【正文】 用搗碎器 使空殼脫離 吸附 離心 沉淀細(xì)胞進(jìn)一步培養(yǎng)后，可產(chǎn)生大量完整的子代噬菌體 （ 2）含 32PDNA的一組：放射性85%在沉淀中 上清液中含 15%放射性 沉淀中含 85%放射性 以 32P標(biāo)記 DNA做噬菌體感染實(shí)驗(yàn) ? 用含有 32P DNA的 T2噬菌體與宿主細(xì)菌混合時(shí)，則發(fā)現(xiàn) 32P DNA注入宿主細(xì)胞，并產(chǎn)生噬菌體后代，這些 T2噬菌體后代的蛋白質(zhì)外殼的組成、形狀大小等均與留在細(xì)胞外的蛋白質(zhì)外殼一模一樣 ? 進(jìn)入細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)部的物質(zhì)是 DNA。 ? 將 TMV和 HRV在一定濃度尿素或苯酚溶液中振蕩，分別拆分得到各自的 RNA和蛋白質(zhì)，將兩種 RNA分別與對方的蛋白質(zhì)外殼重建形成兩種雜合病毒： (三 )、植物病毒的重建實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)證明，遺傳信息的流向與 RNA的傳遞是一致的。 肺炎球菌的轉(zhuǎn)化試驗(yàn) 噬菌體感染試驗(yàn) 病毒拆開與重建試驗(yàn) 利用微生物為實(shí)驗(yàn)對象進(jìn)行的三個(gè)著名實(shí)驗(yàn)的論證 只有核酸才是負(fù)載遺傳信息的真正物質(zhì)基礎(chǔ) 二、遺傳物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的存在部位和方式 ?遺傳物質(zhì)的七個(gè)水平 細(xì)胞水平 細(xì)胞核水平 染色體水平 核酸水平 基因水平 密碼子水平 核苷酸水平 ?生物體 DNA大部分或幾乎存在于 細(xì)胞核（真核）或核區(qū)（原核）中 ?不同微生物細(xì)胞，細(xì)胞核數(shù)目不同 ?單核 釀酒酵母 、 黑曲霉、孢子 ?雙核 桿菌細(xì)胞存在兩個(gè)核區(qū)（球菌一般一個(gè)） ?多核 粗糙脈胞菌 、 米曲霉 、 藻狀菌、放線菌 細(xì)胞水平 細(xì)胞核水平 ?基因組、核基因組或核染色體組 ?真核生物 有核膜， DNA與組蛋白結(jié)合 形成染色體 ?原核生物 有核區(qū)， DNA裸露，環(huán)狀雙鏈，無組蛋白與 DNA結(jié)合在一起 ?真核生物質(zhì)粒： 線粒體、葉綠體、共生生物、 2μm質(zhì)粒（酵 母菌質(zhì)粒位于核內(nèi)，不與核染色體組整合）等 ?原核生物質(zhì)粒： F質(zhì)粒、 R質(zhì)粒、 Ti質(zhì)粒等 在細(xì)胞質(zhì)中，還存在核外染色體。如多數(shù)微生物、高等動(dòng)植物的生殖細(xì)胞 雙倍體： 細(xì)胞含有兩套功能相同的染色體的個(gè)數(shù)。 隨著細(xì)菌基因組研究的迅速發(fā)展，全基因組測序已逐步成為微生物基礎(chǔ)研究的重要手段之一。但是信息傳遞系統(tǒng) (復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯 )則與細(xì)菌不同而類似于真核生物。 3 ） 原核生物和真核生物的基因組比較 遺傳密碼： 指 DNA鏈上各個(gè)核苷酸的特定 排列順序。 起始密碼子： AUG。 三聯(lián)密碼子： 每個(gè)密碼子由鏈上三個(gè)核苷酸順序決定，常以mRNA上三個(gè)核苷酸順序 表示。即DNA復(fù)制時(shí)親代 DNA的兩條鏈解開，每條鏈作為新鏈的模板，從而形成兩個(gè)子代 DNA分子，每一個(gè)子代 DNA分子包含一條親代鏈和一條新合成的鏈。 ? 又叫核糖核酸（ ribonucleic acid）。其堿基配對原則是 AU， CG。 ? 叫 信使 RNA， 其上帶有指導(dǎo)氨基酸的信息密碼子 （三聯(lián)密碼子）， 它翻譯氨基酸，具傳遞遺傳性的功能。 tRNA 的結(jié)構(gòu) 遺傳密碼的 ―閱讀者 ‖ (1)含有 70~80個(gè)堿基 (2) 5’端和 3’端配對 （ 常為 7bp）形成莖區(qū) ， 稱為 受體臂 或稱 氨基酸臂 。 此臂負(fù)責(zé) 攜帶特異的氨基酸 。 ? rRNA， 又稱 核糖體 RNA， 其和蛋白質(zhì)結(jié)合成的核糖體為合成蛋白質(zhì)的場所。 啟動(dòng)階段 在核糖體上合成蛋白質(zhì)（ P76） 從 mRNA讀碼框架的起始碼 AUG… 開始，按 mRNA模板三聯(lián)體密碼的順序延長肽鏈，直至終止密碼出現(xiàn)。 肽鏈的延伸階段 “ 受位 ” （ A） 和 “ 給位 ” （ P） A位 （氨?；课唬?，氨基酰 tRNA進(jìn)入部位。 *進(jìn)位反應(yīng) *轉(zhuǎn)位反應(yīng) *移位反應(yīng) *終止階段 肽鏈的延伸階段和終止階段 中心法則 1958年由克里克 (Crick)提出，包括由 DNA到 DNA的復(fù)制、由 DNA到 RNA的轉(zhuǎn)錄和由 RNA到蛋白質(zhì)的翻譯等過程。 遺傳信息傳遞的規(guī)律 基因 A 基因 B DNA 轉(zhuǎn)錄 基因 A 基因 B mRNA 翻譯 蛋白質(zhì) A 蛋白質(zhì) B 蛋白質(zhì) 原核生物的染色體與細(xì)胞質(zhì)沒有核膜分開，因此三個(gè)過程緊密聯(lián)系 位于同一個(gè)操縱子內(nèi)的多個(gè)基因共同轉(zhuǎn)錄為一個(gè)大的 mRNA 分子，然后分別翻譯成不同的蛋白質(zhì)。 第二節(jié) 質(zhì)粒與轉(zhuǎn)座因子 1. 質(zhì)粒的特點(diǎn) （ 1）結(jié)構(gòu) 通常以超螺旋雙鏈 DNA分子存在于細(xì)胞中； 分離后大多是三種構(gòu)型： CCC型 （ covalently closed circular):共價(jià)閉合環(huán)狀 OC型 （ open circular form):開環(huán)型 L型 （ linear form)： 線型 也發(fā)現(xiàn)有線型雙鏈 DNA質(zhì)粒和 RNA質(zhì)粒； 質(zhì)粒分子的大小范圍從 1kb左右到 1000kb； （ 細(xì)菌質(zhì)粒多在 10kb以內(nèi)） 一、原核生物的質(zhì)粒 麻花狀的超螺旋結(jié)構(gòu) 1. 質(zhì)粒的特點(diǎn) 一、原核生物的質(zhì)粒 （ 3） 質(zhì) 粒 的 鑒 定 電鏡 瓊脂糖凝膠電泳 聚丙烯酰胺凝膠電泳 密度梯度離心 質(zhì)粒的限制性酶切圖譜 （ 2） 質(zhì) 粒 的 制 備 增殖培養(yǎng) 裂解細(xì)胞 蛋白質(zhì)和 RNA的去除 質(zhì)粒 DNA與染色體 DNA分離 （ 4）質(zhì)粒的消除 吖啶類染料、絲裂霉素 C、紫外線、利福平、 重金屬離子、高溫 （ 5）質(zhì)粒的主要類型 質(zhì)粒所編碼 的功能和賦 予宿主的表 型效應(yīng) 致育質(zhì)粒（ F質(zhì)粒， F因子） 抗性質(zhì)粒（ R質(zhì)粒， R因子） 毒力質(zhì)粒（ Vi質(zhì)粒） 細(xì)菌素質(zhì)粒 代謝質(zhì)粒 隱秘 質(zhì)粒 （ 6）質(zhì)粒的特征 ①在細(xì)胞質(zhì)中獨(dú)立于染色體之外獨(dú)立存在（游離態(tài)），也可以通過交換摻入染色體上，以 附加體 的形式存在； ② 可自我復(fù)制，穩(wěn)定遺傳。復(fù)制與染色體分開，但同步進(jìn)行。 嚴(yán)緊型質(zhì)粒 ：復(fù)制與染色體的復(fù)制同步 ,低拷貝數(shù)（ 寄主細(xì)胞內(nèi)只有 1－ 5個(gè)拷貝） 松弛型質(zhì)粒 ：復(fù)制與染色體的復(fù)制不同步， 高拷貝數(shù) （ 寄主細(xì)胞內(nèi)達(dá)到 10－ 200個(gè)或更多拷貝） （ 6）質(zhì)粒的特征 ④可以通過 轉(zhuǎn)化 、 轉(zhuǎn)導(dǎo) 或 接合 作用而由一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到另一個(gè)菌細(xì)胞中，使兩個(gè)細(xì)胞都成為帶有質(zhì)粒的細(xì)胞；質(zhì)粒轉(zhuǎn)移時(shí)，它可以單獨(dú)轉(zhuǎn)移，也可以攜帶著染色體（片段）一起進(jìn)行轉(zhuǎn)移，所以它可成為 基因工程的載體 。 ⑥功能多樣化 質(zhì)粒的親和性和不親和性 幾種質(zhì)粒在同一宿主細(xì)胞內(nèi)皆能復(fù)制且能穩(wěn)定遺傳，質(zhì)粒間有親和性。 3. 質(zhì)粒在基因工程中的應(yīng)用 優(yōu)點(diǎn)： ? 體積小，便于 DNA的分離與操作； ? 呈環(huán)狀，在分離中保持穩(wěn)定的性能； ? 有獨(dú)立復(fù)制起點(diǎn)； ? 拷貝數(shù)多，外援基因擴(kuò)增比較快； ? 存在選擇性標(biāo)記，便于選擇和檢出。 存在于腸道細(xì)菌、奈球菌、球菌等。 包括抗藥性和抗重金屬二大類。 R質(zhì)粒 抗性轉(zhuǎn)移因子（ RTF） ：轉(zhuǎn)移和復(fù)制基因 抗性決定因子 ：抗性基因 2） 抗性質(zhì)粒（ R質(zhì)粒、 R因子） R質(zhì)粒與耐藥性有關(guān)，尤其與多重耐藥性有關(guān)。特殊片段 T— DNA整合－植物 DNA中，令其轉(zhuǎn)化成癌細(xì)胞（破壞控制細(xì)胞分裂的激素調(diào)節(jié)系統(tǒng)）。