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半薄超薄切片技術(shù)ppt課件-在線瀏覽

2025-06-23 12:50本頁面
  

【正文】 ) 脫水 ? 目的 將組織內(nèi)的游離水徹底清除 ,保證包埋介質(zhì) 完全 滲入組織內(nèi)部。 注意事項(xiàng) ? 脫水梯度逐級(jí)進(jìn)行 , 急劇脫水會(huì)引起細(xì)胞收縮 。 ? 更換溶液動(dòng)作要快 。 ? 置換 用脫水劑:環(huán)氧丙烷( Epon812)、二甲苯(石蠟)。 包埋劑在單體狀態(tài)時(shí) (聚合前 )為液體,能夠滲入組織內(nèi),當(dāng)加入某些催化劑,經(jīng)加溫或其他條件,能聚合成固體,以便進(jìn)行超薄切片。 包埋板 1 包埋管 膠囊 常用的包埋劑 Epon812 滲透效果好,切片的圖像對(duì)比度強(qiáng),電子束照射下穩(wěn)定 吸潮性很強(qiáng),潮濕和炎熱的環(huán)境下,樹脂會(huì)變軟 Spurr 黏度低,可較好地滲透具有 硬的木質(zhì)化細(xì)胞壁的植物細(xì)胞 、脂肪含量很高的 內(nèi)胚乳 、高度液泡化的 成熟果實(shí) ,電子束照射下穩(wěn)定 圖像對(duì)比度較弱 Araldite 聚合均勻,收縮量很小,超薄切片可直接沾在沒有支持膜的載網(wǎng)上,電子束照射下十分穩(wěn)定,用重金屬染色時(shí)易著色。 適于低溫包埋,通常用于免疫電鏡樣品的制備。 所有 試劑 要 防潮 ,最好存放在干燥器中; 167。 配包埋劑時(shí),每加入一種試劑要攪拌均勻; 167。 盛放過包埋劑的容器要及時(shí)用丙酮清洗干凈 . 167。 超薄切片 超薄切片機(jī): LEICA ULTRACUT R 超薄切片厚度 : 100nm,一般 5070nm 載網(wǎng)和支持膜 (1)載網(wǎng) (超薄 ) 載網(wǎng) 銅網(wǎng) (常用 ) 不銹鋼網(wǎng) 鎳網(wǎng) (免疫電鏡 ) 直徑: 23mm,厚度: 載網(wǎng)和支持膜 (2) 載網(wǎng)支持膜 膜的要求 :透明無結(jié)構(gòu) ,并能承受電子束的轟擊 . 支持膜的種類 : 火棉膠膜 聚乙烯醇縮甲醛膜 (formvar膜 ) 碳膜 膜的厚度 :10nm~ 20nm 6 超薄切片的染色 目的 : 增強(qiáng)樣品的反差 ,提高圖象的清晰度 . 常用染色劑 : 重金屬鹽 各種染料 常用的染色劑 : 醋酸鈾和檸檬酸鉛。 ▲ 超薄切片染色 (2)超薄切片后染色 醋酸雙氧鈾 檸檬酸鉛雙染 鈾
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