天然dna的制備ppt課件-在線瀏覽
2025-06-29 07:46本頁(yè)面
【正文】 5S 啟動(dòng)子；主要用于構(gòu)建基因克隆載體，最大優(yōu)點(diǎn)是可以體外包裝，如 CaMV、 SV M1 TT λ、 ФХ174。主要用于構(gòu)建基因克隆載體，如大腸桿菌、農(nóng)桿菌和藍(lán)細(xì)菌等的質(zhì)粒；少數(shù)含有結(jié)構(gòu)基因。 天然 DNA的提取 原理 1）生物材料的準(zhǔn)備 使材料處于提取 DNA得率最高的時(shí)期，選取最容易提取和含量最高的組織。 2）細(xì)胞的裂解 裂解不夠， DNA得率低；裂解過(guò)猛， DNA斷裂。動(dòng)植物組織，先粉碎材料，再裂解細(xì)胞。一般先按 1:1（ V:V）用酚、酚 +氯仿、氯仿對(duì)裂解液分別進(jìn)行抽提，以除去蛋白質(zhì)，然后按 2:1用乙醇（ V:V）或 1:1用異丙醇（ V:V）在酸性條件下（加 1/10 體積的 3M NaAc ）沉淀 DNA。 提取質(zhì)粒 DNA時(shí)，先調(diào)節(jié)裂解液的 pH值到 ，使所有 DNA沉淀，再調(diào)節(jié) pH值到中性，使質(zhì)粒 DNA復(fù)性從沉淀中釋放出來(lái)。 實(shí)例 1）質(zhì)粒 DNA （實(shí)驗(yàn)） 2） λ噬菌體 DNA （自學(xué)） 3）植物基因組 DNA （實(shí)驗(yàn)） 4）動(dòng)物基因組 DNA（自查資料學(xué)習(xí)） DNA的純化 1）氯化銫－溴化乙錠連續(xù)梯度離心法 純化劑量大、純度高的 DNA，須有超速離心機(jī)、氯化銫（昂貴），時(shí)間長(zhǎng)。溶液中氯化銫終濃度為 g／ ml，折射率為 。 ③收集 DNA： 紫外燈下觀察 DNA帶。 ④ 除 EB： 在收集液中加等體積正丁醇（水飽和），混勻，離心 (1500 r／ min) 3 min，取水相。 ⑤除氯化銫 : 透析法。 ①三烴甲基氯化銨層析樹(shù)脂法 : DNA在低鹽濃度（ ~ mmol／ L NaCl）下與樹(shù)脂結(jié)合，且雙鏈 會(huì)比單鏈 結(jié)合牢，分子大的比小的結(jié)合牢，線形比環(huán)狀分子結(jié)合牢。 ②羥基磷灰石法： 低鹽
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