細(xì)菌和病毒的遺傳作-在線瀏覽
2025-07-13 18:08本頁(yè)面
【正文】 序 基因順序的精確確定 雜交： rcrb rc rb Rfrc－ rb＝ 14％ rc h rb ＋ ＋ 可以先只考慮 rc、 rb 及 h來(lái)確定三者的順序 由于噬菌體的連鎖圖是環(huán)狀，所以 3排列都對(duì)。 ? 用 UV照射獲得了 5個(gè) λphage 的突變型： ? s型，噬菌斑較小， ? mi型，噬菌斑特別小， ? c型，噬菌斑完全清晰， ? co1型，噬菌斑中間模糊，四周清晰， ? co2型，噬菌斑的中部較 co1型更為濃密。 野生型肺炎雙球菌菌落為 光滑型 ，一種突變型為 粗糙型 ，兩者根本差異在于莢膜形成 ? 莢膜 菌落 毒性 類型 光滑型 S 發(fā)達(dá) 光滑 有 I, II, III 粗糙型 R 無(wú) 粗糙 無(wú) I, II 莢膜的主要成分是多糖，具特殊的抗原性。 Griffith肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化試驗(yàn)及其結(jié)果 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 轉(zhuǎn)化試驗(yàn) 轉(zhuǎn)化特征： 轉(zhuǎn)化現(xiàn)象在細(xì)菌中是一種普遍現(xiàn)象。 感受態(tài)主要受一類蛋白質(zhì) (感受態(tài)因子 )影響，感受態(tài)因子可以在細(xì)菌間進(jìn)行 轉(zhuǎn)移 ，從感受態(tài)細(xì)菌中傳遞到非感受態(tài)細(xì)菌 中，可以使后者 變?yōu)楦惺軕B(tài) 。 只有當(dāng)細(xì)菌處于感受態(tài)時(shí)，細(xì)菌才能轉(zhuǎn)化。 如：轉(zhuǎn)化肺炎雙球菌的 DNA片段至少要有 800bp，而枯草桿菌最少需要 16000bp。 因?yàn)樵诩?xì)菌的細(xì)胞壁或細(xì)胞膜上有一定數(shù)量的DNA接受位點(diǎn)。 感受態(tài) 轉(zhuǎn)化過(guò)程 Ⅰ 、 結(jié)合 (binding)： Ⅱ 、 穿入 當(dāng)細(xì)菌細(xì)胞處于感受態(tài)時(shí)，供體 (donor)雙鏈 DNA分 子可結(jié)合在受體 (receptor)細(xì)胞表面的結(jié)合位點(diǎn)上。 穩(wěn)定結(jié)合在受體位點(diǎn)上的雙鏈供體 DNA，由外切酶或 DNA移位酶降解其中的一條鏈，而另一條鏈進(jìn)入細(xì)胞中。 是指單鏈的供體 DNA與受體 DNA對(duì)應(yīng)位點(diǎn)的置換，從而穩(wěn)定地滲入到受體 DNA中。 A B A B A 單轉(zhuǎn)化 A B 單轉(zhuǎn)化 B A B 并發(fā)轉(zhuǎn)化 A、 B 轉(zhuǎn)化作圖 ① 并發(fā)轉(zhuǎn)化：當(dāng)兩個(gè)基因緊密連鎖時(shí)，它們就有機(jī)會(huì) 同時(shí)被轉(zhuǎn)化。 ② 、轉(zhuǎn)化作圖原理 相鄰基因共轉(zhuǎn)化的頻率與基因間距離成反比，即基因間距離越近，發(fā)生共轉(zhuǎn)化頻率越高；反之越低。重組類型即為單基因轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。 概念 二、接合 conjugation 接合的發(fā)現(xiàn) amp。 材料 ：大腸桿菌 K12菌株的兩個(gè)營(yíng)養(yǎng)缺陷型品系： 菌株 A— 甲硫氨酸缺陷型 met 和生物素缺陷型 bio； 菌株 B— 蘇氨酸缺陷型 thr 和亮氨酸缺陷型 leu 方法 ：將 A、 B兩菌株混和，在基本培養(yǎng)基 (固體 )上涂布培養(yǎng)。 