【正文】 或更換墊圈。若有堵塞情況可用異丙醇超聲波清洗；清洗不成功則需要更換。高效液相色譜日常簡(jiǎn)易保養(yǎng)及維護(hù)1)紫外燈的保養(yǎng)：在分析前、柱平衡得差不多時(shí)，打開(kāi)檢測(cè)器；在分析完成后，馬上關(guān)閉檢測(cè)器。5． UV)的保養(yǎng)：2)當(dāng)柱子和色譜儀聯(lián)結(jié)時(shí)，1)柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震動(dòng)；4．柱的保養(yǎng)：相對(duì)濕度《80％；檢測(cè)器高效液相色譜儀的維護(hù)1．HPLC的日常操作條件：溫度：10—30℃；最好是恒溫、恒濕，遠(yuǎn)離高電干擾、高振動(dòng)設(shè)備。2．泵的保養(yǎng)：1)使用流動(dòng)相盡量要清潔；2)進(jìn)液處的沙芯過(guò)濾頭要經(jīng)常清洗；3)流動(dòng)相交換時(shí)要防止沉淀；4)避免泵內(nèi)堵塞或有氣泡。3．進(jìn)樣器的保養(yǎng)：1)每次分析結(jié)束后，要反復(fù)沖洗進(jìn)樣口，防止樣品的交叉污染；閥件或管路一定要清洗干凈；3)要注意流動(dòng)相的脫氣；4)避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相；5)進(jìn)樣樣品要提純；6)嚴(yán)格控制進(jìn)樣量；7)每天分析工作結(jié)束后，要清洗進(jìn)樣閥中殘留的樣品；8)每天分析測(cè)定結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣?lái)清洗柱；9)若分析柱長(zhǎng)期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機(jī)溶劑保存并封閉；2)樣品池要保養(yǎng)。流動(dòng)相的抽作要求：高效液相級(jí)色譜醇，二次蒸餾水，緩沖鹽一定要過(guò)濾；流動(dòng)相脫氣至關(guān)重要（可采用抽濾，超聲波脫氣等方法）吸濾頭：特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流動(dòng)相通過(guò)吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。單向閥：如遇到泵壓不穩(wěn)或流動(dòng)相不能抽取，則可能是單向閥出現(xiàn)問(wèn)題，卸下用異丙醇超聲波清洗，清洗時(shí)須按其安裝的方向放置在小燒杯中，切記不可與安裝方向倒置超洗！泵頭：泵頭漏液或出現(xiàn)其它故障一般要申請(qǐng)維修（如漏液，或更換柱塞桿及其密封墊等）過(guò)濾器：當(dāng)色譜峰出現(xiàn)異常情況時(shí)，有可能是此部件被污染， 拆下用異丙醇超洗或更換過(guò)濾墊片。手動(dòng)進(jìn)樣器：平時(shí)應(yīng)注意用二次蒸餾水和甲醇在裝載狀態(tài)及進(jìn)樣分析狀態(tài)清洗；如出現(xiàn)漏液現(xiàn)象，原因極可能為轉(zhuǎn)子密封墊磨損或污染，一般須申請(qǐng)維修或更換配件?？刹鹦逗笕〕銎渲械膲|片用異丙醇超洗（可根據(jù)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作或申請(qǐng)維修）。 泵壓不穩(wěn)泵頭有氣泡——流動(dòng)相脫氣/大流量沖洗泵/用注射器抽取流動(dòng)動(dòng)相單向閥故障——清洗若上述操作仍不能解決，可用異丙醇沖洗流動(dòng)（無(wú)色譜柱沖洗，由手動(dòng)進(jìn)樣器直接進(jìn)檢測(cè)器），流量為34ml/min,沖洗50分鐘左右，然后重新安裝色譜柱，更換流動(dòng)相平衡，如此再不能解決泵壓波動(dòng)故障，可申請(qǐng)更換配件。泵頭沖洗；用備件中的針頭和針管分別用蒸餾水和純甲醇沖洗35ml。手動(dòng)進(jìn)樣器沖洗； 同樣用備件中的針管和專用沖洗針頭對(duì)手動(dòng)進(jìn)樣器的裝載狀態(tài)和進(jìn)樣狀態(tài)分別進(jìn)行沖洗34ml的蒸餾水，然后再?zèng)_洗34ml的純甲醇。要注意柱子的PH值范圍，不得注射強(qiáng)酸強(qiáng)堿的樣品，特別是堿性樣品。流路堵塞問(wèn)題堵塞導(dǎo)致壓力太大，按預(yù)柱→混合器中的過(guò)濾器→管路過(guò)濾器→單向閥檢查，并清洗。但是，如果樣品非常不清潔，或工作中發(fā)現(xiàn)經(jīng)常要更換1cm的保護(hù)柱，那么就應(yīng)該選用2cm或3cm的保護(hù)柱，保護(hù)柱越長(zhǎng)自然所裝填的色譜填料就越多，則其保護(hù)性能越好，當(dāng)然隨著保護(hù)柱長(zhǎng)度的增加，樣品的保留時(shí)間也相應(yīng)增加，一般來(lái)說(shuō)，保護(hù)柱的內(nèi)徑與分析色譜柱的內(nèi)徑相同或相當(dāng)即可。但是，其最大的缺點(diǎn)是不經(jīng)濟(jì)，特別是針對(duì)中國(guó)的具體情況，一次性使用相對(duì)費(fèi)用較高。另一種保護(hù)柱結(jié)構(gòu)其實(shí)質(zhì)是縮短了色譜分析柱，設(shè)計(jì)方式上有直連式/手緊式或整體式。