（或幾個）組分的精制。其理論和技術(shù)也日益完善。 迎頭色譜、超臨界流體色譜、逆流色譜環(huán)形色譜、氣相制備色譜等在科研和工業(yè)生產(chǎn)中也得到了應用。答： [vihig] [davvy]可以配一個PDA，另外加一個示差折光410，另外買幾根制備柱就可以了。另外為了保證餾分收集的準確性，最好配上Fraction II 餾分收集器。這樣可以過夜自動運行。2 問： 如何用制備色譜柱制備低含量的雜質(zhì)？制備色譜柱為Zorbax SBC18 *250mm及gilson餾分收集器，色譜儀為Agilent 1100或LC6A。如何設定色譜條件，如流量，進樣量，樣品的濃度，切割點的設置，是否要濃縮，要求將95%以上的主峰切除。）答： [vihig] [davvy] [云帆]1 制備用的流動相最好等級高一點，否則流動相中的雜質(zhì)會影響LCMS分析。制備柱的流速一般與直徑的平方成正比，*（）2, 大約為4ml/min。進樣樣品濃度越高越好。3 問： 我想用hplc分離一個簡單的多肽,我應該選用什么樣的流動相,還有他的梯度,還有選用什么樣的柱子答：[yingmw] [zyh]RPHPLC,C18柱可以制備很少量的肽。4 問：TFA在緩沖液中是不是只起到調(diào)節(jié)pH的作用呢？TFA的濃度越高基線的漂移越厲害，那是不是說它的濃度在緩沖液pH允許的情況下越低越好呢？答：[zyh] [skywalker]（1）TFA起到類似離子對的作用，%，過高的濃度，會使溶液偏酸，長時間使用可能影響柱子壽命。%TFA分離不好的話。但要注意用完后及時沖洗色譜柱。5 問：樣品如果溶解度太低如何上制備HPLC？ 答：[aaron] [云帆] [skywalker] [natura]（1） 了解一下樣品的性質(zhì),根據(jù)其酸堿性,極性等性質(zhì)，通過調(diào)節(jié)溶劑的pH值等, 以達到較好的溶解度（2）樣品可能某種晶型難溶，這樣可以加入其他溶劑（如丙酮等）以助溶。特別是DMSO，對一般的化合物溶解度都很好。而且DMSO的洗脫能力很弱，一般不會影響峰型。6 問：多肽的分離制備, 如何上量？如何增大分離度?答：[xia] [888wym]反相HPLC應當是很好的分離小肽方法，用CH3CN或CH3OH：H2O（95：5）做流動相，看保留如何，若無保留，建議改用其他色譜方法進行分離。我們先在分析柱（）上做一下實驗,找到最大的分離度,這一過程的難度是最大的,要不斷地改變流動相和固定相,然后再線性或非線性放大到制備,放大的倍數(shù)按分析柱的實驗結(jié)果。還可以考慮離子交換來分l離７ 再用丙酮回流二小時就可以用了。（2）整個系統(tǒng)的管路要更換更粗的，否則壓力太大,而且特別容易發(fā)生堵塞。（3）檢測器的
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