但試驗(yàn)中原養(yǎng)型菌落產(chǎn)生的頻率非常高（ 107 ），因此基本可以排除回復(fù)突變的可能。 試驗(yàn)方法： 將 A、 B品系混合接種在基本培養(yǎng)基表面，短時(shí)間后 噴噬菌體 T1殺死 A品系 ，使其不能持續(xù)產(chǎn)生thr與 leu供 B品系持續(xù)生長(zhǎng)。 噴噬菌體 T1殺死 A菌 轉(zhuǎn)化作用的排除 加熱法 加熱 戴維斯的 U形管試驗(yàn) 細(xì)胞直接接觸 是原養(yǎng)型細(xì)菌產(chǎn)生的必要條件。即遺傳物質(zhì)從 A菌株轉(zhuǎn)移到 了 B菌株。 目前研究表明 F因子 為 環(huán)狀 DNA分子。 + Ⅲ 、整合的 F因子－ Hfr菌株 （高頻重組菌株）：指 F 因子整合到宿主染色體中去了的菌株，其重組頻率比 F+ 高 1000多倍。 ④ F＋和 F－雜交 后代皆為 F＋， 而且可以以 10 頻率獲得重組體后代。 接合過(guò)程示意圖 高頻重組 高頻重組細(xì)胞的形成 ② 、 Hfr細(xì)胞染色體的轉(zhuǎn)移 Hfr F ＝ Hfr ＋ F Hfr F 時(shí)，細(xì)菌基因的重組頻率增加千倍。 ? 新轉(zhuǎn)入的 DNA片斷稱為供體外基因子（ exogenote），而受體的染色體稱為受體內(nèi)基因子（ endogenote）。 相同 Ⅰ 、都能和 F 雜交 Ⅱ 、雜交都要通過(guò)接合管和受體菌相聯(lián)接 不同 Ⅰ 、產(chǎn)生重組子頻率不同： － － 4 ＋ － － 7 Ⅱ 、產(chǎn)生的后代不同： F F 后代 F ， Hfr F 后代 F 。 中斷雜交試驗(yàn) ? Hfr中的 DNA向 F－ 轉(zhuǎn)移時(shí)，是從酶切端點(diǎn)開(kāi)始直線式進(jìn)行的。 中斷雜交試驗(yàn)： Hfr： strs thr+ leu+ azis tonAs galb+ lac+ F－ ： strr thr leu azir tonAr galb－ lac－ strr 對(duì)鏈霉素有抗性 azir 對(duì)疊氮化合物有抗性 tonAr 對(duì) T1噬菌體有抗性 thr+ leu+ galb+ lac+ 對(duì)蘇氨酸、亮氨酸、半乳糖和乳糖為原養(yǎng)型 實(shí)驗(yàn)方法與步驟 Ⅰ 、混合培養(yǎng) Ⅴ 、根據(jù)基因轉(zhuǎn)入 F 的時(shí)間 進(jìn)行細(xì)菌染色體作圖 ? Ⅱ 、每隔一定時(shí)間取樣，攪拌 ? Ⅳ 、測(cè)試形成的 F 菌落的基因型， 確定每個(gè)基因轉(zhuǎn)入 F 的順序（時(shí)間） ? － － － ? 1分鐘 ≈ 20%的重組值 1分鐘 ≈ 20%的重組值 1分鐘 ≈ 20%的重組值 Ⅲ 、在含 str的完全培養(yǎng)基上， Hfr被 殺死 中斷雜交后，接合后體中各個(gè)性狀出現(xiàn)的頻率 大腸桿菌 Hfr strs thr+ leu+ azis tonAs galb+ lac+ F strr thr leu azir tonAr galb lac的結(jié)果 表記基因 轉(zhuǎn)入的時(shí)間（m i n ） 頻 率thr+8 100 （經(jīng)選擇的）leu+ 100 （經(jīng)選擇的）azis9 90tonAs11 70lac+18 40galb+25 25根據(jù)中斷雜交試驗(yàn)繪制的連鎖圖 F因子插入的位置及方向 F因子和細(xì)菌染色
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