直連式結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)可以在任何時(shí)候由色譜工作者來(lái)安裝連接，可以與任何品牌的色譜柱連接使用，而且可以根據(jù)不同的樣品選擇合適的保護(hù)柱長(zhǎng)度。另外從保護(hù)柱結(jié)構(gòu)的角度看，保護(hù)柱結(jié)構(gòu)又分為是否可以更換保護(hù)柱柱芯，現(xiàn)在大多數(shù)的保護(hù)柱均可以更換柱芯，可以降低保護(hù)柱的使用成本。但是，根據(jù)實(shí)際的分析工作，也可不必與分析色譜柱的填料完全匹配。HPLC故障及排除方法（一) 保留時(shí)間變化：柱恒溫；：至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡柱：用25mmol/L的緩沖液：每天沖洗柱：穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動(dòng)相：采用保護(hù)柱(二)保留時(shí)間縮短：檢查泵,重新設(shè)定流速：降低樣品量：流動(dòng)相PH值保持在3~：防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀：柱恒溫(三)保留時(shí)間延長(zhǎng)：管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡：用流動(dòng)相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱：同前(二)3：同前(二)4：同前(二)5(四) 出現(xiàn)肩峰或分叉：用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%：采用較弱的樣品溶劑：更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件：更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過(guò)濾器,過(guò)濾樣品：更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子(五)鬼峰：每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗：處理樣品：重新平衡柱,用流動(dòng)相作樣品溶劑 (尤其是離子對(duì)色譜)(TFA)氧化(肽譜)：每天新配,用抗氧化劑(反相)：通過(guò)變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用HPLC級(jí)的水(六) 基線噪聲(尖銳峰)：流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓(隨機(jī)噪聲)：清洗柱,凈化樣品,用HPLC級(jí)試劑：更換氘燈(偶然噪聲)：采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來(lái)源(如水浴等)：流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓(七)峰拖尾：降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相：清潔樣品,調(diào)整流動(dòng)相：加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相PH值,鈍化樣品(四)4：同前(四)4(四)3：同前(四)3：連接點(diǎn)降至最低,對(duì)所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管：用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護(hù)柱(八)峰展寬：同(四)1：進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散：設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)：設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%：增加柱溫,采用低粘度流動(dòng)相：用小體積池,卸下熱交換器：等度洗脫時(shí)增加溶劑含量也可用梯度洗脫：將連接管徑和連接管長(zhǎng)度降至最?。哼M(jìn)小濃度小體積樣品維修經(jīng)驗(yàn)與原則1. 親自重復(fù)故障（如果可以重復(fù)的話），不輕信用戶或第三者的口述或轉(zhuǎn)述。有的操作者為了推脫自己的責(zé)任，會(huì)說(shuō)儀器自己突然……，自己什么也沒(méi)動(dòng)等等，這些都是可以理解的，工程師要會(huì)妥善處理。不要?jiǎng)硬粍?dòng)就打開(kāi)機(jī)殼，沒(méi)有初步的判斷和排除就喜歡鋪開(kāi)攤子絕不是老手的做法。約有50%故障是由外部環(huán)境或操作、清潔等造成的。3. 先電源，后主機(jī)；先附件，后主機(jī)。4. 