sds-聚丙烯酰胺凝膠-在線瀏覽
2025-06-24 18:13本頁面
【正文】 SDS充分結(jié)合而形成帶負(fù)電荷的蛋 ? 白質(zhì) SDS復(fù)合物。 ? 聚丙烯酰胺凝膠為電泳支持物 ,電泳系統(tǒng)中加 ? 入一定濃度的 SDS稱為 SDS聚丙烯酰胺凝膠 ? 電泳 (SDSPAGE). ? ? SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳主要用于蛋白質(zhì)的 ? 分離、蛋白質(zhì)或肽類分子量的測 定 . ? 二 .SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳基本原理 : ? SDS與樣品中各蛋白質(zhì)形成的 SDS蛋白質(zhì)復(fù)合 ? 物 帶有大量的負(fù)電荷 ,從而使天然蛋白質(zhì)分子間的 ? 電荷差別降低 或減至最小 ,與此同時蛋白質(zhì)在 SDS ? 作用下結(jié)構(gòu)變得松散，形狀趨向一致 使被測物的 ? 泳動速率的大小完全取決與該物質(zhì)的分子量 . ? (一 )蛋白質(zhì)分子的解聚 樣品介質(zhì)和聚丙烯酰胺中加入離子去污劑和 ? 強(qiáng)還原劑后，蛋白質(zhì)亞基的電泳遷移率主要取決 ? 于亞基分子量的大小 ,而電荷因素可以被忽略。 ? （ 3）蛋白質(zhì) SDS膠束所帶的負(fù)電荷大大超 過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，消除了 ? 不同分子之間原有的電荷差異 蛋白質(zhì) SDS膠束的特點 （ 1）形狀像一個長橢圓棒 （ 2）短軸對不同的蛋白質(zhì)亞基 SDS膠束基本上是相同的 . （ 3）長軸的長度則與亞基分子量的大小成正比 . ? 膠束在 SDSPAGE系統(tǒng)中的電泳遷移率不再受蛋 ? 白質(zhì)原有電荷的影響，而主要取決于橢圓棒的長軸長度， ? 即蛋白質(zhì)或亞基分子量的大小。這表明，不同蛋白質(zhì)的 SDS復(fù)合物都帶有相 ? 同密度的負(fù)電荷，并具有同樣的構(gòu)象它們的凈電荷量與 ? 摩擦系數(shù) (f由溶液的粘滯性、蛋白質(zhì)分子的大小和形狀決 ? 定 )之比（ q/f）都接近于一個定值而不受各種蛋白質(zhì)原來 ? 電荷、分子大小和形狀的影響，因而，在溶液中，自由遷 ? 移率就表現(xiàn)出一致性；但在一定濃度的凝膠中，由于引入 ? 凝膠的分子篩效應(yīng)，電泳遷移率 mR就成為蛋白質(zhì)分子量 ? 函數(shù) . ? SDS電泳的關(guān)鍵因素 ? (1)溶液中 SDS單體濃度（ 1mmol/L) 大多數(shù)蛋白質(zhì)與 SDS結(jié)合的重量比為 1： ? (2)樣品緩沖液的離子強(qiáng)度（不 ) 低離子強(qiáng)度的溶液中， SDS單體才具有較高的平衡濃度。 ? （二）緩沖系統(tǒng)的選擇 ? 一般情況下，在被分析的蛋白質(zhì)穩(wěn)定的 pH范圍， ? 凡不與 SDS發(fā)生相互作用的緩沖液都可以使用，但 ? 緩沖液的選擇對蛋白質(zhì)的分離和電泳的速度是非常 ? 關(guān)鍵的。 ? *不同分子量范圍的蛋白質(zhì)應(yīng)選用不同的凝膠濃度 . （四）分子量測定 （ relative mobility ， Rf） Rf即用每個帶的遷移距離除以溴酚藍(lán)前沿的遷移距離得到的。 蛋白帶遷移距離 R f= ———————— 溴酚藍(lán)遷移距離
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