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2025-06-29 08:04本頁面
【正文】 切割位點(diǎn) ， 但其切割位點(diǎn)在識(shí)別位點(diǎn)以外 。 通常所指的限制酶是 Ⅱ 型酶 。 切點(diǎn)順序中有一個(gè)堿基的變異 、 缺失或修飾 ，便不再被水解 ， 因此在分子克隆中常用 ，它被譽(yù)為分子生物學(xué)家的手術(shù)刀 。 ? 限制酶第一個(gè)字母 (大寫 ， 斜體 )代表該酶的微生物 (寄主菌 )屬名；第 3個(gè)字母 (小寫 ， 斜體 )代表微生物種名 。 ? 如果從一種菌株中發(fā)現(xiàn)了幾種限制酶 ， 則根據(jù)發(fā)現(xiàn)和分離的順序用羅馬字母表示 。 識(shí)別順序一般為 4—6個(gè)堿基，通常是反轉(zhuǎn)重復(fù)順序，具有 180176。一條鏈上的堿基順序（例如從5??3?）和另一條鏈上從 5?? 3?的順序完全相同。 These sites are DNA sequence that are identical on both DNA strands. Q: Which of the following 2 DNA sequences is a potentional RE recognition site? Ⅰ . 5? AGTTGA 3? Ⅱ . 5? GCACGTGC 3? Q: If show below is 189。? 5? TCA _ _ _ 3? 從理論上講 ， 如果 DNA鏈上的 A、 T、C和 G四種堿基隨機(jī)分布 ， 根據(jù)限制酶識(shí)別堿基的個(gè)數(shù)可估算限制酶的切割幾率 ，同時(shí)也決定了它切割 DNA后產(chǎn)生的 DNA片段的長度 。 識(shí)別 4個(gè)堿基 1/44=1/256 識(shí)別 6個(gè)堿基 1/46=1/4096 識(shí)別 8個(gè)堿基 1/48=1/65536 5 Ⅱ 型酶切割雙鏈 DNA產(chǎn)生的切口 (1)在識(shí)別順序的對稱軸上 ， 對雙鏈 DNA同時(shí)切割 ， 產(chǎn)生平頭末端 (blunt end). 5’GG↓ CC3’ HaeⅢ 5’GG CC3’ → ＋ 3’CC↑ GG5’ 3’CC GG5’ (2)在識(shí)別順序的兩個(gè)對稱點(diǎn)切開 DNA雙鏈，產(chǎn)生帶單鏈尾巴的粘性末端 (cohesive end)； 從 5?端切割產(chǎn)生 5?端突出的粘性末端。 6 限制酶使用中的注意事項(xiàng) 酶的活性單位： l小時(shí)內(nèi)在 50μl 容積中酶解 l μg DNA 所需要的酶量。 星號(hào)活力：限制酶在非標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件下 ， 能切割一些與其識(shí)別順序類似的序列 ， 降低酶切的特異性 。 當(dāng)反應(yīng)體系中有兩種限制酶時(shí)， 如何處理。 5‘ TTT?AAA 3’ 3’ AAA?TTT 5’ AhaⅢ ?
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