充分利用儀器面板上各種按鍵、顯示屏幕和操作或維修程序等，作些排除，這需要極其熟悉結(jié)構(gòu)。如可推斷清潔保養(yǎng)得如何，是否有欲更新的想法（否則無(wú)論怎么修都不會(huì)說(shuō)好）等。我接手后有一次接報(bào)修，趕到時(shí)屏幕暗的，問(wèn)醫(yī)生是這臺(tái)嗎？醫(yī)生回答是的，且上前按電源開(kāi)關(guān)，按后無(wú)反應(yīng)，就又按一下，機(jī)器重啟了。每天數(shù)百次開(kāi)關(guān)電源，怎有不壞之理？修好后，我寫(xiě)了一個(gè)條子貼在儀器前，寫(xiě)明若發(fā)現(xiàn)屏幕暗，先隨意按一下任何鍵，不亮再開(kāi)電源開(kāi)關(guān)。6. 不輕易更換原來(lái)儀器上的元器件和板子、管道等，因?yàn)橛行┰骷c板子、軟件數(shù)據(jù)相關(guān)?！　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　?.若責(zé)任在科室或使用者，以后更難打交道了。最好解鈴還須系鈴人！否則很花時(shí)間 。 修好一臺(tái)儀器不容易，尤其是老儀器；搞壞一臺(tái)儀器可是太容易了，不需要什么知識(shí)。ColumnTroubleshooting Column and System Troubleshooting 色譜柱和色譜系統(tǒng)的故障檢修What Every HPLC User Should Know每個(gè)HPLC使用者應(yīng)該知道什么： Components HPLC 的組成 Pump 泵 Injector/Autosampler 進(jìn)樣器/自動(dòng)進(jìn)樣器 Column 色譜柱 Detector 檢測(cè)器 Data System/Integrator 數(shù)據(jù)系統(tǒng)/積分儀表All of these ponents can have problems and require troubleshooting. 所有這些部件可能出現(xiàn)故障而需要檢修。mMobile Phase:60%25mM Na2HPO4, : 40%MeOHFlow Rate: mL/min Temperature: 35186。mMobile Phase: 82%H2O : 18%ACNInjection Volume: 30 181。mMobile Phase:85%25mM Na2HPO4, : 15%ACNFlow Rate: mL/min Temperature: 35186。mMobile Phase:85%25mM Na2HPO4, : 15%ACNFlow Rate: mL/min Temperature: 35186。mMobile Phase: 20% H2O : 80% MeOH Flow Rate: mL/min Temperature: . Detection: UV 254 nmSample: 1. Uracil 尿嘧啶 2. Phenol 苯酚 3. 4Chloronitrobenzene 4氯硝基苯 4. Toluene 甲苯Plates TF Plates TF Plates TF理論板數(shù) 拖尾因子 理論板數(shù) 拖尾因子 理論板數(shù) 拖尾因子1. 7629 1. 7906 1. 7448 2. 12043 2. 12443 2. 12237 3. 13727 3. 17999 3. 15366 4. 13355 4. 17098 4. 19067 QC test forward direction QC test reverse direction QC test after cleaning 100% IPA, 35186。mMobile Phase:40%25mM Na2HPO4, : 60%ACNFlow Rate: mL/min Temperature: 40186。2％三乙胺 (~pH 11) After 30 injections Initial 開(kāi)始時(shí) 進(jìn)樣30次后Multiple peak shape changes can be caused by the same column problem. In the case a void resulted from silica dissolved at high pH.。mMobile Phase: 40% 10 mM TEA, pH 11 : 60% MeOHFlow Rate: mL/min Temperature: . Detection: UV 254Sample: 1. Maleat 順丁烯二酸 2. Pseudeophedrine 偽麻黃堿 3. Chlorphenniramine 氯非尼拉明Plates 理論板數(shù)1. 5922 2. 98793. 779 “Phantom” peak from first injection 前次進(jìn)樣未出完的峰The extremely low plates are an indication of an extremely late eluting peak from the preceding run.Peak Tailing峰拖尾 Injector Seal Failure進(jìn)樣器密封性差Column: BonusRP, 75mm, Mobile Phase: 30% H2O : 70% MeOH Flow Rate