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2025-06-30 02:43本頁面
【正文】 CCU UCA AGA UGU GGA Met Pro Ser Arg Cys Gly (2)錯義突變 5‘ AUG CCU UCA GGA UGU GGA Met Pro Ser Gly Cys Gly (3)無義突變 5‘ AUG CCU UCA AGA UGA GGA Met Pro Ser Arg (4)移碼突變 5‘ AUG CCU UCA AGU GUG GG Met Pro Ser Ser Val 誘變育種原理 誘變育種的誘變劑 凡能引起生物體遺傳物質(zhì)發(fā)生變異的因素，統(tǒng)稱 誘變劑 。 2）最好選用已經(jīng)過生產(chǎn)選育的自發(fā)突變菌株。 4）由于有些菌株在發(fā)生某一變異后會對其它誘變因素的敏感性提高，故有時可考慮選擇已發(fā)生其它變異的菌株作為出發(fā)菌株。 （ 2）、單細(xì)胞（或單孢子）懸液制備 一般均采用生理狀態(tài)一致的單細(xì)胞或單孢子懸液進(jìn)行誘變處理。 ? 處理前，細(xì)胞應(yīng)盡可能達(dá)到同步生長狀態(tài) ? 細(xì)胞菌齡一般在 對數(shù)期 ， ? 霉菌的菌絲一般是多核的，所以對霉菌的處理一般應(yīng)采用孢子懸浮液。 ? 中子不直接產(chǎn)生電離，但能使吸收中子的物質(zhì)的原子核射出質(zhì)子，因而快中子的生物學(xué)效應(yīng)幾乎完全是由質(zhì)子造成的?？熘凶拥哪芰繛?伏特，慢中子能量為 1/4至 100電子伏特。 氮 芥 ? 氮芥為極易揮發(fā)的油狀物，它的鹽酸鹽是白色粉末，一般使用的是其鹽酸鹽。 ? 氮芥的誘變機(jī)制 是它能引起染色體畸變。 亞硝酸 ?常用的有效誘變劑，其誘變作用主要是 脫去堿基中的氨基。所以，可在臨用前將亞硝酸鈉放在 的醋酸緩沖液中，使先生成亞硝酸然后再使用。 ? 在緩沖液中較難溶解，而在甲酰胺中溶解度較大，因此用甲酰胺溶解，可以提高處理濃度。C 和時間為 60min的條件下進(jìn)行處理，容易得到高產(chǎn)菌株 。 2． 亞硝酸和烷化劑 應(yīng)用的范圍較廣 ， 造成的遺傳損傷較多 。 3． 吖啶類誘變劑 可以造成生化代謝途徑的完全中斷 。 電離輻射是造成染色體巨大損傷的最好誘變劑 ， 它能造成不可回復(fù)的缺突變 。 劑 量 確定誘變劑后，誘變劑劑量的選擇也是育種工作的一個關(guān)鍵問題。 ? 目前的處理劑量已從以前采用的死亡率 %降低到 7080%，甚至更低的劑量，特別是對于經(jīng)過一再誘變的高產(chǎn)菌株。 凡既能增加變異幅度，又能促使變異向正變范圍移動的劑量就是合適劑量。 ? NTG誘導(dǎo) 的突變 99%屬堿基轉(zhuǎn)換，其中 95%是 GC→ AT的轉(zhuǎn)換。 ? 4－硝基喹啉－ 1－氧化物 以 90%的概率誘發(fā) GC→ AT的轉(zhuǎn)換。 ? 無 化學(xué)誘變劑能以誘發(fā) AT →CD 的顛換作為主要的誘變方式。 化學(xué)誘變劑是很經(jīng)濟(jì)的 ， 因?yàn)橹恍枰倭康暮线m的誘變劑 ， 設(shè)備是實(shí)驗(yàn)室的一般玻璃器皿 ，一個蒸氣罩 。 大部分誘變劑是致癌劑 ， 所以在使用中必須非常謹(jǐn)慎 ， 要避免化學(xué)誘變劑與皮膚接觸 ，且切勿吸入其蒸氣 ， 有人對某些誘變劑極其敏感 ， 甚至未直接接觸就會過敏 ， 這就更要當(dāng)心 。 ? 研究表明，誘變后的一小時內(nèi)必須進(jìn)行新的蛋白質(zhì)合成，這個變異才有效。這樣，隱性的變異就會顯現(xiàn)出來，若不經(jīng)液體培養(yǎng)基的中間培養(yǎng)，直接在平皿上分離就會出現(xiàn)變異和不變異細(xì)胞同時存在于一個菌落內(nèi)的可能，形成混雜菌落，以致造成篩選結(jié)果的不穩(wěn)定和將來的菌株退化。這種技術(shù)是在生物體外，通過對 DNA分子進(jìn)行人工 “ 剪切 ” 和 “ 拼接 ” ，對生物的基因進(jìn)行改造和重新組合，然后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行無性繁殖，使重組基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，產(chǎn)生出人類所需要的基因產(chǎn)物。 這些開創(chuàng)性的工作為基因工程建立了一套完整的方法和體系 ,成為現(xiàn)代生物學(xué)發(fā)展史上的重要 里程碑 。 ? 通過重組 DNA技術(shù)提高次級代謝產(chǎn)物產(chǎn)量的主要方法包括 : ① 轉(zhuǎn)座突變發(fā)生； ② 通過基因工程技術(shù)靶向刪除和復(fù)制基因； ③ 通過原生質(zhì)體融合進(jìn)行基因重組 。 ? 另外，抗生素等發(fā)酵產(chǎn)物的生物合成途徑中常會發(fā)生旁路代謝，產(chǎn)生一些不需要的副產(chǎn)品或結(jié)構(gòu)類似物，這樣，不僅造成生物合成代謝流能量資源的浪費(fèi)，而且還會對下游的分離純化和產(chǎn)品的質(zhì)量帶來一定的影響。？？ – 因?yàn)槟康幕虮徊迦肽撤N載體中，并不意味著這個基因就會表達(dá)或能高效表達(dá)。 基因表達(dá)系統(tǒng) 原核表達(dá)系統(tǒng) 真核生物表達(dá)系統(tǒng) 有酵母、絲狀真菌等 目前常用大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、鏈霉菌等 ? 在眾多與生物合成有關(guān)的基因中，有些屬 調(diào)節(jié)基因 ，調(diào)控了各種酶基因的啟動和關(guān)閉，它們對最終產(chǎn)物的合成往往是至關(guān)重要的。 ? 方法 ：（ 1）通過基因克隆方法，交換或?qū)胂嚓P(guān)基因，通過基因量的增加或調(diào)控基因能力的加強(qiáng)提高微生物的合成能力；（ 2）通過阻斷不需要的旁路代謝途徑增加主要途徑的代謝流，從而達(dá)到減少副產(chǎn)品，提高主要產(chǎn)量的目的。 阻抑物 乳糖 轉(zhuǎn)錄 半乳糖苷酶 透過酶 轉(zhuǎn)乙酰酶 乳糖分解代 謝調(diào)控過程 是一個自我 調(diào)控過程 RNA聚合酶 建立合適的宿主和載體系統(tǒng) —— 基因工程菌的穩(wěn)定性 ? 基
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